黑磷凝胶复合材料制备方法及修复受损神经的导管技术

本发明专利技术涉及医学生物材料技术领域，具体是指一种黑磷凝胶复合材料制备方法及修复受损神经的导管，一种黑磷凝胶复合材料制备方法，包括以下步骤，以下步骤均在充满氮气的无氧箱中进行，一种黑磷凝胶复合材料制备方法，包括以下步骤，步骤一，制备黑磷溶液，步骤二，制备明胶水凝胶，步骤三，制备黑磷凝胶水凝胶，将步骤二所得物加入步骤三所得物中，混合均匀；步骤四，制备黑磷凝胶复合材料，向步骤三所得物中加入IL

【技术实现步骤摘要】
黑磷凝胶复合材料制备方法及修复受损神经的导管


[0001]本专利技术涉及医学生物材料
，具体是指一种黑磷凝胶复合材料制备方法及修复受损神经的导管。

技术介绍

[0002]周围神经缺损是临床上常见的病症，致残率较高，周围神经受损会引起该神经支配的区域出现感觉障碍、运动障碍和营养障碍，不同部位周围神经受损后产生的临床症状不同，例如面神经受损后，会出现不同程度的面瘫，引起前额皱纹消失、眼睑闭合不全、鼻唇沟平坦、口角偏向健侧等，严重影响患者的生活质量。
[0003]临床上修复周围神经的方法主要包括直接缝合、神经移植、神经转位吻合、神经导管修复等四大类方法，自体神经移植是神经修复的金标准，但有一定的局限性，如神经组织来源有限，造成二次损伤，还可能形成神经瘤，直接缝合仅使用于无张力修复，但是临床上面神经受损后多数会出现较大缺损，在不改变面神经解剖分布的情况下很难实现断端的无张力端端缝创，神经转位吻合术可以避免受损神经张力形成，但转位神经的直径很难保证与受损神经一致，这严重影响了受损神经的恢复，由生物材料制成的神经导管连接神经断端，为神经轴突再生提供通路与屏障，避免了二次损伤，常见的生物导管的材质有生物型材料和高分子材料，高分子材料如如胶原蛋白、丝胶、聚己内酯、壳聚糖，但是单纯的生物导管并不能起到很好的修复神经受损的作用，无法促进神经再生，修复时间慢，恢复时间长，还可能对局部机体产生刺激进而引发局部炎症。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为了解决现有技术不足，提供一种结构巧妙、制备方便、促进M2型巨噬细胞繁殖、修复受损神经的黑磷凝胶复合材料制备方法及修复受损神经的导管。
[0005]为实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种黑磷凝胶复合材料制备方法，其特征在于：包括以下步骤，以下步骤均在充满氮气的无氧箱中进行：步骤一：制备黑磷溶液，准备一个烧杯，称取500ng黑磷晶体颗粒，加入2ml无菌水，研磨30min后，超声24h，超声功率为450W，开/关周期：5/5s，得到黑磷溶液；步骤二：制备明胶水凝胶，准备一个烧杯，称取1.0g明胶颗粒，加入18mL无菌水，加热至100℃，边加热边搅拌，完全溶液后，搅拌均匀，停止加热，边降温边搅拌，冷却降温至37℃，得明胶水凝胶；步骤三： 制备黑磷凝胶水凝胶，将步骤一所得物加入步骤二所得物中，搅拌均匀，得到黑磷凝胶水凝胶；步骤四：分别量取20μl的IL
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4溶液和20μl的fractalkine溶液放入步骤三所得物中，混合搅拌均匀，置于4℃冰箱中15min后凝固，得到黑磷凝胶复合材料。
[0006]本专利技术所述步骤四中，黑磷凝胶复合材料中黑磷浓度为25ng/ml。
[0007]专利技术所述步骤四中，黑磷凝胶复合材料中明胶浓度为50mg/ml。
[0008]本专利技术所述步骤四中，黑磷凝胶复合材料中IL
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4浓度为20ng/ml。
[0009]本专利技术所述步骤四中，黑磷凝胶复合材料中fractalkine浓度为20ng/ml。
[0010]一种修复受损神经的导管，包括神经导管，其特征在于：所述神经导管内设有上述所述的黑磷凝胶复合材料。
[0011]本专利技术由于采用上述结构，具有结构巧妙、制备方便、促进M2型巨噬细胞繁殖、修复受损神经等优点。
附图说明
[0012]图1是本专利技术中对照组和实验组中M1型巨噬细胞标志基因的变化图。
[0013]图2是本专利技术中对照组和实验组中M2型巨噬细胞标志基因的变化图。
[0014]图3为本专利技术中对照组的荧光强度散点图和其检测数据表图。
[0015]图4是本专利技术中实验组加入黑磷凝胶复合材料的荧光强度散点图和其检测数据表图。
[0016]图5是本专利技术中细胞划痕实验中每个细胞培养皿中细胞增殖迁移的示意图。
