本发明专利技术涉及一种用于建立慢性肾小球肾病模型的组合物，慢性肾小球肾病模型的建立方法，以及上述慢性肾小球肾病模型在治疗慢性肾小球肾病中的应用，上述造模方法中使用的是低剂量无毒性的赭曲霉毒素A与低剂量的阿霉素。本发明专利技术向BAL/bc小鼠单次尾静脉给予阿霉素与每天腹腔注射赭曲霉毒素A联合作用14天，得到小鼠慢性肾小球肾病模型，还在体外人肾小球系膜细胞验证上述慢性肾小球肾病模型，上述小鼠模型与传统模型单次给予高剂量阿霉素形成的慢性肾小球肾病的变化过程相似，且赭曲霉毒素A的使用减少了4倍阿霉素的用量从而显著降低了对心脏的副作用，有效缓解高浓度阿霉素导致的副作用，为相关药物的筛选提供研究基础。为相关药物的筛选提供研究基础。为相关药物的筛选提供研究基础。
【技术实现步骤摘要】
一种用于建立慢性肾小球肾病模型的组合物及其应用
[0001]本专利技术涉及动物疾病模型造模
，具体涉及一种用于建立慢性肾小球肾病模型的组合物和一种慢性肾小球肾病模型的建立方法，以及上述慢性肾小球肾病模型在治疗慢性肾小球肾病中的应用，具体地，该组合物为赭曲霉毒素A与阿霉素联合使用。
技术介绍
[0002]慢性肾脏疾病是影响全球公共卫生的主要疾病之一，而且其发病率和死亡率也在逐步上升。它可发生于任何年龄，以青中年为主，被视为非传染性疾病日益加重的全球负担的一部分。慢性肾脏疾病的病因有很多，如慢性肾炎、糖尿病、高血压、草药、肥胖和不明来源等。慢性肾小球肾病是一种以蛋白尿、肾功能异常等损害为主要特征的慢性肾脏疾病，他会导致广泛的肾小球病变、肾小管扩张、间质纤维化。为了研究并筛选有效的治疗药物，多种慢性肾小球肾病模型被成功建立。其中，阿霉素(ADR)导致的小鼠慢性肾小球肾病模型是研究慢性肾小球肾病的主要传统模型。
[0003]阿霉素是一种抗生素类药物，常用于抗肿瘤，但阿霉素存在细胞毒性，2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，阿霉素在2A类致癌物清单中。不仅如此，动物品系的选择，药物不同的注射方法、浓度和时间都可以直接影响阿霉素慢性肾小球肾病模型的成功率、稳定性以及肾组织的损伤程度，并影响后期基于该模型筛选和治疗肾病相关药物的疗效评价结果。此外，阿霉素还对心脏、肝脏和骨髓造血功能等具有毒副作用，据报道阿霉素可引起心电图改变、心肌肥厚和纤维化。这就导致动物模型安全性差、准确度低以及副作用大，从而限制了阿霉素肾小球肾病模型的临床应用。目前文献报道仅有针对某种毒性作用的研究，或是对慢性阿霉素肾小球肾病治疗药物的筛选，但是兼顾慢性阿霉素肾小球肾病模型的建立同时降低其毒副作用的研究仍是空白。因此，有必要探索新的、安全有效的方法来模拟人类慢性肾病模型，为后期筛选治疗慢性肾小球肾病药物的研究打下良好的动物模型基础。
[0004]赭曲霉毒素A(OTA)是一种广泛污染谷物和动物饲料的霉菌毒素，由曲霉和青霉菌产生，它与人类健康关系最密切、毒性最大、分布最广、产毒量最高、对农产品的污染最重。有报道称，小鼠暴露于低剂量的赭曲霉毒素A可导致帕金森病的关键生化和病理特征。同时发现，低剂量OTA暴露会导致仔猪的存活率和血清生化指标均高于高剂量OTA暴露组。赭曲霉毒素A的主要靶器官是肾脏，它能够促进细胞凋亡、细胞焦亡和氧化应激等肾脏损伤。在之前的研究中，发现赭曲霉毒素A可在体内和体外诱导肾小球损伤，表现为肾小球硬化、肾小球丢失、纤维化等。
[0005]虽然现有技术中采用无毒剂量赭曲霉毒素A(OTA)和低剂量环孢霉素A(CsA)联合可以成功诱导慢性肾小管肾病小鼠模型，但目前应用赭曲霉毒素A与其他药物联合诱导慢性肾小球肾病模型的研究国内外均未见报道。
技术实现思路
[0006]为了克服现有技术中存在的至少一个问题，本专利技术提供一种用于建立慢性肾小球肾病模型的组合物和一种慢性肾小球肾病模型的建立方法，上述模型可应用于筛选治疗慢性肾小球肾病的药物。本专利技术利用赭曲霉毒素A与阿霉素的联合使用，从而减少阿霉素的剂量和不良反应，同时建立小鼠慢性肾小球肾病模型，为研究肾小球肾病的发病机制和治疗药物的筛选提供了新思路。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]本专利技术的第一个方面是提供一种用于建立慢性肾小球肾病模型的组合物，其包括赭曲霉毒素A与阿霉素；其中，所述赭曲霉毒素A的使用量对动物机体或细胞无毒性。优选，阿霉素的使用量为降低其毒副作用和不良反应的低剂量。
[0009]可理解的是，上述组合物还可包括用于施用赭曲霉毒素A或阿霉素的助剂，例如注射用溶剂等。
[0010]进一步地，所述慢性肾小球肾病模型包括动物模型或体外细胞模型。
[0011]进一步地，所述动物模型为小鼠慢性肾小球肾病模型，所述体外细胞模型为人肾小球系膜细胞体外模型。
