褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法技术

本发明专利技术公开了褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法，包括以下步骤：S1、选取原材料；S2、配置基础稀释液；S3、配置褪黑素溶液；S4、基于步骤2与步骤3对山羊精液进行保存。本发明专利技术提供以褪黑素为奶山羊精液常温抗菌保存中的抗氧化活性成分以及其他物质结合的奶山羊精液常温保存稀释液配制方法。通过在常温基础稀释液中添加褪黑素常温保存后，对山羊精子活率，活力，以及对其他指标进行测量，其中褪黑素作为稀释液中唯一的抗氧化剂和保存质量提高的活性成分。活性成分。

【技术实现步骤摘要】
褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法


[0001]本专利技术涉及山羊精液保存
，尤其涉及褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法。

技术介绍

[0002]人工授精是动物遗传改良计划中有价值且必不可少的工具，并且山羊精液保存的成功对于奶山羊人工繁殖技术的使用至关重要。然而，温度降低会对精子细胞造成严重损害。最近对其他物种的研究表明，如果能降低精子免受脂质过氧化(代谢未改变的副作用)风险的增加，那么常温和低温的精液保存是一种可行的替代方法。目前的羊的人工授精用到的主要方式也主要是用鲜精常温稀释使用和低温保存运输使用。
[0003]山羊精液的保存在主要分为冷冻保存(
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196℃液氮保存)常温保存(15℃
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25℃)与低温保存(4℃)，常温保存采用的原理是通过弱酸环境抑制精子活动和代谢，减少能量的消耗。而低温保存采用的原理是采用较低的温度使精子处于较低的代谢水平，并在稀释液中添加一定糖分给精子提供能量，需要精子复苏时再将其保存温度缓慢升至37℃。目前山羊精液的保存技术与猪、牛的精液保存质量还存在一定差距，并且存在效果不稳定，母羊配种后受胎率低等问题。尽管很多研究人员在精液稀释保存液上做了很多研究，比如稀释液配方的优化和稀释液保存程序的优化，但是该过程仍然会导致精子超微结构的改变和精子配种受胎率下降。近期报道在一些物种的精液中添加某些促生存因子可以改善精子的保存质量，例如L
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肉碱、丙酮酸盐等。因此，有必要研究这些因素在常温维持精子功能的同时，将脂质过氧化作用降至最低并降低ROS的作用，所以，筛选良好的精液稀释液配方对于精液保存质量是至关重要的。
[0004]为此，我们提出褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术采用了如下技术方案：
[0006]褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法，包括以下步骤：S1、选取原材料；S2、配置基础稀释液；S3、配置褪黑素溶液；S4、基于步骤2与步骤3对山羊精液进行保存。
[0007]作为本专利技术中更进一步的，步骤1中，S1
‑
1、山羊精液保存液原材料包括：柠檬酸、果糖、葡萄糖、三羟甲基氨基甲烷、柠檬酸三钠、青霉素、链霉素、双蒸水。
[0008]作为本专利技术中更进一步的，S1
‑1‑
1、原材料具体重份：每100ml包含柠檬酸14g、果糖4g、葡萄糖6g、三羟甲基氨基甲烷27g、柠檬酸三钠2g、青霉素50万单位、链霉素50万单位、双蒸水。
[0009]作为本专利技术中更进一步的，步骤2中，S2
‑
1、称取步骤1
‑1‑
1中柠檬酸、果糖、葡萄糖、三羟甲基氨基甲烷与柠檬酸三钠相关组分并倒在在烧杯中。
[0010]作为本专利技术中更进一步的，S2
‑
2、用双蒸水定容至1L，而后加入50万单位青霉素与50万单位链霉素，溶解稀释液成分时可放置于37摄氏度水浴锅中加速溶解。
[0011]作为本专利技术中更进一步的，S2
‑
3、溶解后将稀释液用0.22μm滤器过滤一遍，配置完成后用封口膜密封，放置于4℃冰箱待用。
[0012]作为本专利技术中更进一步的，步骤3中，S3
‑
1、购买20mg褪黑素标准品，用10ml超纯水溶解后，配置为2mg/ml的褪黑素溶液，并分装成多个小管，并在
‑
20摄氏度保存。
[0013]作为本专利技术中更进一步的，步骤4中，S4
‑
1、采集山羊精液，山羊选年龄集中在2
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3岁，并且性欲旺盛无特殊疾病，精液采集使用假阴道法。采精前一段时间要对公羊进行爬跨训练，诱导公羊与母羊进行交配训练。正式采精时，对母羊用温水擦拭阴道口，先用母羊引诱公羊爬跨然后采精。收集好的精液在光学显微镜下观察其活力，选择气味颜色正常的精液，具体的是用CASA(精子辅助分析仪)镜检，其中活率大于80％，密度为2
