一种抗LILRB4单克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体提供了一种抗LILRB4单克隆抗体，HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No:1、SEQ ID No:2和SEQ IDNo:3所示，LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No:4、SEQ ID No:5和SEQ ID No:6所示，本发明专利技术提供的抗LILRB4单克隆抗体与LILRB4抗原具有较高的结合能力，能够有效抑制LILRB4抗原与其配体复合物的结合，从而阻止下游NF

【技术实现步骤摘要】
一种抗LILRB4单克隆抗体


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种抗LILRB4单克隆抗体。

技术介绍

[0002]急性髓系白血病(AML)是最常见的成人急性白血病，其特征是骨髓、血液和其他组织中未成熟的髓系造血细胞的异常克隆增殖，其临床表现为贫血、出血、感染和发热、脏器浸润、代谢异常等，多数病例病情急重，预后凶险，如不及时治疗常可危及生命。作为一种常见的血液恶性肿瘤，AML占全部急性白血病的70％左右，是国内十大高发恶性肿瘤之一，也是35岁以下发病率及死亡率最高的恶性肿瘤。
[0003]白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员4(LILRB4)作为LILRB家族成员，结构上包含两个细胞外免疫球蛋白样结构域及三个细胞内ITIM结构域。LILRB4在单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞等髓样抗原呈递细胞(APCs)中选择性表达。LILRB4特异性高表达在M4和M5型AML细胞上，并且高表达LILRB4的病人生存率显著降低。载脂蛋白E(ApoE)结合并激活LILRB4，募集SHP
‑
2，调控核因子κB(NF
‑
κB)信号通路，从而刺激尿激酶受体(uPAR)和精氨酸酶1(ARG1)的表达，进一步抑制T细胞增殖，促进组织浸润。抗LILRB4抗体能够阻断LILRB4与ApoE的相互作用，抑制NF
‑
κB信号通路，降低ARG1表达，从而促进T细胞增殖并减少组织浸润。
[0004]目前，以明生物，恩格姆生物制药公司和华夏英泰(北京)生物技术有限公司均在研发靶向LILRB4的单克隆抗体药物，目前均处在临床I期阶段。因此抗LILRB4单克隆抗体作为首款有望用于AML的T细胞激活剂，将为全球AML和慢性粒单核细胞白血病(CMML)病患带来创新治疗方案，具有非常大的市场潜力。

