细胞的HLA-I类MHC消融制造技术

本申请提供了降低用于移植(包括基于细胞的免疫疗法)的细胞的免疫原性的组合物和方法。编码修饰β2微球蛋白(B2M)的RNA以及靶向部分和其他信号和/或自杀基因的载体允许从任何来源高效地生产工程化的CAR T调节细胞或其他治疗细胞。他治疗细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞的HLA
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I类MHC消融
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年4月23日提交的美国临时专利申请第63/014,344号的权益和优先权，该申请的全部内容通过引用并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请包含具有11个序列的序列表，该序列表已通过EFS
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Web提交，并通过引用整体并入本文。该ASCII拷贝创建于2021年4月21日，名为48216WO_CRF_序列表.txt，大小为6,287字节。


[0005]本申请提供了用于在细胞中消融编码I类主要组织相容性复合蛋白的人白细胞抗原的组合物和方法。

技术介绍

[0006]包括干细胞移植和各种免疫疗法在内的基于细胞的治疗方法的出现在治疗包括癌症在内的疾病方面显示出巨大的希望。特别地，表达嵌合抗原受体的工程化T细胞(CAR
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T细胞)作为靶向性免疫治疗的新武器，因而备受关注。此外，正如专利公开WO2019/190879(其通过引用并入本文)中所讨论的那样，包括调节性T淋巴细胞(Treg)在内的其他免疫细胞可以被改造以表达嵌合抗原受体并用于调节自身免疫和炎性疾病中的免疫反应和炎症反应。
[0007]这些疗法有其自身的障碍和与移植细胞的免疫原性相关的风险。当计划使用的疗法引起免疫反应的风险通常可造成问题时，例如在治疗目标是免疫抑制时(诸如使用前面提到的工程化Treg的情况)，引起额外的免疫反应是一个特别令人担忧的问题。现有的减弱免疫原性的方法包括采用从待治疗患者身上采集的自体细胞。然而，此类方法会导致治疗延迟的问题并阻碍大规模生产。
[0008]专利技术概述
[0009]本申请的组合物和方法使用修饰β2微球蛋白(B2M)的RNA来降低多种细胞中HLA
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I类MHC的表达。随着I类MHC表达的减少，细胞不太可能被识别为外来细胞并诱导不需要的免疫反应。
[0010]编码修饰B2M的RNA的载体可用于转导细胞(如Treg细胞)以表达修饰B2M的RNA。修饰B2M的RNA可以包括小干扰RNA(siRNA)，或者小发夹RNA (shRNA)，它们可以被工程化以靶向编码B2M的mRNA并中断其翻译，从而导致B2M敲除细胞具有降低的I类MHC表达，并因此具有降低的免疫原性。
[0011]降低任何细胞免疫原性的能力为依赖于细胞移植、并且可以通过避免对自体起始材料的需要而允许更大规模的生产和储存的任何治疗或技术(例如，CAR Treg疗法)开辟了新的细胞来源。在某些技术中，例如工程化的CAR Treg，已经需要转导来在Treg细胞中表达CAR或其他靶向部分。因此，在优选的实施方案中，编码修饰B2M的RNA和靶向部分(如CAR)的
单个载体可用于产生由于B2M敲除而具有降低的免疫原性的CAR Treg。这种简化的单载体方法进一步支持更大规模的生产。
[0012]在某些实施方案中，可以在载体中编码额外的元件，包括例如自杀基因和报告基因，这些基因可用于提供安全开关和用于监测细胞生产期间的表达和监测/跟踪治疗细胞及其施用后的表达概貌的方法。当用于靶向治疗(例如靶向神经胶质细胞的CAR Treg)以确保工程化免疫抑制细胞的所需CNS密度时，报告基因表达可尤其有益。
[0013]如上所述，一些实施方案包括B2M修饰的靶向性的T调节淋巴细胞(Treg)，其可用于通过特异性靶向选择免疫细胞和/或选择组织来调节免疫反应和炎症。此类Treg可以与特异性识别和结合各种靶细胞或组织的嵌合抗原受体(CAR)、抗体或其功能成分(例如，单链可变片段(scFv))偶联，所述免疫抑制性Treg或蛋白质被吸引到发炎的组织以减轻炎症，从而相应地减少与炎症相关的疼痛和恶化。此类细胞中对B2M表达的敲除，可通过使用编码靶向部分和修饰B2M的RNA的单个载体进行转导实现，无论工程化Treg细胞的来源如何，都可以帮助避免不需要的免疫原性。本申请的修饰B2M的载体和方法与用于治疗神经退行性疾病(如专利公开号WO 2019/190879中描述的)以及用于治疗其他免疫和炎症性疾病的靶向Treg疗法相容。因此，编码那些申请中描述的神经胶质细胞和其他细胞/组织靶向部分的载体在本文中被考虑。
