一种二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法技术

本发明专利技术公开了一种二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法，属于血红素提取技术领域，该二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法，包括以下步骤：新鲜驴血抗凝；红细胞分离及溶胀；冻干及CO2超临界萃取；氨水溶解后通入CO2沉淀提纯；冻干得到纯品；氨气的加热回收。二氧化碳超临界萃取过程仅用少量乙醇作为夹带剂，乙醇易分离，且为食品友好型试剂，易溶于水，洗脱简单，无残留，能够避免血红素被污染，工艺过程绿色低碳，超临界萃取速度比一般的溶剂提取效率高，粗血红素纯化过程中利用了血红素易溶于氨水，难溶于碳酸盐溶液的化学特性，工艺设计简单，加热过程中挥发的少量氨，可以喷淋回收，因此氨水可以循环使用，工艺过程简单、绿色环保无污染。无污染。无污染。

【技术实现步骤摘要】
一种二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法


[0001]本专利技术涉及血红素提取
，具体为一种二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法。

技术介绍

[0002]血红素是一种重要的含铁卟啉配合物和生物态补铁剂，当血红素脱离珠蛋白后，迅速被氧化为高铁血红素，血红素是一种贵重的生化药品，是制备抗癌药血卟啉的主要原料，血红素是由一个二价铁离子镶嵌在一个原卟啉环而构成的称为铁卟啉的化合物，主要存在于动物的血液和肌肉中，是动物血液中的天然色素，具有重要的生理功能和很高的实用价值，相对于其他补铁剂，血红素有无毒、无副作用、生物利用率高、一般不受膳食因素的影响等优点，因此血红素在医药、食品、化工、保健品及化妆品行业中有广泛应用。
[0003]血红素别名高铁血红素、正铁血红素、羟基血红素、羟高铁血红素、高铁原卟啉，血红素，是(血红蛋白)分子上的主要稳定结构，为血红蛋白、肌红蛋白等的辅基。
[0004]血红素分子对称性高，极性较小，因此易溶于非极性或弱极性溶剂，可溶于氢氧化钠溶液、热醇或氨，微溶于热吡啶，不溶于水、稀酸、醚、氯仿及丙酮，血红素为红紫色长片状晶体，其颜色随所用纯化溶剂不同差别很大，可能是黑绿色固体粉末或棕色粉末，血红素在干燥的固体状态下较稳定，但在光照或有氧化剂存在下则极不稳定，很快被氧化，200℃分解而无熔点，在10％的氢氧化钠溶液中最大吸收值为580nm，分子简式为C
34
H
32
N4FeO4，分子量为633.49。
[0005]提取血红素一般以驴血为原料，但近年的研究发现在各类动物血液中，驴血的血红素含量更高，驴血具有补气养血的功效和作用，驴血可以改善血虚患者，缓解贫血症状，具有养心安神的功效，适合经常失眠的患者，能有效提高睡眠质量，还能维持心脑血管疾病，有效预防高血压、冠心病和动脉硬化等疾病的发生，驴血具有美容的功能，可以使皮肤更光滑，胃肠功能差者不应该吃太多驴血，驴血血红蛋白中含有丰富的血红素，临床上使用氯化血红素胶囊治疗和预防缺铁性贫血，取得了良好效果，10L驴血可提取血红素100～150g，价值为3000
‑
4500元，每头驴仅血红素一项可获纯利2000
‑
3500元，因此以驴血开发高品质血红素拥有很高的经济价值，然而现实是驴宰杀取肉后其血液往往没有得到深度开发，不但使驴的价值无法充分利用，而且增加了成本负担。
[0006]现有技术对提取血红素的报道很多，然而还存在不少问题，在提纯过程中使用毒性较大的某些有机溶剂，给产品带来安全隐患，目前常规的血红素的提取中多使用了强酸、强碱、丙酮、氯仿；氯仿和丙酮是易制毒或易制爆有机溶剂，在特定条件下能转变为剧毒物质，其用于血红素的提取生产安全隐患较大；加入某些无机强酸和强碱会破坏血液中蛋白质的结构，会影响到驴血中其他生物活性物质，如：免疫球蛋白，凝血酶、超氧化物歧化酶等的提取，不利于驴血资源的综合利用。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供的专利技术目的在于提供一种二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法。通过本专利技术一种二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法，该二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法，二氧化碳超临界萃取过程使用的有机溶剂少，仅用少量乙醇作为夹带剂，乙醇易分离，且为食品友好型试剂，易溶于水，洗脱简单，无残留，能够避免血红素被污染，工艺过程绿色低碳，超临界萃取速度比一般的溶剂提取效率高，粗血红素纯化过程中利用了血红素易溶于氨水，难溶于碳酸盐溶液的化学特性，工艺设计简单，加热过程中挥发的少量氨，分解重新得到氨水溶液，用来纯化血红素的氨水溶液可以循环使用，整个工艺过程绿色环保无污染。
[0008]为了实现上述效果，本专利技术提供如下技术方案：一种二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法，包括以下步骤：
[0009]步骤一、新鲜驴血抗凝，新鲜驴血，加入柠檬酸三钠溶液，搅拌均匀，得新鲜抗凝驴血。
