一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌制造技术

本发明专利技术公开了一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌，该菌株编号为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)Pp03

【技术实现步骤摘要】
一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌


[0001]本专利技术涉及一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌，属于微生物


技术介绍

[0002]近年来，中药材人工种植栽培面积逐年增加，中药材病害的发生情况也随之而增加。然而，为了保证中药材种植产区的产量，种植过程中化学肥料和化学药剂的广泛使用，不仅使得中药材的品质降低，也会对种植区的生态环境造成严重污染，并威胁着人类的健康。因此，寻求绿色安全的方法和种植模式成为了解决中药材种植过程中防治真菌病害发生的一大热点。
[0003]土壤根际或植物内生的微生物，具有无污染，不产生抗药性，作用效果较好，且对人畜无害的特点，成为了生物防治过程中一种良好有效的方法，近年来越发的受到了学者的广泛重视，并被大众所接受。另外，一些有生防效果的细菌同时也具有一定的促生作用，它们能够通过分泌嗜铁素，或产生植物生长素IAA、或解无机磷、有机磷等方式来促进植物的生长和发育。其中，IAA是植物生长过程中所必需的生长调节剂，促生细菌产生IAA是其一大特性。另外，微生物菌肥的开发和应用，既同时保证了中药材的品质和产量，也能保护了种植区的生态环境。本研究中发现：筛选出的根际土壤细菌既能够防治中药材病害的发生，又能够产生IAA显著促进植株的生长。而近年来，关于中药材根际土壤生产IAA细菌的研究鲜有报道，因此筛选能够产生IAA并防治中药材病害的细菌菌株具有重要的理论和实践意义。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，提供一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌，该多粘类芽孢杆菌能够防治中药材病害，且能促进中药材生长。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0006]一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌，该菌株编号为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)Pp03
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41，已保藏于“中国典型培养物保藏中心”(简称CCTCC)，保藏地址：湖北省武汉市，洪山区八一路，武汉大学中国典型培养物保藏中心，登记入册的保藏号为CCTCC M 2021702，保藏日期为2021年06月09日。
[0007]所述的一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌，其制备方法是：称取1g土壤，加入9mL无菌水中充分振荡获得土壤悬浮液，然后将土壤悬浮液摇匀后进行稀释至10
‑3，取100μL依次稀释涂布于的KB固体培养基上，28℃培养，至菌落长出后分离纯化，然后筛选出对中药材病害病原具有抑制效果的菌株，并鉴定，得到多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)Pp03
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41。
[0008]所述的一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌，其在防治中药材病害方面的应用。
[0009]所述的一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌，其在促进中药材生长方面的应用。
[0010]所述的一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌，其防治中药材病害并促进中药材生长方面的应用。
[0011]所述的一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌，在制备防治中药材病害并促进中药材生长的菌剂中的应用。
[0012]所述的菌剂的制备方法为：将多粘类芽孢杆菌接种于KB培养基中，在28℃、180rpm条件下振荡培养16h制备种子菌，种子菌以3％的接种量接种于KB培养基中，在28℃、180rpm条件下发酵48h，形成发酵液，即为菌剂；发酵液中多粘类芽孢杆菌为108～109CFU/mL。
[0013]所述的KB培养基的制备方法为：蛋白胨20g，甘油10mL，磷酸氢二钾1.5g，七水合硫酸镁1.5g，添加蒸馏水定容至1000mL，混匀后分装于三角瓶中，121℃灭菌30min。
[0014]所述的菌剂的使用方法为：菌剂用无菌水稀释10倍，使稀释液活菌浓度为107～108CFU/mL，灌根于中药材根部周围；每7d灌根处理1次，共灌根2次。
[0015]本专利技术有益效果在于：本专利技术的目的是利用微生物生防促生作用，通过平板对峙抑菌和盆栽促生试验，从河南嵩县车村中药材丹参根际土壤中筛选出既能防治中药材病害又可促进中药材生长的多粘类芽孢杆菌Pp03
