用于认证阿胶和相关明胶的肽标志物制造技术

本文提供了一种使用在动物皮明胶水解产物中发现的肽标志物来认证动物皮明胶的方法。所述方法可用于认证源自驴皮、马皮、猪皮和牛皮的动物皮明胶。皮的动物皮明胶。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于认证阿胶和相关明胶的肽标志物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年8月4日提交的美国临时专利申请序列号63/061,165；和2021年7月29日提交的美国非临时专利申请序列号17/443,963的优先权。其公开内容通过引用以其整体并入本文。


[0003]本公开总体涉及可用于鉴定和/或认证动物皮，例如来自驴、马、猪和牛的那些动物皮的肽标志物，及其使用方法。

技术介绍

[0004]阿胶(中药：阿胶)是由驴(Equus asinus)皮制成的明胶。它在中国被广泛用作食品保健品。阿胶具有提高免疫力、补血养血、延缓衰老等多种功效。2020年全球阿胶市场销售额超过60亿美元。然而，由于需求增长快于供应，市场上经常发现假冒产品，特别是牛皮、猪皮和马皮制成的明胶。与中国人使用了2000多年的阿胶不同，这些假冒产品的安全性和有效性不为人知，因此备受关注。
[0005]区分假阿胶和真阿胶通常是在肽标志物的基础上进行的。然而，目前使用的认证肽标志物都不够特异，因为它们都是基于数据库的蛋白质组学发现的。有问题的是，驴(Equus asinus)和马(Equus caballus)共享许多蛋白质标志物。肌红蛋白肽HPGDFGADAQGAMTK(SEQ ID NO:1)在Uniprot数据库中被认为是马特异性的；但是，它也存在于阿胶中。中国药典中指定用于认证阿胶的肽GPPGAAGPPGPR(SEQ ID NO:2)也存在于马明胶中。更重要的是，许多肽没有记录在任何这些蛋白质数据库中。例如猪COL1A1的信息缺失。因此，没有驴特异性肽标志物。应寻找一种或更多种可靠、特异的肽标志物来区分阿胶与所有其他明胶，或许可以通过蛋白质组学以外的另一种方式。
[0006]因此，需要一种改进的方法来鉴定阿胶和相关动物皮明胶。

