一种胎盘组织的细胞组织库的构建方法及其相关产品和应用技术

本发明专利技术公开了一种胎盘组织的细胞组织库的构建方法及其相关产品和应用，涉及细胞组织库构建的技术领域，所述平衡液和冻存液包括：5~300mM蔗糖，体积分数为0.5%~5%的甘油，2.5~25mM肌酸，2.5~25mM异亮氨酸，25~250mM甘露醇，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，和质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液。本发明专利技术提供的冻存液和平衡液能有效减少直接冷冻对为胎盘组织块及其细胞的损伤，提高细胞复苏的产量和效能，能有效保护胎盘中的所有细胞类型和胎盘组织中核酸、蛋白分子如激素等各种生物活性物质，最大程度的保存了胎盘中的有用价值资源。资源。资源。

【技术实现步骤摘要】
一种胎盘组织的细胞组织库的构建方法及其相关产品和应用


[0001]本专利技术涉及细胞组织库构建的
，具体而言，涉及一种胎盘组织的细胞组织库的构建方法及其相关产品和应用。

技术介绍

[0002]国内外基础和应用研究表明，干细胞对健康和医疗的作用是颠覆性的。干细胞和再生医学的研究为广大肿瘤、糖尿病、心血管疾病、帕金森氏病等神经系统疾病及其它多种损伤性和退行性疾病患者带来了希望。建立干细胞资源储存库并开展相关技术研究和应用，将为临床和科研提供充足的干细胞来源和新技术，为干细胞的临床应用打下坚实的基础，必将为提高人类健康水平做出巨大的贡献。
[0003]胎盘，作为一份宝贵的生命资源，是围产组织中干细胞含量最多的，占85%
‑
90%。胎盘组织中含有丰富的MSCs，容易分离，能快速扩增，且具有独特的免疫调节等特性，这使得其成为移植领域和治疗免疫性疾病的理想选择。
[0004]现代研究发现，胎盘组织中含有丰富的多种干细胞和各种生物活性物质。胎盘组织中所含有以MSCs为主兼具其它类别的干细胞，比如造血干/祖细胞。这也是一种重要的干细胞生物资源。除去各类活性细胞本身的临床价值外，胎盘组织中的天然组织结构和各类核酸、蛋白分子如激素等重要活性成分，在临床疾病的诊断、治疗及科研上同样具有重要的意义。胎盘还合成多种激素、酶和细胞因子等，从人类胎盘制备的胎盘血清蛋白、胎盘球蛋白、胎盘多肽注射液是抢救病人的重要生物制品。干制的胎盘，在中药称为紫河车，为有名的滋补药物，可用于辅助治疗支气管哮喘、肺结核病。最近，专利技术专利202011016001.7公布了从胎盘组织中提取热休克蛋白Gp96，可作为多价的肿瘤预防性疫苗。
[0005]目前，行业内干细胞库保存胎盘MSCs的做法是：分离胎盘，再经过原代和传代扩增培养到一定数量MSCs，然后进行深低温保存。中国专利技术专利申请号：202011388141.7（公开号：CN112481203A），中国专利技术专利申请号：201910750354.0（公开号：CN 110592006A）、CN201210044638.6等公开了胎盘间充质干细胞库的构建方法，包括如下步骤：产妇筛查；样本采集；样本检测；样本预处理；细胞分离制备；原代培养；传代培养；细胞检测；细胞冻存；建立可供检索的细胞信息档案；编码入库并上传细胞信息档案。该方法存在以下几种缺点：（1）需要经过培养操作，时间周期长，制备成本高；（2）胎盘中的其他类型的细胞和其它核酸、蛋白分子如激素等各种生物活性物质都将被作为废弃物丢弃，造成了样本资源浪费；（3）冻存和复苏对MSCs冻存后损伤较大，细胞效能较低。
[0006]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供了一种胎盘组织的细胞组织库的构建方法及其相关产品和应用。
[0008]本专利技术是这样实现的：
第一方面，本专利技术实施例提供了一种冻存保护剂，其包括平衡液和/或冻存液。所述平衡液包括的组分及其终浓度如下：5~300mM蔗糖，体积分数为0.5%~5%的甘油，2.5~25mM肌酸，2.5~25mM异亮氨酸，25~250mM甘露醇，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，以及质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液。所述冻存液包括的组分及其终浓度如下：体积分数为5%~10%的DMSO，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，以及质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液。
[0009]第二方面，本专利技术实施例提供了一种用于胎盘组织和/或其有核细胞的试剂盒，其包括：前述实施例所述的冻存保护剂。
[0010]第三方面，本专利技术实施例提供了冻存保护剂在制备用于保存胎盘组织和/或其有核细胞的试剂盒中的应用，所述冻存保护剂为前述实施例所述的冻存保护剂。
[0011]第四方面，本专利技术实施例提供了一种胎盘组织或其有核细胞的冻存方法，其包括：采用前述实施例所述的冻存保护剂对胎盘组织块或其有核细胞进行冻存：将胎盘组织块或其分离消化获得的有核细胞置于冻存液中降温保存；或，将胎盘组织块或其分离消化获得的有核细胞置于平衡液中静置后，再置于冻存液中降温保存。
