抗PD-1抗体和融合蛋白制造技术

本文提供了可用于结合并抑制程序性死亡1(PD

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PD
‑
1抗体和融合蛋白
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年6月23日提交的美国临时专利申请号63/043,114和2020年11月9日提交的美国临时专利申请号63/111,459的优先权权益，将其通过引用以其整体并入本文。


[0002]本公开文本总体上涉及分子生物学和医学领域。更具体地，本公开文本提供了融合蛋白，所述融合蛋白包含与IL
‑
15多肽连接的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，所述IL
‑
15多肽进而与包含IL
‑
15Rαsushi结构域的IL
‑
15受体α(IL
‑
15Rα)多肽连接。此外，本公开文本提供了与PD
‑
1特异性结合的抗体及其抗原结合片段以及包含此类抗PD
‑
1抗体及其PD
‑
1结合片段的融合蛋白。还公开了用于治疗疾病的包含所述抗体融合物或抗体的治疗组合物。

技术介绍

[0003]PD
‑
1是一种具有286个氨基酸的55KD的I型跨膜蛋白，其含有近膜免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)和远膜基于酪氨酸的开关基序(ITSM)。PD
‑
1胞质结构域含有两个酪氨酸，其中最近的酪氨酸(小鼠PD
‑
1中的VAYEEL)位于ITIM内。人PD
‑
1蛋白和鼠PD
‑
1蛋白共享约60％氨基酸同一性，具有四个潜在的N
‑
糖基化位点，并且定义Ig
‑
V结构域的残基是保守的。在人直系同源物与鼠直系同源物之间，围绕胞质区中的ITIM和C末端酪氨酸的ITIM样基序也是保守的。PD
‑
1是CD
‑
28受体家族的成员，其主要在外周组织和肿瘤微环境中的成熟T细胞上表达。PD
‑
1也在其他非T细胞子集(包括B细胞、专职性抗原呈递细胞(APC)和自然杀伤(NK)细胞)上表达。
[0004]PD
‑
1的配体是B7家族成员PD
‑
L1(也称为B7
‑
H1和CD274)和PD
‑
L2(也称为B7
‑
DC和CD273)。PD
‑
L1主要在淋巴组织和非淋巴组织(如CD4和CD8 T细胞、巨噬细胞谱系细胞、外周组织)以及肿瘤细胞、病毒感染的细胞和自身免疫组织细胞上表达。然而，PD
‑
L2的表达比PD
‑
L1更受限，仅在巨噬细胞和激活的树突细胞上表达。PD
‑
1配体在许多人类癌症(包括黑色素瘤、神经胶质瘤、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、白血病、胰腺癌、肾细胞癌和肝细胞癌)中表达，并且可能在几乎所有癌症中均是可诱导的。PD
‑
1与其配体之间的相互作用导致T细胞激酶ZAP70的去磷酸化和失活以及SHP2的募集。SHP2直接使PI3K去磷酸化，这抑制Aktin的下游激活，引起肿瘤浸润淋巴细胞减少和T细胞受体介导的增殖减少，导致免疫逃避。抑制PD
‑
1与PD
‑
L1之间的相互作用逆转免疫抑制，并且当PD
‑
1与PD
‑
L2的相互作用也被阻断时，所述作用可能是加性的。
[0005]几种商业化抗PD
‑
1抗体目前用于治疗涉及PD
‑
1介导的免疫抑制的疾病。然而，仅一部分患者对这些疗法反应良好。根据适应证和其他因素，患者对每种单药疗法的典型反应率的范围为从10％至30％。这种缺乏反应的一个可能原因可能是不存在炎性肿瘤微环境(TME)，包括激活的抗肿瘤CD8
+
和CD4
+
T细胞以及其他效应子(如NK细胞)。
[0006]涉及PD
‑
1抗体与各种细胞因子(如IL
‑
2、IL
‑
15、IL
‑
21、肿瘤坏死因子(TNF)和粒细
胞
‑
巨噬细胞集落刺激因子(GM
‑
CSF))的组合疗法可以在治疗癌症和感染方面具有一些功效。然而，这些疗法受全身性毒性的限制，全身性毒性既与获得功效所需的高细胞因子血液浓度相关，又与所施用的细胞因子对受影响的细胞和组织缺乏特异性相关。
[0007]IL
‑
15是一种具有114个氨基酸的12.5KD的糖蛋白，并且属于四α
‑
螺旋束细胞因子家族，所述家族还包括IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
7、IL
‑
9、粒细胞集落刺激因子(G
‑
CSF)和GM
‑
CSF。IL
‑
15由巨噬细胞、树突细胞和单核细胞分泌。IL
‑
15可以刺激中枢记忆CD8细胞发挥免疫，而对其他T细胞无调节作用。此外，IL
‑
15可以激活NK细胞以及效应和记忆CD8 T细胞并且可以拯救T细胞免于调节性T细胞(Treg)诱导的细胞凋亡。与其他细胞因子相比，以较高剂量施用IL
‑
15也与较低的诱导全身性毒性的风险相关。人IL
‑
15可以是可溶性的或膜结合的。膜结合的IL
‑
15(其是IL
‑
15的主要形式)通过IL
‑
15与细胞膜直接结合而形成或通过膜结合的IL
‑
15R受体呈递IL