技术实现思路

[0007]因此，本公开的一个目的是提供一种改进的鉴定动物皮明胶的方法。
[0008]在第一方面，本文提供了一种鉴定怀疑包含动物皮明胶的样品中的动物皮明胶的方法，所述方法包括：提供所述样品的水解产物；使用质谱法分析所述样品的水解产物；确定所述样品的水解产物是否包含一种或更多种肽标志物，其中所述一种或更多种肽标志物具有选自以下的观察到的质荷比(m/z)：518.2695
±
0.1(DM1)、675.6632
±
0.1(DM2)、761.3672
±
0.1(DM3)、766.6952
±
0.1(DM4)、774.0218
±
0.1(DM5)、784.3392
±
0.1(DM6)、854.0603
±
0.1(DM7)、386.2108
±
0.1(HM1)、596.8454
±
0.1(CM1)、604.8556
±
0.1(CM2)、766.8957
±
0.1(CM3)、419.2446
±
0.1(PM1)、490.5942
±
0.1(PM2)、693.8432
±
0.1(PM3)、713.6902
±
0.1(PM4)、773.9237
±
0.1(PM5)和774.9121
±
0.2(PM6)；基于所述样品的水解产物是否包含所述一种或更多种肽标志物来鉴定所述样品是否包含动物皮明胶，其中所述
动物皮明胶包括驴皮明胶、马皮明胶、牛皮明胶、猪皮明胶或其混合物。
[0009]在某些实施方案中，所述方法进一步包括水解样品从而形成样品的水解产物。
[0010]在某些实施方案中，所述方法进一步包括使用蛋白酶水解样品从而形成样品的水解产物。
[0011]在某些实施方案中，所述方法还包括使用选自胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、赖氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K、钙蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的蛋白酶水解样品，从而形成样品的水解产物。
[0012]在某些实施方案中，所述方法进一步包括使用胰蛋白酶水解样品从而形成样品的水解产物。
[0013]在某些实施方案中，质谱法是串联质谱法(MS/MS)并且还包括液相色谱法。
[0014]在某些实施方案中，质谱法包括高效液相色谱法(HPLC
‑
MS/MS)或超高效液相色谱法(UPLC
‑
MS/MS)。
[0015]在某些实施方案中，确定样品的水解产物是否包含一种或更多种肽标志物的步骤还包括确定一种或更多种肽标志物中的每一种是否具有预测的液相色谱保留时间，其中预测的液相色谱保留时间通过测量标准样品的保留时间来确定，其中标准样品的每一个包含一种或更多种肽标志物中的一种。
[0016]在某些实施方案中，具有观察到的m/z的一种或更多种肽标志物选自：DM1、DM2、DM3、DM4、DM5、DM6和DM7。
[0017]在某些实施方案中，确定样品的水解产物是否包含一种或更多种肽标志物的步骤包括确定样品的水解产物是否包含2种或更多种、3种或更多种、4种或更多种、5种或更多种、6种或更多种或7种选自DM1、DM2、DM3、DM4、DM5、DM6和DM7的肽标志物。
[0018]在某些实施方案中，具有观察到的m/z的一种或更多种肽标志物包含HM1。
[0019]在某些实施方案中，具有观察到的m/z的一种或更多种肽标志物选自CM1、CM2和CM3。
[0020]在某些实施方案中，确定样品的水解产物是否包含一种或更多种肽标志物的步骤包括确定样品的水解产物是否包含2种或更多种或3种选自CM1、CM2和CM3的肽标志物。
[0021]在某些实施方案中，具有观察到的m/z的一种或更多种肽标志物选自：PM1、PM2、PM3、PM4、PM5和PM6。
[0022]在某些实施方案中，确定样品的水解产物是否包含一种或更多种肽标志物的步骤包括确定样品的水解产物是否包含2种或更多种、3种或更多种、4种或更多种、5种或更多种或6种选自PM1、PM2、PM3、PM4、PM5和PM6的肽标志物。
[0023]在某些实施方案中，确定样品的水解产物是否包含一种或更多种肽标志物的步骤包括确定样品的水解产物是否包含一种或更多种选自驴肽标志物、马肽标志物、牛肽标志物和猪肽标志物的肽标志物，其中所述驴肽标志物选自DM1、DM2、DM3、DM4、DM5、DM6和DM7；所述马肽标志物是HM1；其中所述牛肽标志物选自CM1、CM2和CM3；并且所述猪肽标志物选自PM1、PM2、PM3、PM4、PM5和PM6；并且基于样品的水解产物是否包含一种或更多种肽标志物来鉴定样品是否包含动物皮明胶的步骤包括样品是否包含一种或更多种驴肽标志物确定样品是否包含驴皮明胶，由样品是否包含马皮肽标志物来确定样品是否包含马皮明胶，由样品是否包含一种或更多种牛肽标志物来确定样本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种鉴定疑似含有动物皮明胶的样品中的所述动物皮明胶的方法，所述方法包括：提供所述样品的水解产物；使用质谱法分析所述样品的所述水解产物；确定所述样品的所述水解产物是否包含一种或更多种肽标志物，其中所述一种或更多种肽标志物具有选自以下的观察到的质荷比(m/z)：518.2695
±
0.1(DM1)、675.6632
±
0.1(DM2)、761.3672
±
0.1(DM3)、766.6952
±
0.1(DM4)、774.0218
±
0.1(DM5)、784.3392
±
0.1(DM6)、854.0603
±
0.1(DM7)、386.2108
±
0.1(HM1)、596.8454
±
0.1(CM1)、604.8556
±
0.1(CM2)、766.8957
±
0.1(CM3)、419.2446
±
0.1(PM1)、490.5942
±
0.1(PM2)、693.8432
±
0.1(PM3)、713.6902
±
0.1(PM4)、773.9237
±
0.1(PM5)和774.9121
±
0.2(PM6)；以及基于所述样品的所述水解产物是否包含所述一种或更多种肽标志物来鉴定所述样品是否包含所述动物皮明胶，其中所述动物皮明胶包括驴皮明胶、马皮明胶、牛皮明胶、猪皮明胶或其混合物。2.如权利要求1所述的方法，其进一步包括水解所述样品从而形成所述样品的水解产物。3.如权利要求1所述的方法，其进一步包括使用蛋白酶水解所述样品从而形成所述样品的水解产物。4.如权利要求1所述的方法，其进一步包括使用选自胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、赖氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K、钙蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的蛋白酶水解所述样品，从而形成所述样品的水解产物。5.如权利要求1所述的方法，其进一步包括使用胰蛋白酶水解所述样品从而形成所述样品的水解产物。6.如权利要求1所述的方法，其中所述质谱法是串联质谱法(MS/MS)并且进一步包括液相色谱。7.如权利要求1所述的方法，其中所述质谱法包括高效液相色谱(HPLC
‑
MS/MS)或超高效液相色谱(UPLC
‑
MS/MS)。8.如权利要求6所述的方法，其中确定所述样品的水解产物是否包含一种或更多种肽标志物的步骤进一步包括确定所述一种或更多种肽标志物中的每一种是否具有预测的液相色谱保留时间，其中所述预测的液相色谱保留时间通过测量标准样品的保留时间来确定，其中所述标准样品中的每一个包含所述一种或更多种肽标志物中的一种。9.如权利要求1所述的方法，其中具有观察到的m/z的一种或更多种肽标志物选自：DM1、DM2、DM3、DM4、DM5、DM6和DM7。10.如权利要求9所述的方法，其中确定所述样品的水解产物是否包含一种或更多种肽标志物的步骤包括确定所述样品的水解产物是否包含2种或更多种、3种或更多种、4种或更多种、5种或更多种、6...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩全斌，吴文杰，李利锋，
申请(专利权)人：香港浸会大学，
类型：发明
国别省市：