卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1基因、蛋白及应用制造技术

本发明专利技术涉及卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1基因、蛋白及应用，属于分子生物学领域，所述卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，本发明专利技术还提供了含有所述SEQ ID NO.1的真核表达载体、重组菌，所述卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1。本发明专利技术所述卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1真核表达质粒注射鱼体后能够促进炎症因子如IL

【技术实现步骤摘要】
卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1基因、蛋白及应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学领域，具体的说是一种卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin
‑
like growth factor binding protein 1，IGFBP1)基因、蛋白及应用。

技术介绍

[0002]卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是我国南方名贵的海产鱼类之一，具有较高的经济价值。但是近年养殖过程中病害频发，造成巨大的经济损失。
[0003]IGFBP1属于IGFBP家族，是一类可以调节IGF配体和IGF受体相互结合的蛋白质，在调节IGFs通路中发挥重要作用。在哺乳动物中，IGFBP1除了可以促进肿瘤细胞凋亡外，还参与细胞增殖，调节免疫和宿主对病原体的免疫反应。然而鱼类中IGFBP1的研究还较少，仅在斑马鱼(Danio rerio)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、建鲤(Cyprinus carpiovar Jian)、牙鲆(Paralichthys olivaceus)、花鲈(Lateolabrax maculatus)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)几种鱼类中克隆出IGFBP1cDNA基因，但对其生物学功能研究开展的很少。卵形鲳鲹中目前尚无相关研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题在于提供一种卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)的基因、蛋白及其在卵形鲳鲹抗细菌性疾病功能上的应用。
[0005]本专利技术是通过如下技术方案来实现的：
[0006]本专利技术提供一种卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)的基因，其cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：
[0007]atgcctggattacacgag aggcttacatttgtggcaggagcggctctggctgtcttagtcatggtgcggtcatccccagtggtgggaccg gagcctatccactgtgccccctgcactcaggagaaacggaacaactgtcctgccgtcccagcagagtgcaggcaggtgctgagggagcctggctgcggctgctgcatggcctgcgctctggagagaggggcatcctgtggagtccacacagcccactgtggtgagggtctccgctgcgctcccaggcctggtgaggccagacctctccacgctttgaccagggggcagggggtctgcactgaggacttgggccaagaggaaactgagggagtccccgaccacagctccttgcaccacttgctgggtctcaaccttccctttgaccaccaagacactgctgagggccacgagagcatcaaggccaaggccaacgctatccgcaacaagctggtacaacagggaccctgtcacattgaactgcacacagcactggacatgatagccagctctcagcagaaactaggagagaagttcacaactttctacctccccaactgtgacaagtacggcttctacaaggccaagcagtgtgagtcctctctggttggtccacccgctcgctgctggtgtgtctctccctggaatgggaagaagatcccaggatcgagtgacctgctccttgattcagagtgtcatcaagaagtcacacactaa
[0008]所述卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：
[0009]MPGLHERLTFVAGAALAVLVMVRSSPVVGPEPIHCAPCTQEKRNNCPAVPAECRQVLREPGCGCCMACALERGASCGVHTAHCGEGLRCAPRPGEARPLHALTRGQGVCTEDLGQEETEGVPDHSSLHHLLGLNLPFDHQDTAEGHESIKAKANAIRNKLVQQGPCHIELHTALDMIASSQQKLGEKFTTFYLPNCDKYGFYKAKQCESSLVGPPARCWC
RNAExtraction Kit按照操作步骤提取。
[0023](2)cDNA第一链的合成：以上述提取的总RNA为模板，用Promega公司的逆转录试剂盒RT Master Mix Kit进行cDNA第一链的合成。保存于
‑
20℃备用。
[0024](3)卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)基因的克隆
[0025]1)根据实验室卵形鲳鲹转录组库中胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)的编码区序列设计引物：TroIGFBP1
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F:5
’‑
gatatcgccaccATGGCGAGCGAGTGTA ATCGC
‑3’
；TroIGFBP1
‑
R:5
’‑
gatatcCTTCTGTGTAAGGTACGCTCCGATG
‑3’
用于TroIGFBP1基因的扩增。
[0026]2)按照北京全式金TransTaq高保真DNA聚合酶说明书配置PCR混合液，PCR条件为：94℃5min预变性；然后94℃30s，60℃30s，72℃60s，30个循环；最后72℃延伸7min。
[0027]3)PCR反应结束后，使用1.2％的琼脂糖凝胶检测扩增产物，然后使用南京诺唯赞生物科技股份有限公司的Gel DNA Extraction Mini Kit对PCR产物进行回收。
[0028]4)连接T载体连接：按照北京全式金
‑
T1simple Cloning Vector使用说明书操作，置于室温连接10min。将连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态，在含Amp抗生素的LB培养基对克隆进行筛选。从平板挑选单克隆进行PCR检测，及测序，获得阳性克隆，命名为pTroIGFBP1。
[0029](3)真核表达质粒pTroIGFBP1的构建：
[0030]1)质粒提取：提前准备好上述测序正确的含完整ORF序列的pTroIGFBP1质粒和真核表达载体pCN3质粒的菌液，使用Omega公司的Plasmid Mini Kit I质粒提取试剂盒进行质粒提取。
[0031]2)酶切：将上述提取的质粒(pCN3和pTroIGFBP1)，分别用SmaⅠ和EcoR
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于37℃水浴30min进行酶切，随后向pCN3载体的酶切体系中加入3μLFastAP继续孵育10min。
[0032]3)胶回收：使用南京诺唯赞生物科技股份有限公司的Gel DNA Extraction Mini Kit试剂盒对上述酶切产物进行回收。
[0033]4)连接：用T4 DNA连接酶将上述TroIGFBP1和pCN3线本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1的基因，其特征在于，所述基因的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述基因编码的卵形鲳鲹胰岛素样生长因子结合蛋白1，其特征在于，所述结合蛋白1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种重组真核表达载体，其特征在于，所述载体中含有权利要求1所述的SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。4.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌中含有权利要求3所述重组载...

【专利技术属性】
技术研发人员：周永灿，孙云，杜和禾，曹贞洁，吴莹，郭伟良，王世锋，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：