通过5制造技术

本发明专利技术涉及mRNA疫苗、mRNA治疗和基因治疗领域，并且具体涉及使用含有5

【技术实现步骤摘要】
GenBank:BC007075.1)，和人血红蛋白alpha1 mRNA(HBA1,NCBI Sequence:NM_000558.5)。而与其他5
’
UTR序列相比，一些5
’
UTR序列的翻译和转录效率显著降低。这些新颖的5
’
UTR序列将用于改善或调节用于mRNA疫苗、mRNA治疗和基因治疗的mRNA和基因的翻译和/或转录。
附图说明
[0007]图1显示了通过5
’
UTR序列优化调节FLuc基因的翻译效率。
[0008]图2显示了含有各种5
’
UTR序列的FLuc基因的转录效率比较结果。
[0009]图3显示了含有各种5
’
UTR序列的人scIL
‑
12mRNA的翻译效率比较结果。
[0010]图4显示了含有各种5
’
UTR序列的人scIL
‑
12基因的转录效率比较结果。
[0011]图5显示了用scIL
‑
12mRNA转染的HeLa细胞的培养上清液刺激的人PBMC产生的IFN
‑
γ的比较结果。
[0012]图6显示了含有各种5
’
UTR序列的人scIL
‑
12mRNA的翻译效率比较结果。
[0013]图7显示了含有各种5
’
UTR序列的HPV的翻译效率比较结果。
[0014]图8A、8B、8C显示了含有各种5
’
UTR序列的HPV的翻译效率比较结果。
[0015]专利技术详述
[0016]在一个实施方案中，本专利技术公开了分离的核酸，其在5
’
至3
’
方向包含：
[0017]a)至少一个5
’
UTR元件，所述5
’
UTR元件包含含有SEQ ID NOs.1
‑
63,72
‑
84中任何一个的多核苷酸；和
[0018]b)至少一个编码感兴趣的肽或蛋白质的开放阅读框(ORF)。
[0019]优选地，所述本专利技术公开的所述分离的核酸还包含3
’
UTR元件(例如包含如SEQ ID NO:87所示序列)和polyA序列。
[0020]一方面，所述5
’
UTR元件包含含有SEQ ID NOs.38,43,46,61或72中任何一个的多核苷酸。
[0021]一方面，所述5
’
UTR元件由SEQ ID NOs.38,43,46,61或72组成。
[0022]一方面，所述感兴趣的肽或蛋白质是药用活性蛋白，优选选自下组：细胞因子(例如白介素(优选IL
‑
12或IL
‑
2或IL
‑
7))；例如促红细胞生成素；黏附分子，例如整联蛋白；免疫球蛋白；免疫活性化合物，例如抗原，例如肿瘤相关抗原、病原体相关抗原(例如，一种或更多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)病毒抗原，例如一种或更多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)人乳头瘤病毒(HPV)抗原、猴痘病毒抗原、流感病毒(A、B或C)抗原、CMV抗原或RSV抗原)、变应原或自身抗原；激素，例如加压素、胰岛素或生长激素；生长因子，例如VEGFA；酶，例如单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1
‑
TK)、氨基己糖苷酶、苯丙氨酸羟化酶、假胆碱酯酶、胰酶或乳糖酶；受体，例如生长因子受体；蛋白酶抑制剂，例如α1
‑
抗胰蛋白酶；凋亡调节剂，例如BAX；转录因子，例如FOXP3；肿瘤抑制蛋白，例如p53；结构蛋白，例如表面活性型蛋白质；重编程因子，例如OCT4、SOX2、c
‑
MYC、KLF4、LIN28或NANOG；基因组改造蛋白，例如成簇规律间隔短回文重复序列
‑
CRISPR
‑
相关蛋白9(CRISPR
‑
Cas9)；以及血蛋白，例如纤维蛋白原。
[0023]优选地，所述白介素为hIL
‑
12；更优选地，所述hIL
‑
12编码序列包含SEQ ID NO:69或65所示序列；
[0024]优选地，所述HPV编码序列包含SEQ ID NO:85所示序列。
[0025]一方面，本专利技术公开的分离的核酸包含SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:86所示序列。