[0014]本申请的方面包括编码修饰β2微球蛋白(B2M)的RNA和嵌合抗原受体(CAR)、抗体或其功能组分的载体。在某些实施方案中，所述载体是慢病毒载体。
[0015]所述修饰B2M的RNA可能包括小干扰RNA(siRNA)。所述siRNA可包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5。在某些实施方案中，修饰B2M的RNA可包括小发夹RNA(shRNA)。所述shRNA可以包含选自下组的序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5，以及一个或多个选自下组的发卡环序列：SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7。
[0016]在各种实施方案中，所述载体可用于可操作性地将转导的细胞中的B2M表达敲除，与野生型相比，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％，或与野生型相比，至少95％。
[0017]在某些实施方案中，CAR可以特异性结合神经胶质细胞标志物、抗原呈递细胞(APC)标志物、辅助性T细胞1(Th1)标志物或辅助性T细胞17(Th17)标志物。在一些实施方案中，CAR可以特异性结合对选自下组的细胞具有特异性的标志物：胰岛细胞、胰腺β细胞、心肌细胞、单核细胞、巨噬细胞、骨髓细胞、肠细胞、肝细胞、肾细胞、肾足细胞、肾小管细胞、上皮细胞、唾液腺细胞、肺细胞、成纤维细胞、结缔组织细胞、朗格汉斯细胞、角质细胞、黑色素细胞、皮肤细胞、毛囊细胞、少突胶质细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞和毛球细胞。
[0018]本申请的载体可以进一步编码自杀基因和/或PET报告基因。在某些实施方案中，该载体可以编码TK自杀/PET报告基因。
[0019]在某些方面，本申请可以包括用编码修饰β
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2微球蛋白(B2M)的RNA和嵌合抗原受体(CAR)的载体转导的工程化细胞。与在其他方面与其等同的野生型细胞相比，工程化细胞的B2M表达可为25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、或5％或更少。
[0020]工程化细胞可以是干细胞和淋巴细胞。在某些实施方案中，所述细胞可以是调节性T细胞(Treg)。所述细胞可源自用于在受试者中进行同种异体移植的供体。工程化改造的Treg细胞可以来源于同种异体的供体，且不添加CAR分子。
[0021]本申请的方面可以包括通过向受试者施用治疗有效量的调节性T细胞(Treg)来治疗所述受试者的自身免疫性疾病或炎性疾病的方法，每个调节性T细胞表达修饰β
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2微球蛋白(B2M)的RNA和嵌合抗原受体(CAR)，其以抑制受试者免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.载体，其编码：修饰β2微球蛋白(B2M)的RNA；和嵌合抗原受体(CAR)。2.根据权利要求1所述的载体，其中所述载体是慢病毒载体。3.根据权利要求1所述的载体，其中所述修饰B2M的RNA包含小干扰RNA(siRNA)。4.根据权利要求3所述的载体，其中所述siRNA的编码序列包含选自下组的一个：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5。5.根据权利要求1所述的载体，其中所述修饰B2M的RNA包含小发夹RNA(shRNA)。6.根据权利要求5所述的载体，其中所述shRNA的编码序列包含选自下组的一个：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5，以及一个或更多个发夹环序列，所述发夹环序列的编码序列包含选自下组的一个：SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7。7.根据权利要求1所述的载体，与野生型相比，其可操作以将转导的细胞中的B2M表达敲除至少75％。8.根据权利要求1所述的载体，与野生型相比，其可操作以将转导的细胞中的B2M表达敲除至少80％。9.根据权利要求1所述的载体，与野生型相比，其可操作以将转导的细胞中的B2M表达敲除至少85％。10.