‑
4亿个/ml的精液才能使用。
[0014]作为本专利技术中更进一步的，S4
‑
2、稀释精液，按照精液：稀释液为1：8的比例稀释，具体的是稀释分为两步法，首先按照精液：稀释液1：1的比例进行等温稀释，稀释时，应将稀释液沿着管壁缓慢加入，轻轻摇匀，待平衡1分钟后，再将余下稀释液缓慢加入再轻轻摇匀，两步中的稀释液与精液都应保持等温。
[0015]作为本专利技术中更进一步的，S4
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3、精液稀释完成后添加褪黑素溶液，并将其分装在灭好菌的10ml离心管里，并用18层纱布包裹，包裹后放置在恒温箱中，温度设置为17℃，保存期间每隔24h将精子轻轻摇动，防止精子沉淀在底部。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0017]本专利技术采用的褪黑素，能在山羊精液常温保存中提高精液的保存质量，能在第3天活率和活力达到0.6以上，在山羊精液常温保存液中添加褪黑素后，可有效提高精子的质膜完整率和顶体完整率，可以有效缓解氧化应激对精子的损害；
[0018]另外本专利技术提供褪黑素作为奶山羊常温保存稀释液中唯一的抗氧化剂成分和自由基清除成分以及精液保存质量提高的有效成分，无需添加其他活性成分。
具体实施方式
[0019]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0020]实施例一
[0021]褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法，包括以下步骤：S1、选取原材料：
[0022]S1
‑
1、山羊精液保存液原材料包括：柠檬酸、果糖、葡萄糖、三羟甲基氨基甲烷、柠檬酸三钠、青霉素、链霉素、双蒸水。
[0023]S1
‑1‑
1、原材料具体重份：每100ml包含柠檬酸14g、果糖4g、葡萄糖6g、三羟甲基氨基甲烷27g、柠檬酸三钠2g、青霉素50万单位、链霉素50万单位、双蒸水；
[0024]S2、配置基础稀释液：
[0025]S2
‑
1、称取步骤1
‑1‑
1中柠檬酸、果糖、葡萄糖、三羟甲基氨基甲烷与柠檬酸三钠相关组分并倒在在烧杯中。
[0026]S2
‑
2、用双蒸水定容至1L，而后加入50万单位青霉素与50万单位链霉素，溶解稀释液成分时可放置于37℃水浴锅中加速溶解。
[0027]S2
‑
3、溶解后将稀释液用0.22μm滤器过滤一遍，配置完成后用封口膜密封，放置于
4℃冰箱待用。
[0028]S3、配置褪黑素溶液：
[0029]S3
‑
1、购买20mg褪黑素标准品，用10ml超纯水溶解后，配置为2mg/ml的褪黑素溶液，并分装成多个小管，并在
‑
20摄氏度保存。
[0030]S4、基于步骤2与步骤3对山羊精液进行保存：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法，包括以下步骤：S1、选取原材料；S2、配置基础稀释液；S3、配置褪黑素溶液；S4、基于步骤2与步骤3对山羊精液进行保存。2.根据权利要求1所述的褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法，其特征在于，步骤1中，S1
‑
1、山羊精液保存液原材料包括：柠檬酸、果糖、葡萄糖、三羟甲基氨基甲烷、柠檬酸三钠、青霉素、链霉素、双蒸水。3.根据权利要求1所述的褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法，其特征在于，S1
‑1‑
1、原材料具体重份：每100ml包含柠檬酸14g、果糖4g、葡萄糖6g、三羟甲基氨基甲烷27g、柠檬酸三钠2g、青霉素50万单位、链霉素50万单位、双蒸水。4.根据权利要求1所述的褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法，其特征在于，步骤2中，S2
‑
1、称取步骤1
‑1‑
1中柠檬酸、果糖、葡萄糖、三羟甲基氨基甲烷与柠檬酸三钠相关组分并倒在在烧杯中。5.根据权利要求1所述的褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法，其特征在于，S2
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2、用双蒸水定容至1L，而后加入50万单位青霉素与50万单位链霉素，溶解稀释液成分时可放置于37摄氏度水浴锅中加速溶解。6.根据权利要求1所述的褪黑素作为奶山羊常温精液保存制备方法，其特征在于，S2
‑
3、溶解后将稀释液用0.22μm滤器过滤一...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯金星，闫红军，李方舟，裴党帅，郭鹏，杨凯，胡劲草，韦建东，
申请(专利权)人：杨凌职业技术学院，
类型：发明
国别省市：