导致3-甲基戊烯二酸尿症制造技术

本发明专利技术提供了一种导致3

【技术实现步骤摘要】
导致3
‑
甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的突变基因、检测及应用


[0001]本专利技术涉及检测试剂领域，尤其涉及一种导致3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的突变基因、检测及应用。

技术介绍

[0002]3‑
甲基戊烯二酸尿症(3
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methylglutaconic aciduria,MGCA)是一种罕见的线粒体相关遗传代谢病，又称CLPB缺乏症，该病是支链氨基酸L
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亮氨酸在线粒体中分解代谢受阻所致，患者尿液中3
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甲基戊烯二酸(3
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methylglutaconic acid,3
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MGA)及其旁路代谢产物增高，从而引起一系列的临床表型如精神发育迟滞、惊厥等。该病的主要特点为尿有机酸3
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MGA及3
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甲基戊二酸(3
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methylglutaric acid,3
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MG)浓度增高。目前已鉴定8个MGCA亚型，CLPB基因变异可以引起3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型伴白内障
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神经病变和嗜中性白血球减少症(3
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methylgluta conic aciduria with cataracts,neurologic involvement,and neutropenia，MEGCANN，OMI M 616271)，呈常染色体隐性遗传，主要的临床表型为神经退化和嗜中性白血球减少。
[0003]CLPB基因(MIM 616254)定位于染色体11q13.4，包括17个外显子和16个内含子，基因长149.0kb，开放读码框2124bp，编码707个氨基酸序列的酪蛋白水解肽酶B(CLPB)，其N端有4个锚蛋白样重复序列介导蛋白质
‑
蛋白质相互作用，C端具有ATP结合基序的结构域，C末端结构域类似于ATP酶家族中发现的结构域。CLPB是一种寡聚AAA+ATP酶，是降解或重新激活错误折叠蛋白质的细胞质量控制中的关键角色，这些酶能利用ATP水解的能量产生重塑结合底物所需的机械力。在细胞中，低聚CLPB通过重新折叠底物蛋白的保守穿线活性重新激活聚集蛋白。CLPB基因突变可导致3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的突变基因。
[0004]因此，基因突变是导致疾病发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的重要遗传学标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断，本专利技术首次发现CLPB一种新型复合杂合突变，可导致3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的突变基因，并据此研制相应的检测试剂盒，助力3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型基因突变的筛查和诊断，并为其药物筛选、药效评价及靶向治疗提供新的技术支持。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的是提供一种导致3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的突变基因、检测及应用，以解决3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的的筛查和诊断的技术问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了一种导致3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的突变基因，所述突变基因相比于野生型CLPB基因，在所述野生型CLPB基因的第一位点和/或第二位点发生突变。
[0007]其中，所述第一位点为所述野生型CLPB基因的第8号外显子的第1016位碱基对应的位点，所述第二位点为所述野生型CLPB基因的第1号外显子的第130位碱基G对应的位点。
[0008]本专利技术还提供了上述突变基因引发的3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的检测试剂，检测
试剂包括针对基因突变的位点设计的特异性扩增引物。
[0009]根据本申请的实施方式，特异性扩增引物包括CLPB
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1F、CLPB
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1R、CLPB
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2F、CLPB
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2R，CLPB
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1F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，CLPB
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1R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，CLPB
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2F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，CLPB
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2R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0010]本专利技术还提供了一种3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的检测试剂盒，包括上述的检测试剂。
[0011]根据本申请的实施方式，还包括PCR扩增反应的试剂，和/或DNA测序时所需的试剂和测序引物。
[0012]根据本申请的实施方式，测序引物包括CLPB
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Seq1F、CLPB
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1R、CLPB
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2F和CLPB
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2R，CLPB
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Seq1F的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，CLPB
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Seq1R的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，CLPB
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Seq2F的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，CLPB
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Seq2R的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0013]本专利技术还提供了上述检测试剂或上述检测试剂盒在3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的检测方法中的应用。
[0014]根据本申请的实施方式，检测试剂的检测样本包括血液和/或羊水。
[0015]本次申请提出的导致3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的突变基因，可以有效将3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型患者和正常人群区分开，因此，本专利技术的致病基因突变可以作为诊断3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的生物标志物。本专利技术可通过检测受试者是否携带有上述突变，用于筛查或诊断3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的遗传学诊断，以指导治疗。本专利技术所提供的检测试剂盒可用于快速、有效地预测或诊断3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型。本专利技术为3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的发病机制研究奠定了重要基础，为3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型患者的治疗提供全新的理论依据。本专利技术可以为治疗3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型提供可能的药物靶点。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种导致3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的突变基因，其特征在于，所述突变基因相比于野生型CLPB基因，在所述野生型CLPB基因的第一位点和/或第二位点发生突变；其中，所述第一位点为所述野生型CLPB基因的第8号外显子的第1016位碱基对应的位点，所述第二位点为所述野生型CLPB基因的第1号外显子的第130位碱基G对应的位点。2.一种由权利要求1所述突变基因引发的3
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甲基戊烯二酸尿症
Ⅶ
型的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括针对所述基因突变的位点设计的特异性扩增引物。3.根据权利要求2所述检测试剂，其特征在于，所述特异性扩增引物包括CLPB
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1F、CLPB
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1R、CLPB
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2F、CLPB
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2R，所述CLPB
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1F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CLPB
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1R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述CLPB
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2F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述CLPB

【专利技术属性】
技术研发人员：曾桥，薛斌，范园，罗娇娇，
申请(专利权)人：湖南家辉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：