抑制人FAM86B1基因表达的siRNA及FAM86B1低表达的细胞系制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，具体涉及抑制人FAM86B1基因表达的siRNA及FAM86B1低表达的细胞系。本发明专利技术公开的siRNA能够抑制人胶质瘤细胞中FAM86B1基因的表达。利用所述siRNA构建FAM86B1低表达的人胶质瘤细胞模型，研究FAM86B1在人胶质瘤发生发展中的重要作用，有助于揭示人胶质瘤形成的潜在机制，为胶质瘤的临床治疗提供有价值的依据。临床治疗提供有价值的依据。

【技术实现步骤摘要】
抑制人FAM86B1基因表达的siRNA及FAM86B1低表达的细胞系


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及抑制人FAM86B1基因表达的siRNA及FAM86B1低表达的细胞系。

技术介绍

[0002]FAM86B1(序列相似性家族86成员B1)是一种蛋白质编码基因，当前已有研究证明其能够启动甲基转移酶活性，参与甲基化过程，然而其在人类胶质母细胞瘤的发生发展中的作用机制还并不明确。
[0003]人类胶质瘤细胞系U251在胶质母细胞瘤的研究中常用作实验模型，可用于提取肿瘤干细胞以及胶质细胞瘤发展机制、药物抗胶质细胞瘤生长的研究等，适合于基因敲除、基因敲低和基因敲入，是基因编辑领域的热门细胞系。
[0004]人类胶质母细胞瘤细胞系U
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87具有上皮形态，可以在裸鼠体内产生与胶质母细胞瘤一致的恶性肿瘤，是最常见的脑肿瘤研究模型。除了常用于脑癌研究，U
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87细胞还广泛应用于生物医药产业，如病理生理学研究、药物筛选、癌症药物的研究等，具有广阔的市场前景。
[0005]小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)，又称沉默RNA或短干扰RNA，为长度20～25个碱基对的双链RNA分子，它通过识别互补的靶基因mRNA，诱导其发生降解，从而抑制靶基因的表达。siRNA能够应用于临床，达到治疗目的的首要前提是实现靶组织或靶细胞的有效递送。当前主要有两种递送方式，一为裸siRNA或化学修饰siRNA的直接递送，包括工程化纳米粒子、化学基团修饰、蛋白质或多肽包被后递送等；二为借助基因工程病毒载体的递送，即利用编码短发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)基因的慢病毒、腺病毒、腺相关病毒感染细胞，在胞内转录生成siRNA。使用病毒载体的最大优势是单次给药之后可获得长期RNA干扰效应。基于siRNA互补已知序列靶基因的特异性、可修饰性、高干扰效率等优势，siRNA已逐渐成为研究基因功能与药物靶点的重要工具。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供抑制人FAM86B1基因表达的siRNA及FAM86B1低表达的细胞系。本专利技术提供了抑制人FAM86B1基因表达的三个siRNA，并构建了FAM86B1基因低表达的人胶质瘤U251与U87细胞系。
[0007]本专利技术提供了siRNA，其正义链具有如SEQ ID NO：1～3任一项所示的核酸序列；其反义链具有如SEQ ID NO：4～6任一项所示的核酸序列。
[0008]具体的，所述siRNA的正义链和反义链分别具有如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：4所示的核酸序列；或
[0009]其正义链和反义链分别具有如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：5所示的核酸序列；或
[0010]其正义链和反义链分别具有如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：6所示的核酸序列。
[0011]本专利技术针对人源FAM86B1的序列，设计了三组靶向该基因的双链siRNA，将所述三
组siRNA分别转染到细胞中，发现三组siRNA对FAM86B1有不同程度的干扰。
[0012]因此本专利技术提供了所述siRNA在制备抑制FAM86B1表达的试剂中的应用。
[0013]本专利技术提供了一种抑制FAM86B1表达的试剂，其包括本专利技术所述的siRNA以及可接受的助剂或载体。所述助剂包括但不限于催化剂、引发剂、乳化剂、分散剂、阻聚剂、终止剂、氧化剂、分子量调节剂、扩链剂、中和剂、脱水剂、溶剂、稀释剂或溶剂。所述载体包括但不限于用于病毒包装的辅助载体、用于噬菌体包装的辅助载体，和/或用于真核或原核宿主细胞基因组整合的辅助载体，本专利技术对此不做限定；
