一种α-葡萄糖苷酶抑制剂抑制活性的检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种α

【技术实现步骤摘要】
一种
α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂抑制活性的检测方法及试剂盒


[0001]本专利技术涉及药物检测
，具体涉及一种α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂抑制活性的检测方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂是治疗糖尿病的一线药物，包括阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇等，这些药物均具有较好的降糖效果，但同时也存在着一些严重的不良反应，因此学者们仍在寻找更安全有效的新药物。中药提取物具有耐受性高、多靶点治疗、毒副作用小等独特优点，并在治疗糖尿病方面已有两千多年的经验，如桑叶提取物在抑制α
‑
葡萄糖苷酶活性的同时可减轻血糖波动导致的糖尿病并发症；番石榴叶提取物同时具有抑制α
‑
葡萄糖苷酶、提高胰岛素敏感度、降血糖、降血脂的作用。因此，从中药中挖掘天然α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂具有较大的发展潜力和广阔的应用前景。
[0003]α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂可通过抑制α
‑
葡萄糖苷酶的活性，减缓肠道吸收葡萄糖的速度，从而达到降低血糖的效果。目前关于α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂筛选的方法主要有PNPG(4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷)法、葡萄糖氧化法、HPLC等，但这些方法需要用到酶标仪、高效液相色谱仪等大型昂贵的精密设备，检测成本相对较高，便携度差，很多小型实验室也无条件配备。
[0004]另外，目前对于中药材活性的检测方法主要是通过回流、超声提取，浓缩后再经大孔树脂、萃取、制备等方式得到相应的活性组分，这些方法费时且需要耗费较多的样品，对于一些贵细中药材检测成本高，对于样品量少的样品不太适用。因此灵敏度高、快速、简便的中药材活性筛选方法是常见的研究方向之一。
[0005]因此，仍亟需一种成本低，便携性好，灵敏度高，快速简便的α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂抑制活性的检测方法。

技术实现思路

[0006]为解决上述问题，本专利技术提供一种α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂抑制活性的检测方法和一种试剂盒。
[0007]第一方面，本专利技术提供一种α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂抑制活性的检测方法。
[0008]一种α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂抑制活性的检测方法，其包括：将α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂溶液，α
‑
葡萄糖苷酶溶液和4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液混合，制得供试品溶液，进行反应，终止反应，用血糖仪检测。
[0009]所述抑制活性为对α
‑
葡萄糖苷酶的抑制活性。
[0010]所述检测方法还包括：取供试品背景溶液、空白对照溶液和空白对照背景溶液分别进行反应，终止反应，用血糖仪检测。
[0011]所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液中α
‑
葡萄糖苷酶的含量为0.2U/ml
‑
4U/ml。在一些实施例中，所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液中α
‑
葡萄糖苷酶的含量为0.2U/ml
‑
3U/ml。在一些实施例中，所
述α
‑
葡萄糖苷酶溶液中α
‑
葡萄糖苷酶的含量为0.2U/ml
‑
2U/ml。在一些实施例中，所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液中α
‑
葡萄糖苷酶的含量为0.5U/ml
‑
1U/ml。在一些实施例中，所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液中α
‑
葡萄糖苷酶的含量为0.7U/ml
–
0.9U/ml。在一些实施例中，所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液中α
‑
葡萄糖苷酶的含量为0.7U/ml
–
0.8U/ml。在一些实施例中，所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液中α
‑
葡萄糖苷酶的含量为0.75U/ml。
[0012]所述4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液中4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷的含量为4mg/ml～20mg/ml。在一些实施例中，所述4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液中4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷的含量为5mg/ml～15mg/ml。在一些实施例中，所述4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液中4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷的含量为5mg/ml～10mg/ml。在一些实施例中，所述4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液中4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷的含量为7.5mg/ml～15mg/ml。在一些实施例中，所述4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液中4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷的含量为5mg/ml～7.5mg/ml。
[0013]所述4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液与所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液的体积比为10:10
‑
30:10。在一些实施例中，所述4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液与所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液的体积比为15:10
‑
25:10。在一些实施例中，所述4
‑
硝基苯基
‑
α...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂抑制活性的检测方法，其包括：将α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂溶液，α
‑
葡萄糖苷酶溶液和4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液混合，制得供试品溶液，进行反应，终止反应，用血糖仪检测。2.根据权利要求1所述的检测方法，还包括：取供试品背景溶液、空白对照溶液和空白对照背景溶液分别进行反应，终止反应，用血糖仪检测。3.根据权利要求1
‑
2任一项的检测方法，所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液中α
‑
葡萄糖苷酶的含量为0.2U/mL
‑
4U/mL；和/或所述4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液中4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷的含量为4mg/mL～20mg/mL；和/或所述4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液与所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液的体积比为10:10
‑
30:10；和/或所述α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂溶液与所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液的体积比为10:10
‑
30:10。4.根据权利要求1
‑
3任一项的检测方法，所述α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂溶液的溶剂为磷酸盐缓冲水溶液或含5％甲醇的磷酸盐缓冲水溶液，所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液、4
‑
硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃
‑
葡萄糖苷溶液的溶剂为磷酸盐缓冲水溶液；和/或所述磷酸盐缓冲水溶液中磷酸盐的含量独立地为0.1mol/L
‑
0.3mol/L；和/或所述磷酸盐缓冲水溶液的pH独立地为5～11；和/或所述磷酸盐缓冲水溶液中的缓冲盐包括选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾和它们的水合物中的至少一种；和/或所述含5％甲醇的磷酸盐缓冲水溶液中磷酸盐的含量独立地为0.1mol/L
‑
0.3mol/L；和/或所述含5％甲醇的磷酸盐缓冲水溶液的pH独立地为5～111；和/或所述含5％甲醇的磷酸盐缓冲水溶液中的缓冲盐包括选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾和它们的水合物中的至少一种。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的检测方法，所述反应的温度为30℃
‑
40℃；和/或所述反应的时间为1h
‑
4h；和/或所述终止反应包括加入碳酸钠溶液终止反应；和/或所述碳酸钠溶液中碳酸钠的含量为0.1mol/L～1mol/L；和/或碳酸钠溶液与所述α
‑
葡萄糖苷酶溶液的体积比为5:10
‑
20:10。6.根据权利要求2
‑
5任一项所述的检测方法，所述供试品背景溶液包含α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂溶液，磷酸盐缓冲水溶液和对硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷溶液；和/或所述空白对照溶液包含所述α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂溶液的溶剂，α
‑
葡萄糖苷酶溶液和对硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷溶液；和/或所述空白对照背景溶液包含所述α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂溶液的溶剂，磷酸盐缓冲水溶液和对硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷溶液。7.根据权利要求2
‑
6任一项的检测方法，所述供试品背景溶液中的α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂溶液的体积与所述供试品溶液中的α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂溶液的体积相同；和/或所述供试品背景溶液中的磷酸盐缓冲水溶液的体积与所述供试品溶液中的α
‑
葡萄糖苷酶溶液的体积相同；和/或
所述供试品背景溶液中的对硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷溶液的体积与所述供试品溶液中的对硝基苯基
‑
α
‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷溶液的体积相同；和/或所述空白对照溶液中磷酸盐缓冲水溶液的体积与供试品溶液中α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂溶液的体积相同；和/或所述空白对照溶液中α
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：钱正明，何焯斌，黄琦，陈劲忠，贺媛，
申请(专利权)人：宜昌山城水都冬虫夏草有限公司，
类型：发明
国别省市：