[0017]图6是本专利技术中免疫印迹实验中每个细胞培养皿中NGF和Actin的变化情况图。
[0018]图7是本专利技术中四个细胞培养皿的Schwann细胞进行了NGF细胞免疫荧光实验，在荧光显微镜下观察到的细胞图像。
[0019]图8是本专利技术是对图7中的细胞图像绿色荧光的强度进行定量分析，得到的分布图。
[0020]图9是本专利技术三组动物实验中每组MBP表达量的示意图。
具体实施方式
[0021]下面结合附图，对本专利技术的具体实施方式作进一步详细描述。
[0022]步骤一：制备黑磷溶液，准备一个烧杯，称取500ng黑磷晶体颗粒，加入2ml无菌水，研磨30min后，超声24h，超声功率为450W，开/关周期：5/5s，得到黑磷溶液；步骤二：制备明胶水凝胶，准备一个烧杯，称取1.0g明胶颗粒，加入18mL无菌水，加热至100℃，边加热边搅拌，完全溶液后，搅拌均匀，停止加热，边降温边搅拌，冷却降温至37℃，得明胶水凝胶；步骤三： 制备黑磷凝胶水凝胶，将步骤一所得物加入步骤二所得物中，搅拌均匀，得到黑磷凝胶水凝胶；步骤四：分别量取20μl的IL
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4溶液和20μl的fractalkine溶液放入步骤三所得物中，混合搅拌均匀，置于4℃冰箱中15min后凝固，得到黑磷凝胶复合材料。
[0023]本专利技术所述步骤四中，黑磷凝胶复合材料中黑磷浓度为25ng/ml。
[0024]专利技术所述步骤四中，黑磷凝胶复合材料中明胶浓度为50mg/ml。
[0025]本专利技术所述步骤四中，黑磷凝胶复合材料中IL
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4浓度为20ng/ml。
[0026]本专利技术所述步骤四中，黑磷凝胶复合材料中fractalkine浓度为20n g/ml。
[0027]一种修复受损神经的导管，包括神经导管，其特征在于：所述神经导管内设有上述所述的黑磷凝胶复合材料。
[0028]以下从实验角度来说明本专利技术的黑磷凝胶复合材料能够诱导巨噬细胞多转化成M2型，少转化成M1型，进而促进Schwann细胞分泌NGF，实现对受损神经的修复。
[0029]第一项实验：黑磷凝胶复合材料能够诱导巨噬细胞多转化成M2型，少转化成M1型，如附图1和附图2，准备两个6cm细胞培养皿，每个细胞培养皿上接种106个细胞，加入4ml培养基，其中一个6cm细胞培养皿作为对照组，不加任何物质，另一个培养皿中加入400ul上述步骤四得到的黑磷凝胶复合材料，对两组进行实时定量基因扩增荧光检测系统分析，实时定量基因扩增荧光检测系统分析是不同分型巨噬细胞表达不同的基因，通过检测这部分不同基因的表达量可以估计不同分型巨噬细胞的数量多少,其中M1型巨噬细胞的标志基因是iNOS和TNF
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α，M2型巨噬细胞的标志基因是ARG1和TGF
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β1，通过实时定量基因扩增荧光检测系统分析，可以看出，图1中M1型巨噬细胞的标志基因iNOS相比对照组下降了60%，M1型巨噬细胞的标志基因TNF
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α相比对照组下降了30%，由此可以看出加入黑磷凝胶复合材料后，本专利技术的黑磷凝胶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黑磷凝胶复合材料制备方法，其特征在于：包括以下步骤，以下步骤均在充满氮气的无氧箱中进行：步骤一：制备黑磷溶液，将黑磷颗粒加入无菌水中，研磨后超声，得到黑磷溶液；步骤二：制备明胶水凝胶，将明胶颗粒加入无菌水中，加热至完全溶解，混合均匀后，得明胶水凝胶；步骤三：制备黑磷凝胶水凝胶，将步骤一所得物加入步骤二所得物中，混合均匀；步骤四：制备黑磷凝胶复合材料，向步骤三所得物中加入IL
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4溶液和fractalkine溶液，混合均匀，低温凝固后，得黑磷凝胶复合材料。2.根据权利要求1所述的一种黑磷凝胶复合材料制备方法，其特征在于：所述步骤四中，黑磷凝胶复合材料中...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙岩，徐聪，崔丽梅，赵赫，王琰，
申请(专利权)人：烟台毓璜顶医院青岛大学附属烟台毓璜顶医院，
类型：发明
国别省市：