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41。试验表明，本专利技术的多粘类芽孢杆菌Pp03
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41对中药材丹参根腐、茎基腐病的病原菌均具有良好的抑制作用，对丹参根腐病原Fusarium proliferatum和Fusarium oxysporum、茎基腐病原Alternaria tenuissima的抑菌率均能达到50％以上；同时该菌株还能够促进中药材丹参株高、主根数的增加，提高地上鲜重及干重、地下鲜重及干重。本专利技术筛选的多粘类芽孢杆菌使用后不会有环境污染、农药残留等化学农药常见问题，对人畜健康、生态环境友好，符合人们对生态农业的需求。因此，使用生防促生菌不仅提高中药材丹参根部生物量的积累，增加中药材丹参的产量，还降低了化肥农药的使用，起到保护环境的作用。
附图说明
[0016]图1为本专利技术的菌株多粘类芽孢杆菌Pp03
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41对中药材丹参根腐、茎基腐病原菌的平板对峙抑菌试验结果。
[0017]图2为本专利技术的菌株多粘类芽孢杆菌Pp03
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41的菌落形态。
[0018]图3为本专利技术的菌株多粘类芽孢杆菌Pp03
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41对烟叶过敏性试验结果。
[0019]图4为本专利技术的菌株多粘类芽孢杆菌Pp03
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41对中药材丹参盆栽促生试验结果对比图。其中图左为接种无菌水，图中为接种KB液体培养基，图右为接种菌株多粘类芽孢杆菌Pp03
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41。
具体实施方式
[0020]以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。
[0021]实验材料：
[0022]KB培养基：蛋白胨20g，甘油10mL，磷酸氢二钾1.5g，七水合硫酸镁1.5g，琼脂20g(仅做固体培养基时添加)，添加蒸馏水定容至1000mL，混匀后分装于三角瓶中，121℃灭菌30min。
[0023]PDA培养基：马铃薯200g(切成边长约1cm的小块，放入800mL蒸馏水煮沸15min，双层纱布过滤后留取滤液)，葡萄糖20g，琼脂20g，加蒸馏水定容至1000mL，121℃灭菌30min。
[0024]实施例1、生防菌的分离
[0025]采集中药材丹参根际的土壤，称取1g土壤，加入9mL无菌水中充分振荡获得土壤悬浮液，然后将土壤悬浮液摇匀后进行稀释至10
‑3，取100μL依次稀释涂布于的KB固体培养基上，28℃培养，至菌落长出后挑取大小、颜色或形态不同的菌落在KB固体培养基表面划线分离纯化，获得3株菌株，并分别命名为K03
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1、K03
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4和Pp03
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41。
[0026]实施例2、生防菌的筛选
[0027]利用平板对峙方法筛选生防菌：将丹参根腐和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种应用于中药材生防促生的多粘类芽孢杆菌，该菌株编号为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)Pp03
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41，已保藏于“中国典型培养物保藏中心”(简称CCTCC)，保藏地址：湖北省武汉市，洪山区八一路，武汉大学中国典型培养物保藏中心，登记入册的保藏号为CCTCC M 2021702，保藏日期为2021年06月09日。2.一种如权利要求1所述的多粘类芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，采集丹参根际的土壤，称取1g土壤，加入9mL无菌水中充分振荡获得土壤悬浮液，然后将土壤悬浮液摇匀后进行稀释至10
‑3，取100μL依次稀释涂布于的KB固体培养基上，28℃培养，至菌落长出后分离纯化，然后筛选出对中药材病害病原真菌具有抑制效果的菌株，并鉴定，得到多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)Pp03
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41。3.一种如权利要求1或2所述的多粘类芽孢杆菌，其特征在于，其在防治中药材病害方面的应用。4.一种如权利要求1或2所述的多粘类芽孢杆菌，其特征在于，其在促进中...

【专利技术属性】
技术研发人员：王飞，李雪梦，鲁传涛，杨瑾，戚文平，文艺，高素霞，秦艳红，刘玉霞，
申请(专利权)人：河南省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：