一种胰凝乳蛋白酶及其抑制剂的快速检测方法技术

本发明专利技术提供了一种胰凝乳蛋白酶及其抑制剂的快速检测方法，属于生物传感及分析领域，解决了现有胰凝乳蛋白酶检测方法存在的成分高、操作复杂、分析仪器要求高、便携性差等问题。将胰凝乳蛋白酶溶液与明胶水凝胶溶液混合均匀，胰凝乳蛋白酶可酶解明胶水凝胶；滴加至疏水板后，被酶解的明胶水凝胶将释放水，酶解程度不同将导致水释放量差异，沿pH试纸条流动长度和覆盖面积不同；用手机记录混合溶液的水流长度和覆盖面积，将图片导入软件中，统计覆盖面积和pH试纸条的总面积，计算水流覆盖面积比。本发明专利技术的检测方法具有成本低、便携性高、操作简单等优点；同时，样品前处理简单，在快速高通量筛选天然产物中胰凝乳蛋白酶抑制剂方面具有重要意义。具有重要意义。具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种胰凝乳蛋白酶及其抑制剂的快速检测方法


[0001]本专利技术属于生物传感及分析领域，尤其涉及一种利用水凝胶纸基横向流动传感器对胰凝乳蛋白酶及其抑制剂的快速检测方法。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)是一种能够分解蛋白质的消化性酶，活性基团含有丝氨酸残基，属于丝氨酸蛋白水解酶。它可选择性水解苯丙氨酸羧基侧的肽键。胰凝乳蛋白酶参与一系列生理过程和疾病。例如，在食物摄入后对膳食蛋白质的消化起着至关重要的作用。胰凝乳蛋白酶催化白细胞介素1
‑
b(IL
‑
1b)前体分解为活性IL
‑
1b，从而导致关节炎。胰凝乳蛋白酶通过蛋白水解激活上皮钠通道(Enac)，并可能导致囊性纤维化。此外，胰凝乳蛋白酶还与慢性胰腺炎、细胞凋亡、肿瘤等相关。胰凝乳蛋白酶水平的测定已成为一种疾病诊断手段，尤其是在胰腺功能研究中，大便中胰凝乳蛋白酶的测定是一个较测定其他标志物更为可靠的胰腺功能评估方法。
[0004]由于胰凝乳蛋白酶生理功能的重要意义，近年来受到研究人员们越来越多的关注。迄今为止，胰凝乳蛋白酶的检测已经采用了多种技术，包括高效液相色谱检测、质谱检测、荧光检测、电化学检测、比色反应检测，以及表面等离子共振检测。然而，这些方法中的大多数总是需要特定的设备，而且成本高、耗时。它们不适合现场分析。