‑
15而形成。
[0008]IL
‑
15受体由以下三个亚基构成：IL
‑
15Rα、IL
‑
15Rβ和IL
‑
15Rγ。在与T细胞和NK细胞上的功能性IL
‑
15Rβ和γ单元结合前，IL
‑
15典型地与APC上表达的IL
‑
15受体α形成复合物。IL
‑
15可以以一定亲和力(K
a
＝1.1011M
‑1)与IL
‑
15Rα受体单独结合。它还可以以较低亲和力(K
a
＝1.109M
‑1)与IL
‑
15Rβγc信号传导复合物结合。IL
‑
15Rα的sushi结构域(29.5KD)在IL
‑
15与IL
‑
15Rα的复合物形成中起关键作用。
[0009]全身性IL
‑
15治疗的局限之一是它的体内半衰期非常短。因此，需要产生具有较长体内半衰期同时保留其调节免疫应答的能力的IL
‑
15/IL
‑
15Rα的合适的免疫刺激形本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区和所述轻链可变区中的每一个包含CDR1、CDR2和CDR3，并且其中：所述重链可变区的CDR1(CDR1H)的序列包含SEQ ID NO:21的序列；所述重链可变区的CDR2(CDR2H)的序列包含SEQ ID NO:22的序列；所述重链可变区的CDR2(CDR3H)的序列包含SEQ ID NO:23的序列；所述轻链可变区的CDR1(CDR1L)的序列包含序列RX
13
X
14
X
15
X
16
IX
17
X
18
WX
19
X
20
(SEQ ID NO:135)；其中X
13
是A或V；其中X
14
是S或G；其中X
15
是Q、E或R；其中X
16
是G、S、D或N；其中X
17
是G、S或N；其中X
18
是S、I、R、T、K、P、N、H或V；其中X
19
是L或V；并且其中X
20
是G或A；并且所述轻链可变区的CDR2(CDR2L)的序列包含序列X
21
AX
22
X
23
X
24
X
25
X
26
(SEQ ID NO:136)；并且其中X
21
是S、D、E或A；其中X
22
是S或K；其中X
23
是S、N、T、R或D；其中X
24
是L或V；其中X
25
是Q、E或H；并且其中X
26
是S、N、A、R、P或T；并且所述轻链可变区的CDR3(CDR3L)的序列包含序列QQX
27
X
28
SFPX
29
X
30
(SEQ ID NO:137)；其中X
27
是A或G；其中X
28
是N、D或Y；其中X
29
是F或L；并且其中X
30
是A或T。2.根据权利要求1所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中：CDR1H的序列包含SEQ ID NO:21的序列；CDR2H的序列包含SEQ ID NO:22的序列；CDR3H的序列包含SEQ ID NO:23的序列；CDR1L的序列包含SEQ ID NO:96的序列；CDR2L的序列包含SEQ ID NO:97的序列；并且CDR3L的序列包含SEQ ID NO:82的序列。3.根据权利要求2所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中：a.所述重链可变区包含SEQ ID NO:24或与SEQ ID NO:24至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；并且
b.所述轻链可变区包含SEQ ID NO:98或与SEQ ID NO:98至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列。4.根据权利要求1所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中：a.CDR1H、CDR2H和CDR3H的序列包含SEQ ID NO:21、22和23；并且b.CDR1L、CDR2L和CDR3L的序列包含：i.SEQ ID NO:45、46和47；ii.SEQ ID NO:66、67和68；iii.SEQ ID NO:70、67和71；iv.SEQ ID NO:73、74和75；v.SEQ ID NO:77、78和47；vi.SEQ ID NO:80、81和82；vii.SEQ ID NO:77、78和84；viii.SEQ ID NO:77、86和47；ix.SEQ ID NO:88、89和47；x.SEQ ID NO:66、67和47；xi.SEQ ID NO:80、92和75；xii.SEQ ID NO:80、94和71；xiii.SEQ ID NO:99、100和47；xiv.SEQ ID NO:102、103和104；xv.SEQ ID NO:106、103和47；xvi.SEQ ID NO:108、103和47；xvii.SEQ ID NO:110、111和75；xviii.SEQ ID NO:77、103和113；xix.SEQ ID NO:77、111和47；xx.SEQ ID NO:116、67和47；xxi.SEQ ID NO:118、119和47；xxii.SEQ ID NO:80、78和47；xxiii.SEQ ID NO:122、103和47；xxiv.SEQ ID NO:124、125和75；xxv.SEQ ID NO:127、38和68；xxvi.SEQ ID NO:129、130和47；或xxvii.SEQ ID NO:132、133和75。