[0026]在使用本专利技术的RNA或RNA组合物的方法的一个实施方案中，该方法可以包括将所述RNA或RNA组合物转移到细胞中的步骤。在这方面，可以使用适合将RNA转移到细胞中的任何技术。优选地，通过本文所述的标准技术将RNA转染到细胞中，例如磷酸钙沉淀、DEAE转染、电穿孔、脂转染或显微注射。细胞可以是可以用RNA转染的任何细胞，并且优选是抗原呈递细胞，例如未成熟的抗原呈递细胞，更优选选自巨噬细胞、单核细胞、B细胞和树突状细胞。生产目的肽或蛋白质的方法可以在体内或体外进行。
[0027]根据本专利技术，术语“细胞因子”指分子量约为1至200kDa并参与细胞信号传导(例如旁分泌、内分泌和/或自分泌信号传导)的蛋白质。特别是，当释放时，细胞因子会对释放位置周围的细胞行为产生影响。细胞因子的例子包括淋巴因子、白细胞介素、趋化因子、干扰素和肿瘤坏死因子(TNF)。根据本申请，细胞因子不包括激素或生长因子。细胞因子与激素的不同之处在于：(i)它们通常以比激素更可变的浓度作用；以及(ii)通常由广泛范围的细胞产生(几乎所有有核细胞都可以产生细胞因子)。干扰素通常以抗病毒、抗增殖和免疫调节活性为特征。干扰素是通过与被调节细胞表面上的干扰素受体结合来改变和调节细胞内基因的转录从而阻止病毒在细胞内复制的蛋白质。干扰素可分为三种类型。I型IFN包括IFN
‑
alpha,IFN
‑
beta,and IFN
‑
omega。II型IFN包括IFN
‑
gamma。III型IFN包括IFN
‑
lambda 1,2,3,和4。细胞因子的具体实例包括促红细胞生成素(EPO)、集落刺激因子(CSF)、粒细胞集落刺激因子(G
‑
CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM
‑
CSF)、肿瘤坏死因子(TNF)、骨形态发生蛋白(BMP)、α干扰素(IFNα)、β干扰素(IFNβ)、γ干扰素(INFγ)、白介素2(IL
‑
2)、白介素4(IL
‑
4)、白介素10(IL
‑
10)、白介素11(IL
‑
11)、白介素12(IL
‑
12)、白介素7(IL
‑
7)、白介素15(IL
‑
15)、白介素21(IL
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分离的核酸，其在5
’
至3
’
方向包含：a)至少一个5
’
UTR元件，所述5
’
UTR元件包含含有SEQ ID NOs.1
‑
63,72
‑
84(优选SEQID NOs.38,43,46,61或72)中任何一个的多核苷酸；和b)至少一个编码感兴趣的肽或蛋白质的开放阅读框(ORF)，优选地，所述感兴趣的肽或蛋白质是药用活性蛋白，优选选自下组：细胞因子(例如白介素(优选IL
‑
12或IL
‑
2或IL
‑
7))；例如促红细胞生成素；黏附分子，例如整联蛋白；免疫球蛋白；免疫活性化合物，例如抗原，例如肿瘤相关抗原、病原体相关抗原(例如，一种或更多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)病毒抗原，例如一种或更多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)人乳头瘤病毒(HPV)抗原、猴痘病毒抗原、流感病毒(A、B或C)抗原、CMV抗原或RSV抗原)、变应原或自身抗原；激素，例如加压素、胰岛素或生长激素；生长因子，例如VEGFA；酶，例如单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1
‑
TK)、氨基己糖苷酶、苯丙氨酸羟化酶、假胆碱酯酶、胰酶或乳糖酶；受体，例如生长因子受体；蛋白酶抑制剂，例如α1
‑
抗胰蛋白酶；凋亡调节剂，例如BAX；转录因子，例如FOXP3；肿瘤抑制蛋白，例如p53；结构蛋白，例如表面活性型蛋白质；重编程因子，例如OCT4、SOX2、c
‑
MYC、KLF4、LIN28或NANOG；基因组改造蛋白，例如成簇规律间隔短回文重复序列