[0012]第五方面，本专利技术实施例提供了一种胎盘组织的细胞组织库的构建方法，其包括：采用前述实施例所述的冻存方法对胎盘组织块和/或其有核细胞进行冻存，并对冻存后的胎盘组织块和/或其有核细胞进行复苏。
[0013]本专利技术具有以下有益效果：本专利技术优化了用于冻存胎盘组织或其有核细胞的冻存液和平衡液，在冻存之前使用平衡液预处理或者在复苏过程中使用平衡液预处理能够减少冷冻对MSCs的损伤，提高细胞复苏的产量和效能。
[0014]本专利技术提供的冻存试剂以及方法直接冻存胎盘组织块或者胎盘有核细胞，无需经过培养操作，时间周期短，建库成本低。而且保存了胎盘中的所有细胞类型（包括但也不限于人胎盘间充质干细胞、胎盘亚全能干细胞、滋养层细胞，造血干/祖细胞、内皮祖细胞和免疫细胞等）和胎盘组织中核酸、蛋白分子如激素等各种生物活性物质，最大程度的保存了胎盘中的有用价值资源，避免了样本的资源浪费。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0016]图1为本专利技术技术路线图；图2为三种冻存方式MSCs的细胞形态学特征（
×
100）；图3为三种冻存方式下MSCs体外成骨诱导分化染色结果（
×
200）；图4为三种冻存方式下MSCs体外成软骨诱导分化染色结果（
×
200）；图5为三种冻存方式下MSCs体外成脂诱分化染色结果（
×
200）。
具体实施方式
[0017]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0018]首先，本专利技术实施例提供了一种冻存保护剂，其包括平衡液和/或冻存液。
[0019]所述平衡液包括的组分及其终浓度如下：5~300mM蔗糖，体积分数为0.5%~5%的甘油，2.5~25mM肌酸，2.5~25mM异亮氨酸，25~250mM甘露醇，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，以及质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液；所述冻存液包括的组分及其终浓度如下：体积分数为5%~10%的DMSO，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，以及质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液。
[0020]专利技术人经一系列创造性劳动提出并验证了上述平衡液和冻存液对冻存胎盘组织及其细胞的优势，若采用本专利技术的冻存液可以提高干细胞的增殖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种冻存保护剂，其特征在于，其包括平衡液和/或冻存液；所述平衡液包括的组分及其终浓度如下：5~300mM蔗糖，体积分数为0.5%~5%的甘油，2.5~25mM肌酸，2.5~25mM异亮氨酸，25~250mM甘露醇，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，以及质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液；所述冻存液包括的组分及其终浓度如下：体积分数为5%~10%的DMSO，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，以及质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液。2.根据权利要求1所述的冻存保护剂，其特征在于，所述冻存液包括的组分及其终浓度如下：体积分数为5%~10%的DMSO，5~300mM蔗糖，体积分数为0.5%~5%的甘油，2.5~25mM肌酸，2.5~25mM异亮氨酸，25~250mM甘露醇，质量分数为5%~20%的白蛋白或血清，以及质量分数为30%~80%的右旋糖酐40氯化钠注射液。3. 根据权利要求1或2所述的冻存保护剂，其特征在于，所述冻存保护剂还包括消化液，所述消化液包括的组分及其终浓度如下：1U/mL～10U/mL透明质酸酶，2.5U/mL～250U/mL胶原酶，10 U/mL～100U/mL分散酶，5mM～300 mM蔗糖，0.50%～5%甘油，2.5mM～25 mM肌酸，2.5 mM～25 mM异亮氨酸，25 mM～250 mM甘露醇。4.一种用于胎盘组织和/或其有核细胞的试剂盒，其特征在于，其包括：权利要求1~3任一项所述的冻存保护剂。5.一种胎盘组织或其有核细胞的冻存方法，其特征在于，其包括：采用权利要求1~3任一项所述的冻存保护剂对胎盘组织块或其有核细胞进行冻存：将胎盘组织块或其分离消化获得的有核细胞置于冻存液中降温保存；或，将胎盘组织块或...

【专利技术属性】
技术研发人员：武晓云，王黎明，田知海，任宇强，包宏磊，
申请(专利权)人：北京原生元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：