技术实现思路

[0005]本专利技术通过对免疫文库的筛选，得到了可以与LILRB4特异性结合且具有较高生物学活性的抗LILRB4单克隆抗体。
[0006]本专利技术具体技术方案如下：
[0007]本专利技术提供了一种抗LILRB4单克隆抗体，包括：
[0008](a)重链互补决定区HCDR1，其氨基酸序列如SEQ ID No:1所示；
[0009](b)重链互补决定区HCDR2，其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示；
[0010](c)重链互补决定区HCDR3，其氨基酸序列如SEQ ID No:3所示；
[0011](d)轻链互补决定区LCDR1，其氨基酸序列如SEQ ID No:4所示；
[0012](e)轻链互补决定区LCDR2，其氨基酸序列如SEQ ID No:5所示；
[0013](f)轻链互补决定区LCDR3，其氨基酸序列如SEQ ID No:6所示。
[0014]进一步的，所述抗LILRB4单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:8所示。
[0015]进一步的，所述抗LILRB4单克隆抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区选自鼠的IgG1型、IgG2a型、IgG2b型或IgG3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如SEQ ID No:13所示的鼠源C
k
型的恒定区；所述IgG1型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:9所示，所述IgG2a型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:10所示，所述IgG2b型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:11所示，所述IgG3型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:12所示。
[0016]进一步的，所述抗LILRB4单克隆抗体为Fab、F(ab)2、Fv或ScFv中的一种或几种组合。
[0017]本专利技术进一步的提供了一种蛋白，所述蛋白包含所述的抗LILRB4单克隆抗体。
[0018]本专利技术进一步的提供了一种核苷酸分子，所述核苷酸分子编码所述的抗LILRB4单克隆抗体。
[0019]本专利技术进一步的提供了一种重组DNA表达载体，所述重组DNA表达载体包含所述的核苷酸分子。
[0020]本专利技术进一步的提供了一种转染所述的重组DNA表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞包括原核细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞；
[0021]优选的，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞为HEK293细胞、CHO细胞或NS0细胞。
[0022]本专利技术还提供了一种药物，所述药物包含所述的抗LILRB4单克隆抗体。
[0023]本专利技术还提供了所述的抗LILRB4单克隆抗体在制备治疗癌症药物中的应用；
[0024]所述癌症包括急性髓系白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、母细胞性浆细胞样树状突细胞肿瘤、乳腺癌、肺癌或前列腺癌中的一种或多种。
[0025]本专利技术的有益效果如下：本专利技术提供的抗LILRB4的单克隆抗体与LILRB4抗原具有较高的结合能力，能够有效抑制LILRB4抗原与其配体复合物的结合，从而阻止下游NF
‑
κB信号通路的激活和ARG1的释放，促进T细胞增殖，及抑制组织浸润。此外，本专利技术筛选得到的抗LILRB4单克隆抗体能够用于治疗癌症，癌症包括但不限于急性髓系白血病(AML)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多发性骨髓瘤(MM)、母细胞性浆细胞样树状突细胞肿瘤(BPDCN)、乳腺癌、肺癌或前列腺癌。
附图说明
[0026]图1为本专利技术实施例2中pScFv
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Disb
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HS载体的质粒图谱；
[0027]图2为本专利技术实施例3中梯度稀释ELISA抗LILRB4单克隆抗体相对亲和力图；
[0028]图3为本专利技术实施例5中载体pTSE的图谱；
[0029]图4为本专利技术实施例5中抗LILRB4单克隆抗体分子的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图；
[0030]图5为本专利技术实施例6中抗LILRB4单克隆抗体与LILRB4的结合能力图；
[0031]图6为本专利技术实施例8中抗LILRB4单克隆抗体与人单核细胞白血病细胞(THP
‑
1)表面LILRB4的结合能力图；
[0032]图7本专利技术实施例9中抗LILRB4单克隆抗体与ApoE竞争结合LILRB4实验图；
[0033]图8为本专利技术实施例10中抗LILRB4单克隆抗体抑制THP
‑
1分泌ARG1实验图。
具体实施方式
[0034]为了更加容易理解本专利技术，描述实施例之前，先对本专利技术某些技术和科学术语作以下说明：
[0035]本文所使用的术语“抗体”，包含全抗体及其任一抗原结合片段，抗体包括鼠源抗体、人源化抗体、双特异抗体或嵌合抗体，抗体也可以是Fab、F(ab)2、Fv或ScFv(单链抗体)，抗体可以是天然存在的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗LILRB4单克隆抗体，其特征在于，包括：(a)重链互补决定区HCDR1，其氨基酸序列如SEQ ID No:1所示；(b)重链互补决定区HCDR2，其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示；(c)重链互补决定区HCDR3，其氨基酸序列如SEQ ID No:3所示；(d)轻链互补决定区LCDR1，其氨基酸序列如SEQ ID No:4所示；(e)轻链互补决定区LCDR2，其氨基酸序列如SEQ ID No:5所示；(f)轻链互补决定区LCDR3，其氨基酸序列如SEQ ID No:6所示。2.如权利要求1所述的抗LILRB4单克隆抗体，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:8所示。3.如权利要求2所述的抗LILRB4单克隆抗体，其特征在于，还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区选自鼠的IgG1型、IgG2a型、IgG2b型或IgG3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如SEQ ID No:13所示的鼠源C
k
型的恒定区；所述IgG1型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:9所示，所述IgG2a型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:10所示，所述IgG2b型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:11所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：白义，
申请(专利权)人：北京东方百泰生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：