‑
CRISPR
‑
相关蛋白9(CRISPR
‑
Cas9)；以及血蛋白，例如纤维蛋白原；优选地，所述白介素为hIL
‑
12；更优选地，所述hIL
‑
12编码序列包含SEQ ID NO:69或65所示序列；优选地，所述HPV编码序列包含SEQ ID NO:85所示序列。2.权利要求1所述的分离的核酸，其中所述分离的核酸还包含3
’
UTR元件(例如包含如SEQID NO:87所示序列)和polyA序列。3.权利要求2所述的分离的核酸，其中所述分离的核酸包含SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:86所示序列。4.mRNA，其在5
’
至3
’
方向包含：a)至少一个5
’
UTR元件，所述5
’
UTR元件包含含有SEQ ID NOs.1
‑
63,72
‑
84(优选SEQID NOs.38,43,46,61或72)中任何一个的多核苷酸；和b)至少一个编码感兴趣的肽或蛋白质的开放阅读框(ORF)；优选地，所述mRNA还包含3
’
UTR元件(例如包含如SEQ ID NO:87所示序列)和polyA序列；优选地，所述感兴趣的肽或蛋白质是药用活性蛋白，优选选自下组：细胞因子(例如白介素(优选IL
‑
12或IL
‑
2或IL
‑
7))；例如促红细胞生成素；黏附分子，例如整联蛋白；免疫球蛋白；免疫活性化合物，例如抗原，例如肿瘤相关抗原、病原体相关抗原(例如，一种或更多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)病毒抗原，例如一种或更多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)人乳头瘤病毒(HPV)、猴痘病毒、流感病毒(A、B或C)抗原、CMV抗原或RSV抗原)、变应原或自身抗原；激素，例如加压素、胰岛素或生长激素；生长因子，例如VEGFA；酶，例如单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1
‑
TK)、氨基己糖苷酶、苯丙氨酸羟化酶、假胆碱酯酶、胰酶或乳糖酶；受体，例如生长因子受体；蛋白酶抑制剂，例如α1
‑
抗胰蛋白酶；凋亡调节剂，例如BAX；转录因子，例如FOXP3；肿瘤抑制蛋白，例如p53；结构蛋白，例如表面活性型蛋白质；重编程因子，例如OCT4、SOX2、c
‑
MYC、KLF4、LIN28或NANOG；基因组改造蛋白，例如成簇规律间
隔短回文重复序列
‑
CRISPR
‑
相关蛋白9(CRISPR
‑
Cas9)；以及血蛋白，例如纤维蛋白原；优选地，所述白介素为hIL
‑
12；更优选地，所述hIL
‑
12编码序列包含SEQ ID NO:69或65所示序列；优选地，所述HPV编码序列包含SEQ ID NO:85所示序列。5.权利要求4所述的mRNA，其中所述mRNA包含SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:86所示序列。6.权利要求4或5所述的mRNA，其中所述mRNA包含至少一个修饰的或非天然存在的核苷酸，优选地，所述至少一个修饰的或非天然存在的核苷酸包含至少一个骨架修饰、糖修饰或碱基修饰。7.权利要求6所述的mRNA，其中所述至少一个修饰的或非天然存在的核苷酸包含至少一个碱基修饰，其中优选地，所述碱基修饰选自下组：2
‑
氨基
‑6‑
氯嘌呤
‑
核苷
‑5’‑
三磷酸、2
‑
氨基腺苷
‑5’‑
三磷酸、2
‑
硫代胞苷
‑5’‑
三磷酸、2
‑
硫代尿苷
‑5’‑
三磷酸、4
‑
硫代尿苷
‑5’‑
三磷酸、5
‑
氨基烯丙基胞苷
‑5’‑
三磷酸、5
‑
氨基烯丙基尿苷
‑5’‑
三磷酸、5
‑
溴胞苷
‑5’‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李宰宇，王德华，郝肖瑶，高悦，刘杰，何珊，何婷，柴旦，
申请(专利权)人：南京吉迈生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：