[0012]进一步地，当用于建立小鼠慢性肾小球肾病模型时，采用BAL/bc小鼠。
[0013]进一步地，当用于建立小鼠慢性肾小球肾病模型时，在造模期间，所述赭曲霉毒素A与阿霉素的施用总质量比为：2.1～7：1.5～3；优选赭曲霉毒素A与阿霉素的施用总质量比为：2.8～4.2：2～2.5。
[0014]进一步地，当用于建立小鼠慢性肾小球肾病模型时，所述赭曲霉毒素A的施用剂量为造模期间每天0.15～0.5mg/kg(例如0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5mg/kg等)；所述阿霉素的施用剂量为单次1.5～3mg/kg(例如1.5、2、2.3、2.5、2.8、3mg/kg等)。优选，所述赭曲霉毒素A的施用剂量为造模期间每天0.2～0.3mg/kg；所述阿霉素的施用剂量为单次2～2.5mg/kg。在一具体实施方案中，所述赭曲霉毒素A的施用剂量为造模期间每天0.25mg/kg；所述阿霉素A的施用剂量为单次2.3mg/kg。
[0015]进一步地，当用于建立人肾小球系膜细胞体外模型时，采用人肾小球系膜细胞传代细胞系。
[0016]进一步地，当用于建立人肾小球系膜细胞体外模型时，在造模期间，所述赭曲霉毒素A与阿霉素的施用总质量比为：1.25～40：0.05～2；优选赭曲霉毒素A与阿霉素的施用总质量比为：1.25～5：0.05～0.3。
[0017]进一步地，当用于建立人肾小球系膜细胞体外模型时，所述赭曲霉毒素A的施用剂量为1.25～40μM(例如1.25、2.5、5、10、20、40μM等)；所述阿霉素的施用剂量为0.05～2μM(例如0.05、0.1、0.3、0.5、1、2μM等)。优选，所述赭曲霉毒素A的施用剂量为1.25～5μM；所述阿霉素的施用剂量为0.05～0.3μM。在一具体实施方案中，所述赭曲霉毒素A的施用剂量为2.5μM；所述环孢霉素A的施用剂量为0.1μM。
[0018]可理解的是，上述小鼠及体外细胞系均可替换为本领域中合适的可用于建立慢性肾小球肾病模型的动物及体外细胞系。
[0019]本专利技术的第二个方面是提供一种含有本专利技术的第一个方面中任一所述的组合物的产品。其中，所述产品为用于构建慢性肾小球肾病模型的试剂，其还可包括一些造模用的
注射器、样本采集器等。
[0020]本专利技术的第三个方面是提供一种由本专利技术的第一个方面中任一所述的组合物构建的慢性肾小球肾病模型。
[0021]本专利技术的第四个方面是提供一种由本专利技术的第一个方面中任一所述的组合物在构建慢性肾小球肾病模型中的应用。
[0022]本专利技术的第五个方面是提供一种慢性肾小球肾病模型的构建方法，其采用本专利技术的第一个方面中任一所述的组合物建立小鼠慢性肾小球肾病模型，包括如下步骤：实验小鼠在试验开始的第一天进行尾静脉单次注射预定剂量的阿霉素，同时从试验开始的第一天起每天腹腔注射预定剂量的赭曲霉毒素A，连续注射10～18天，获得所述小鼠慢性肾小球肾病模型。
...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于建立慢性肾小球肾病模型的组合物，其特征在于，所述组合物包括赭曲霉毒素A与阿霉素；其中，所述赭曲霉毒素A的使用量对动物机体或细胞无毒性。2.根据权利要求1所述的一种用于建立慢性肾小球肾病模型的组合物，其特征在于，所述慢性肾小球肾病模型包括动物模型或体外细胞模型；其中，所述动物模型为小鼠慢性肾小球肾病模型，所述体外细胞模型为人肾小球系膜细胞体外模型。3.根据权利要求1所述的一种用于建立慢性肾小球肾病模型的组合物，其特征在于，当用于建立小鼠慢性肾小球肾病模型时，采用BAL/bc小鼠，所述赭曲霉毒素A的施用剂量为造模期间每天0.15～0.5mg/kg；所述阿霉素的施用剂量为单次1.5～3mg/kg。4.根据权利要求1所述的一种用于建立慢性肾小球肾病模型的组合物，其特征在于，当用于建立人肾小球系膜细胞体外模型时，采用人肾小球系膜细胞传代细胞系，所述赭曲霉毒素A的施用剂量为1.25～40μM；所述阿霉素的施用剂量为0.05～2μM。5.一种由权利要求1～4中任一项所述的组合物构建的慢性肾小球肾病模型。6.一种如权利要求1～4中任一项所述的组合物在构建慢性肾小球肾病模型中的应用。7.一种慢性肾小球肾病模型的构建方法，其特征在于，采用权利要求1～3中任一项所述的组合物建立小鼠慢性肾小球肾病模型，包括如下步...
【专利技术属性】
技术研发人员：后丽丽，黄克和，吴小马，石蕊，
申请(专利权)人：协同生物工程扬州有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。