5.根据权利要求4所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中：a.所述重链可变区包含i.SEQ ID NO:24，或ii.与SEQ ID NO:24至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；并且b.所述轻链可变区包含i.SEQ ID NO:48、69、72、76、79、83、85、87、90、91、93、95、101、105、107、109、112、114、
115、117、120、121、123、126、128、131或134，或ii.与SEQ ID NO:48、69、72、76、79、83、85、87、90、91、93、95、101、105、107、109、112、114、115、117、120、121、123、126、128、131或134中的任一个至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列。6.一种抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区和所述轻链可变区中的每一个包含CDR1、CDR2和CDR3，并且其中：CDR1H的序列包含SEQ ID NO:17的序列；CDR2H的序列包含SEQ ID NO:18的序列；CDR3H的序列包含SEQ ID NO:19的序列；CDR1L的序列包含序列RSSX1SLLX2SNGX3X4YLD(SEQ ID NO:62)，其中X1是Q或E；其中X2是H或Y；其中X3是Y或N；并且其中X4是T或N；CDR2L的序列包含序列X5X6SX7X8X9X
10
(SEQ ID NO:63)，其中X5是L、Q或E；其中X6是S、A或V；其中X7是H、N、T或S；其中X8是R或L；其中X9是G、A或H；并且其中X
10
是S或T；并且CDR3L的序列包含序列MQGX
11
X
12
WPYT(SEQ ID NO:64)，其中X
11
是A、T或S；并且其中X
12
是H或R。7.根据权利要求6所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中：CDR1H的序列包含SEQ ID NO:17的序列；CDR2H的序列包含SEQ ID NO:18的序列；CDR3H的序列包含SEQ ID NO:19的序列；CDR1L的序列包含SEQ ID NO:41的序列；CDR2L的序列包含SEQ ID NO:49的序列；并且CDR3L的序列包含SEQ ID NO:50的序列。8.根据权利要求7所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中：a.所述重链可变区包含SEQ ID NO:20或与SEQ ID NO:20至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；并且b.所述轻链可变区包含SEQ ID NO:51或与SEQ ID NO:51至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列。9.根据权利要求6所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中：a.CDR1H、CDR2H和CDR3H的序列包含SEQ ID NO:17、18和19；并且
b.CDR1L、CDR2L和CDR3L的序列包含：i.SEQ ID NO:41、42和43；ii.SEQ ID NO:41、52和53；iii.SEQ ID NO:41、55和56；或iv.SEQ ID NO:58、59和60。10.根据权利要求9所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中：a.所述重链可变区包含i.SEQ ID NO:20，或ii.与SEQ ID NO:20至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；并且b.所述轻链可变区包含i.SEQ ID NO:44、54、57或61，或ii.与SEQ ID NO:44、54、57或61中的任一个至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列。11.一种抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，所述抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段与根据前述权利要求中任一项所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段结合PD