[0014]本专利技术提供了所述siRNA或所述试剂在制备改善和/或治疗胶质母细胞瘤的药物中的应用。
[0015]本专利技术提供了一种改善和/或治疗胶质母细胞瘤的药物，其包括本专利技术所述的siRNA或所述的试剂，以及药学上可接受的辅料。所述药学上可接受的辅料包括但不限于稀释剂、吸收剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、包衣材料、溶剂、pH调节剂、缓冲剂、抗氧化剂、金属离子螯合剂、抑菌剂或等渗调节剂。
[0016]本专利技术提供的药物，其剂型包括但不限于溶液型、胶体溶液型、乳剂型、混悬性、气体分散型、微粒分散性或固体分散型。
[0017]本专利技术还提供了治疗胶质母细胞瘤的方法，包括给予本专利技术所述的药物。
[0018]本专利技术提供了所述siRNA在构建FAM86B1低表达的细胞模型中的应用。
[0019]本专利技术提供了FAM86B1低表达的细胞系，其转染有本专利技术所述的siRNA。具体的，所述细胞为人胶质瘤U251细胞和/或U87细胞。利用本专利技术构建的FAM86B1低表达的细胞模型，能够研究FAM86B1在人胶质瘤发生发展中的重要作用，有助于揭示人胶质瘤形成的潜在机制，为胶质瘤的疾病治疗提供有用的线索。
[0020]本专利技术还提供了所述FAM86B1低表达细胞系的制备方法，包括将本专利技术所述的siRNA转染到U251细胞和/或U87细胞中。其中，所述转染的方式包括化学转染、电穿孔、磷酸钙共沉淀或显微注射。具体的，在本专利技术的实施例中，通过化学转染方式将siRNA转染到细胞中。
[0021]本专利技术将三组siRNA：FAM86B1 siRNA1、FAM86B1 siRNA2与FAM86B1siRNA3分别转染到U251细胞和U87细胞中，培养一段时间后检测这两个细胞中FAM86B1的表达量，结果表明FAM86B1 mRNA的表达量均显著下降，其中FAM86B1 siRNA2对人胶质瘤U251细胞的干扰效果最明显，FAM86B1siRNA1对人胶质瘤U87细胞的干扰效果最明显。
[0022]本专利技术利用RNAi技术对人FAM86B1基因进行干扰，构建的人FAM86B1低表达的人胶质瘤细胞系，为临床上干预人类胶质瘤疾病与治疗带来了新的希望；此外，本专利技术利用RNAi技术构建的人FAM86B1低表达的人胶质瘤细胞系，有助于后续进行更深一步的研究以探索FAM86B1与人类胶质瘤的发生发展的分子机制；为治疗人类胶质瘤疾病提供有用的线索；因此本专利技术具有重要的应用价值。
附图说明
[0023]图1示RT
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qPCR鉴定FAM86B1 siRNA1、FAM86B1 siRNA2和FAM86B1siRNA3对FAM86B1基因的干扰效果(siRNA在转染体系中的终浓度为50nM)；
[0024]图2示RT
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qPCR鉴定FAM86B1 siRNA1、FAM86B1 siRNA2和FAM86B1siRNA3对FAM86B1
基因的干扰效果(siRNA在转染体系中的终浓度为100nM)。
具体实施方式
[0025]本专利技术提供了抑制人FAM86B1基因表达的siRNA及FAM86B1低表达的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.siRNA，其正义链具有如SEQ ID NO：1～3任一项所示的核酸序列；其反义链具有如SEQ ID NO：4～6任一项所示的核酸序列。2.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于，其正义链和反义链分别具有如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：4所示的核酸序列；或其正义链和反义链分别具有如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：5所示的核酸序列；或其正义链和反义链分别具有如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：6所示的核酸序列。3.权利要求1或2所述的siRNA在制备抑制FAM86B1表达的试剂中的应用。4.抑制FAM86B1表达的试剂，其特征在于，包括权利要求1或2所述的siRNA以及可接受的助剂或载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢水林，李伍新，
申请(专利权)人：广东明珠生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：