[0010]步骤二、分离红细胞，取抗凝驴血，离心，弃清液，收集红细胞，用生理盐水(0.75％ NaCl溶液)洗涤。
[0011]步骤三、溶血，加入离子水与95％浓度的乙醇，超声搅拌，使红细胞吸水胀裂，释放血红蛋白，用1倍的去离子水洗涤，获得混合沉淀物。
[0012]步骤四、真空冷冻干燥处理，将混合沉淀物放入低温冰箱预冷冻，然后进行真空冷冻干燥。
[0013]步骤五、超临界萃取，将冷冻干燥后的混合沉淀物，加入到CO2超临界萃取仪器中，乙醇作为夹带剂，萃取后减压分离得血红素粗品。
[0014]步骤六、提纯，血红素粗品用氨水溶液超声溶解，过滤沉淀后，恒温搅拌，通入过量的CO2，充入CO2恒压，离心得到血红素沉淀。
[0015]步骤七、真空冷冻干燥：将血红素沉淀用去离子水洗涤，预冷，进行真空冷冻干燥，得到粉状的驴血红素。
[0016]步骤八、氨水回收，加热碳酸氢铵的液体，获得氨水备用。
[0017]进一步的，根据步骤一中的操作步骤，所述新鲜驴血抗凝，新鲜驴血，加入0.5％～1％柠檬酸三钠溶液(V/V＝10:1)，搅拌均匀，得新鲜抗凝驴血。
[0018]进一步的，根据步骤二中的操作步骤，所述分离红细胞，取抗凝驴血，3000r/min离心15min，弃清液(血浆)，收集红细胞，用生理盐水(0.75％ NaCl溶液)洗涤2次，洗涤方法为：用适量生理盐水悬浮红细胞，搅拌均匀，离心，收集红细胞沉淀。
[0019]进一步的，根据步骤三中的操作步骤，所述溶血加入相当于红细胞体积1倍的去离子水、0.25倍95％乙醇，超声搅拌10min，使红细胞吸水胀裂，释放血红蛋白，用1倍的去离子水洗涤2次，洗涤方法为：用1倍的去离子水搅拌均匀，离心，收集含血红蛋白的混合物沉淀。
[0020]进一步的，根据步骤四中的操作步骤，所述真空冷冻干燥处理：将步骤3中获得混合沉淀物，放入低温冰箱预冷冻到
‑
60℃，然后进行真空冷冻干燥。
[0021]进一步的，根据步骤五中的操作步骤，所述超临界萃取：将冷冻干燥后的混合沉淀物，加入二氧化碳超临界萃取仪器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占萃取溶剂的体积分数为2.5％，萃取3h，减压分离得血红素粗品。
[0022]进一步的，根据步骤五中的操作步骤，所述二氧化碳超临界萃取条件：提取压力为255bar(25.5Mpa)，温度为50
‑
55℃，动态萃取二氧化碳流量为1
‑
2L/min。
[0023]进一步的，根据步骤六中的操作步骤，所述血红素粗品用20倍1％的氨水溶液超声溶解20min，过滤沉淀后，65℃恒温搅拌1h，通入过量的二氧化碳，充入二氧化碳恒压0.1Mpa保持2h，4℃离心得到血红素沉淀。
[0024]进一步的，根据步骤七中的操作步骤，所述真空冷冻干燥：将血红素沉淀洗涤去离子水洗涤3次后，预冷到后
‑
60℃，进行真空冷冻干燥，得到粉状的驴血红素，纯度90
‑
98％。
[0025]进一步的，根据步骤八中的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、新鲜驴血抗凝，新鲜驴血，加入柠檬酸三钠溶液，搅拌均匀，得新鲜抗凝驴血；S2、分离红细胞，取抗凝驴血，离心，弃清液，收集红细胞，用生理盐水(0.75％NaCl溶液)洗涤；S3、溶血，加入离子水与95％浓度的乙醇，超声搅拌，使红细胞吸水胀裂，释放血红蛋白，用1倍的去离子水洗涤，获得混合沉淀物；S4、真空冷冻干燥处理，将混合沉淀物放入低温冰箱预冷冻，然后进行真空冷冻干燥；S5、超临界萃取，将冷冻干燥后的混合沉淀物，加入到CO2超临界萃取仪器中，乙醇作为夹带剂，萃取后减压分离得血红素粗品；S6、提纯，血红素粗品用氨水溶液超声溶解，过滤沉淀后，恒温搅拌，通入过量的CO2，充入CO2恒压，离心得到血红素沉淀；S7、真空冷冻干燥：将血红素沉淀用去离子水洗涤，预冷，进行真空冷冻干燥，得到粉状的驴血红素；S8、氨水回收，加热碳酸氢铵的液体，获得氨水备用。2.据权利要求1所述的一种二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法，其特征在于，包括以下步骤：根据S1中的操作步骤，所述新鲜驴血抗凝，新鲜驴血，加入0.5％～1％柠檬酸三钠溶液(V/V＝10:1)，搅拌均匀，得新鲜抗凝驴血。3.据权利要求1所述的一种二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法，其特征在于，包括以下步骤：根据S2中的操作步骤，所述分离红细胞，取抗凝驴血，3000r/min离心15min，弃清液(血浆)，收集红细胞，用生理盐水(0.75％NaCl溶液)洗涤2次，洗涤方法为：用适量生理盐水悬浮红细胞，搅拌均匀，离心，收集红细胞沉淀。4.据权利要求1所述的一种二氧化碳超临界提取驴血血红素的方法，其特征在于，包括以下步骤：根据S3中的操作步骤，所述溶血加入相当于红细胞体积1倍的去离子水、0.25倍95％乙醇，超声搅拌10min，使红细胞吸水胀裂，释放血红蛋白，用1倍的去离子水洗涤2次，洗涤方法为：用1倍的去离子水搅拌均匀，离心，收集含血红蛋白的混合...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈亮，张宁，程月，李春辉，岳士忠，于家峰，王会松，高晨，夏冬，贾涛，曾强成，
申请(专利权)人：德州学院，
类型：发明
国别省市：