‑
1上相同的表位。12.根据前述权利要求中任一项所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是嵌合抗体、CDR移植抗体或人源化抗体或其抗原结合片段。13.根据前述权利要求中任一项所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是多特异性抗体或双特异性抗体或其抗原结合片段。14.根据权利要求13所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是包含与PD
‑
L1或PD
‑
L2结合的互补区的双特异性抗体。15.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是scFv、Fv、Fab'、Fab、F(ab')2或双抗体。16.根据前述权利要求中任一项所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是IgG类免疫球蛋白。17.根据权利要求16所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段具有同种型IgG4。18.根据前述权利要求中任一项所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段在重链的恒定区中含有S241P取代。19.根据前述权利要求中任一项所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是去糖基化的。20.根据前述权利要求中任一项所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段在重链中缺乏C末端赖氨酸。21.根据前述权利要求中任一项所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含第一重链恒定区和第二重链恒定区，并且其中所述抗体或其抗原结合片段在第一重链和第二重链的CH3结构域中包含至少一个引起异二聚化的修饰。22.根据权利要求21所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中第一重链的CH3结构域中的所述修饰与第二重链的CH3结构域中的所述修饰不同。
23.根据权利要求21或22所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述第一重链包含选自以下的氨基酸取代：T350V、L351Y、S354C、S364H、T366Y、T366W、F405A、Y407V(Kabat EU索引编号)。24.根据权利要求21
‑
23中任一项所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中臼修饰包括选自以下的氨基酸取代：Y349C、T350V、T366L、T366S、L368A、K392L、T394W、Y407V、Y407T(Kabat EU索引编号)。25.根据权利要求22
‑
24中任一项所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中：a.所述第一重链的CH3结构域包含氨基酸取代S354C和T366W中的一个或多个，并且所述第二重链的CH3结构域包含氨基酸取代Y349C、T366S、L368A和Y407V中的一个或多个；b.所述第一重链的CH3结构域包含氨基酸取代T350V、L351Y、F405A和Y407V中的一个或多个，并且所述第二重链的CH3结构域包含氨基酸取代T350V、T366L、K392L和T394W中的一个或多个；或者c.所述第一重链的CH3结构域包含氨基酸取代L351Y、F405A和Y407V中的一个或多个，并且所述第二重链的CH3结构域包含氨基酸取代T366L、K392L和T394W中的一个或多个(全部Kabat EU索引编号)。26.根据前述权利要求中任一项所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中Fc结构域包含减少与Fc受体的结合或降低效应子功能的一个或多个氨基酸取代。27.根据权利要求26所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述一个或多个氨基酸取代位于选自以下的一个或多个位置处：L234、L235和P329(Kabat EU索引编号)。28.根据权利要求27所述的抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其中所述一个或多个氨基酸取代选自L234A、L235A和P329G(Kabat EU...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆丹，Z，
申请(专利权)人：卡德门企业有限公司，
类型：发明
国别省市：