技术实现思路

[0005]为解决上述领域研究的不足，本专利技术提供一种胰凝乳蛋白酶及其抑制剂的快速检测方法，该方法操作简单，检测速度快，实用性高，成本低，便携性高。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]本专利技术的第一个方面，提供了一种胰凝乳蛋白酶的快速检测方法，包括：
[0008]将胰凝乳蛋白酶溶液与明胶水凝胶溶液混合均匀，恒温孵育，得到混合溶液；
[0009]将所述混合溶液滴加至PVC疏水板，静置，然后，将pH试纸条放置于混合溶液上，静置，记录混合溶液的水流长度和覆盖面积；
[0010]将混合溶液的水流长度和覆盖面积导入图片处理软件中，统计覆盖面积和pH试纸条的总面积，计算水流覆盖面积比。对不同浓度的胰凝乳蛋白酶溶液进行检测，建立水流覆盖面积比与胰凝乳蛋白酶浓度的对应关系，基于对应关系，对未知浓度的胰凝乳蛋白酶溶液进行检测，即得。
[0011]本专利技术开发了一种灵敏、廉价、快速且易于使用的胰凝乳蛋白酶检测方法。
[0012]本专利技术的第二个方面，提供了一种胰凝乳蛋白酶抑制剂的快速检测方法，包括：
[0013]将胰凝乳蛋白酶抑制剂与胰凝乳蛋白酶溶液混合均匀，恒温孵育，得到混合溶液
1；
[0014]将所述混合溶液1与明胶水凝胶溶液混合均匀，恒温孵育，得到混合溶液2；
[0015]将混合溶液2滴加至PVC疏水板，静置，将pH试纸条放置于混合溶液2上，静置，记录混合溶液的水流长度和覆盖面积；
[0016]将混合溶液的水流长度和覆盖面积导入图片处理软件中，统计覆盖面积和pH试纸条的总面积，计算水流覆盖面积比，对不同浓度的胰凝乳蛋白酶抑制剂进行检测，建立水流覆盖面积比与胰凝乳蛋白酶抑制剂浓度的对应关系，基于对应关系，对含未知浓度胰凝乳蛋白酶抑制剂的溶液进行检测，即得。
[0017]本专利技术的有益效果
[0018](1)本专利技术采用明胶水凝胶作为酶切底物，明胶水凝胶价廉易得，不需要经过复杂的处理、昂贵的改性和合成。
[0019](2)本专利技术采用pH试纸条和PVC疏水板，不需要过多处理，通过简单裁剪后即可使用，且成本相对较低。
[0020](3)本专利技术进行检测时可同时进行多组样品的胰凝乳蛋白酶水平测定，可实现高通量检测和筛选。
[0021](4)与电化学检测、荧光检测、液相色谱检测等方法相比，本专利技术无需大型分析仪器，便携性高。
[0022](5)本专利技术的测定方法操作简单、实用性强、成本低，易于推广。
附图说明
[0023]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示例性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0024]图1为本专利技术实施例1中胰凝乳蛋白酶的快速检测结果。
[0025]图2为本专利技术实施例2中胰凝乳蛋白酶抑制剂的快速检测结果。
具体实施方式
[0026]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本专利技术使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0027]一种胰凝乳蛋白酶及其抑制剂的快速检测方法，所述的检测方法中使用胰凝乳蛋白酶、明胶水凝胶、PVC板、pH试纸条。
[0028]一种胰凝乳蛋白酶的快速检测方法，包括如下步骤：
[0029]S1、胰凝乳蛋白酶溶液的制备：
[0030]精密称取胰凝乳蛋白酶加入PBS缓冲溶液中，混合均匀，得到胰凝乳蛋白酶溶液；
[0031]S2、明胶水凝胶溶液的制备：
[0032]精密称取明胶水凝胶加入PBS缓冲溶液中，混合均匀，得到明胶水凝胶溶液；
[0033]S3、酶切反应：
[0034]将所述胰凝乳蛋白酶溶液与明胶水凝胶溶液等体积混合均匀，得到混合溶液，35～40℃恒温孵育15～30min；
[0035]S4、水流动检测：
[0036]取适量混合溶液滴加至PVC疏水板，静置5～6min，将pH试纸条放置于混合溶液上，静置1min，用智能手机记录混合溶液的水流长度和水流覆盖面积。
[0037]S5、数据处理：
[0038]将混合溶液的水流长度和覆盖面积导入图片处理软件中，统计覆盖面积和pH试纸条的总面积，计算水流覆盖面积比。对不同浓度的胰凝乳蛋白酶溶液进行检测，建立水流覆盖面积比与胰凝乳蛋白酶浓度的对应关系，基于对应关系，对未知浓度的胰凝乳蛋白酶溶液进行检测，并确定其浓度。
[0039]在一些实施例中，S1、S2中PBS缓冲溶液的pH为8.0；
[0040]在一些实施例中，S1中胰凝乳蛋白酶溶液的浓度为0U/mL、3.75U/mL、7.5U/mL、11.25U/mL、15U/mL；
[0041]在一些实施例中，S2中明胶水凝胶溶液的浓度为8wt％；
[0042]在一些实施例中，S5中水流覆盖面积是根据像素点计算；
[0043]在一些实施例中，S5中胰凝乳蛋白酶浓度与其水流覆盖面积比的R＝0.995。
[0044]一种胰凝乳蛋白酶抑制剂的快速检测方法，所述的检测方法中使用胰凝乳蛋白酶、胰凝乳蛋白酶抑制剂、明胶水凝胶、PVC板、pH试纸条。
[0045]S1、胰凝乳蛋白酶抑制剂溶液的制备：
[0046本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胰凝乳蛋白酶的快速检测方法，其特征在于，包括：将胰凝乳蛋白酶溶液与明胶水凝胶溶液混合均匀，恒温孵育，得到混合溶液；将所述混合溶液滴加至PVC疏水板，静置，然后，将pH试纸条放置于混合溶液上，静置，记录混合溶液的水流长度和覆盖面积；将混合溶液的水流长度和覆盖面积导入图片处理软件中，统计覆盖面积和pH试纸条的总面积，计算水流覆盖面积比，对不同浓度的胰凝乳蛋白酶溶液进行检测，建立水流覆盖面积比与胰凝乳蛋白酶浓度的对应关系，基于对应关系，对未知浓度的胰凝乳蛋白酶溶液进行检测，即得；胰凝乳蛋白酶溶液的浓度为0
‑
15U/mL；明胶水凝胶溶液的浓度为8
‑
10wt％。2.如权利要求1所述的胰凝乳蛋白酶的快速检测方法，其特征在于，胰凝乳蛋白酶溶液与明胶水凝胶溶液采用等体积混合。3.如权利要求1所述的胰凝乳蛋白酶的快速检测方法，其特征在于，恒温孵育的条件为35
‑
40℃下孵育15
‑
30min。4.如权利要求1所述的胰凝乳蛋白酶的快速检测方法，其特征在于，PBS缓冲溶液的pH为7.4
‑
8.0。5.如权利要求1所述的胰凝乳蛋白酶的快速检测方法，其特征在于，静置温度为19
‑
20℃；或，水流覆盖面积是根据Adobe Photoshop中图片的像素点计算；或，胰凝乳蛋白酶浓度与其水流覆盖面积比的R为0.995。6.一种胰凝乳蛋白酶抑制剂的快速检测方法，其特征在于，包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：董红敬，王晓，刘双，纪文华，胡琼政，段文娟，
申请(专利权)人：山东省分析测试中心，
类型：发明
国别省市：