根据权利要求1所述的载体，与野生型相比，其可操作以将转导的细胞中的B2M表达敲除至少90％。11.根据权利要求1所述的载体，与野生型相比，其可操作以将转导的细胞中的B2M表达敲除至少95％。12.根据权利要求1所述的载体，其中所述CAR特异性结合神经胶质细胞标志物。13.根据权利要求1所述的载体，其中所述CAR特异性结合抗原呈递细胞(APC)标志物。14.根据权利要求1所述的载体，其中所述CAR特异性结合辅助性T细胞1(Th1)标志物。15.根据权利要求1所述的载体，其中所述CAR特异性结合辅助性T细胞17(Th17)标志物。16.根据权利要求1所述的载体，其中所述CAR特异性地结合对选自下组的细胞具有特异性的标志物：胰岛细胞、胰腺β细胞、心肌细胞、单核细胞、巨噬细胞、骨髓细胞、肠细胞、肝细胞、肾细胞、肾足细胞、肾小管细胞、上皮细胞、唾液腺细胞、肺细胞、成纤维细胞、结缔组织细胞、朗格汉斯细胞、角质细胞、黑色素细胞、皮肤细胞、毛囊细胞和毛球细胞。17.根据权利要求1所述的载体，其进一步编码自杀基因。18.根据权利要求1所述的载体，其进一步编码PET报告基因。19.根据权利要求1所述的载体，其进一步编码TK自杀/PET报告基因。20.经编码修饰β2微球蛋白(B2M)的RNA和嵌合抗原受体(CAR)的载体转导的工程化细胞。21.根据权利要求20所述的工程化细胞，其中所述修饰B2M的RNA包含小干扰RNA(siRNA)。22.根据权利要求21所述的工程化细胞，其中所述siRNA的编码序列包含选自下组的一个：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5。
23.根据权利要求20所述的工程化细胞，其中所述修饰B2M的RNA包含小发夹RNA(shRNA)。24.根据权利要求23所述的工程化细胞，其中所述shRNA的编码序列包含选自下组的一个：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5，以及一个或更多发夹环序列，所述发夹环序列的编码序列包含选自下组的一个：SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7。25.根据权利要求20所述的工程化细胞，其B2M表达为同等野生型细胞的25％或更少。26.根据权利要求20所述的工程化细胞，其B2M表达为同等野生型细胞的20％或更少。27.根据权利要求20所述的工程化细胞，其B2M表达为同等野生型细胞的15％或更少。28.根据权利要求20所述的工程化细胞，其B2M表达为同等野生型细胞的10％或更少。29.根据权利要求20所述的工程化细胞，其B2M表达为同等野生型细胞的5％或更少。30.根据权利要求20所述的工程化细胞，其中所述CAR特异性结合CNS神经胶质细胞标志物。31.根据权利要求20所述的工程化细胞，其中所述CAR特异性结合抗原呈递细胞(APC)标志物。32.根据权利要求20所述的工程化细胞，其中所述CAR特异性结合辅助性T细胞1(Th1)标志物。33.根据权利要求20所述的工程化细胞，其中所述CAR特异性结合辅助性T细胞17(Th17)标志物。34.根据权利要求20所述的工程化细胞，其中所述CAR特异性结合对选自下组的细胞具有特异性的标志物：胰岛细胞、胰腺β细胞、心肌细胞、单核细胞、巨噬细胞、骨髓细胞、肠细胞、肝细胞、肾细胞、肾足细胞、肾小管细胞、上皮细胞、唾液腺细胞、肺细胞、成纤维细胞、结缔组织细胞、朗格汉斯细胞、角质细胞、黑色素细胞、皮肤细胞、毛囊细胞、毛球细胞、少突胶质细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞。35.根据权利要求20所述的工程化细胞，其中所述细胞选自：干细胞和淋巴细胞。36.根据权利要求20所述的工程化细胞，其中所述细胞是调节性T细胞(Treg)。37.根据权利要求20所述的工程化细胞，其中所述细胞源自用于在受试者中进行同种异体移植的供体。38.治疗受试者自身免疫性疾病或炎性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的调节性T细胞(Treg)，每个调节性T细胞表达修饰β
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2微球蛋白(B2M)的RNA和嵌合抗原受体(CAR)，所述嵌合抗原受体以抑制受试者免疫反应的方式特异性结合细胞表面上的配体，从而治疗受试者的自身免疫性疾病或炎性疾病。39.根据权利要求38所述的方法，其中所述修饰B2M的RNA包含小干扰RNA(si...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：AZ治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：