一种靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体及其应用，属于基因工程技术领域。为以下至少一种：(1)靶向表达GPR87表面抗原细胞的嵌合抗原受体；(2)靶向表达GPR87表面抗原细胞，同时分泌IL

【技术实现步骤摘要】
一种靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用。

技术介绍

[0002]GPR87(G
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protein coupled receptor87，G蛋白偶联受体87)。研究发现，在多种实体肿瘤与癌症细胞中GPR87高表达(图1)，并且GPR87的表达与患者临床病理特征相关(Ceylan S，et al.2020)；GPR87能够促进细胞增殖、血管新生及吉西他滨依赖的凋亡耐受(Zhang X，et al.2015)；另外，GPR87通过激活NF
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κB信号通路增强了胰腺癌的侵袭性(Wang L，et al.2017)。因此，GPR87可作为多种实体肿瘤的潜在治疗靶点。
[0003]IL
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15SA融合蛋白可以延长IL
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15在血清中的半衰期并增加IL
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15β受体对免疫细胞的亲和力，募集CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤细胞和肥大细胞，能够特异性结合IL
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15并与周围效应NK细胞和T细胞上的IL
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15Rβ
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γ链形成免疫突触结构，激活NK/T细胞的JAK/STAT等通路发挥作用(Cheever MA，et al.2008；Mortier E，et al.2006)。促进CD3+T细胞(主要是CD8+T细胞)和NK1.1+NK细胞增殖；增强体内细胞因子对IgG或T细胞参与抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的影响(Waldmann TA，et a1.2020；Akdis M，et a1.2011)；IL
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15还可以促进寿命更长、亲和力更高的CD8+T细胞的诱导，可以非常有效地杀死肿瘤细胞，最终增强免疫疗法的抗肿瘤作用(Xu H，et al.2021；Qiyue Hu，et al.2018；Martin A，et al.2008)。
[0004]IL1RL2/IL
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36R受体结合并通过其发出信号的细胞因子，进而激活靶细胞中的NF
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kappa
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B和MAPK信号通路。IL
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36信号系统的一部分，被认为存在于上皮屏障中并参与局部炎症反应；类似于与其共享辅助受体IL1RAP的IL
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1系统。通过作用于角质形成细胞、树突状细胞和间接作用于T细胞来驱动组织浸润、细胞成熟和细胞增殖，从而参与皮肤炎症反应(Bachmann M，et al.2012)。在培养的角质形成细胞中诱导巨噬细胞、T细胞和中性粒细胞趋化因子的表达，例如CCL3、CCL4、CCL5、CCL2、CCL17、CCL22、CL20、CCL5、CCL2、CCL17、CCL22、CXCL8、CCL20和CXCL1；还刺激其自身的表达以及原型皮肤促炎参数TNF
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α、S100A7/牛皮癣和诱导型NOS的表达(Gresnigt M.S，et al.2013)。可能在特定中性粒细胞气道炎症期间的促炎反应中发挥作用：激活原发性肺成纤维细胞中的丝裂原活化蛋白激酶和NF
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kappa B，并刺激肺成纤维细胞中IL
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8和CXCL3和Th17趋化因子CCL20的表达。可能参与对真菌病原体(如烟曲霉)的先天免疫反应(Debets R，et al.2001；Foster A.M，et al.2014)。将IL
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36
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γ基因工程入CAR，可以显著的改善增殖和持久性。表达IL
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36γ的CAR
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T细胞能够增强肿瘤小鼠脾巨噬细胞和树突状细胞上MHC II类和CD86的表达，提示IL
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36在抗原提呈细胞的成熟中发挥作用。在小鼠模型，显示出超强的抗肿瘤活性(Li X，etal.2020)。
[0005]CXCL11(C
‑
X
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C motif chemokine ligand 11，C
‑
X
‑
C基序趋化因子11又名干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I
‑
TAC))，是CXC趋化因子家族中的小分子量细胞因子(Huoman J，
et al.2021)。它在外周血白细胞、胰腺和肝脏中高度表达，在胸腺、脾和肺中中等程度表达，在小肠、胎盘和前列腺组织中低度表达(Moreno B，et al.2022)。CXCL11通过与细胞表面趋化因子受体CXCR3相互作用来作用于靶细胞。CXCL11可以趋化活化的T细胞(RotA，et al.2010；Li L，et al.2022)。
[0006]趋化因子受体(CXC chemokine receptor 4，CXCR4)是一个具有7次跨膜结构的G蛋白耦联受体(G Protein
‑
Coupled Receptor，GPCR)，由352个氨基酸组成，其编码基因位于染色体2q21(Wescott，Melanie P，et al.2016)。CXCR4在体内大部分组织和器官上都有表达，包括骨髓、脐血和动员的外周血来源的细胞表面，以及多种非造血干细胞表面表达。近年来研究发现，肿瘤细胞转移到特定器官是不同器官通过趋化作用吸引特定类型肿瘤细胞归巢的结果。在众多的趋化因子受体中，CXCR4在许多肿瘤中都存在表达增强。目前的研究表明，与趋化因子受体CXCR4相关的癌症超过23种，它还能促进血管生成，细胞的转移、生长或生存(Chatterjee，et al.2014)。此外，还参与HIV病毒感染(Hernandez，Paolo A.，et al.2003)。这些生物学功能决定了CXCR4靶向药可用于肿瘤、造血干细胞动员、HIV等疾病的治疗。
[0007]趋化因子CXCL2(又称SDF
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1，基质细胞衍生因子1)是CXCR4的唯一配体，属于CXC趋化因子家族成员，分子量约为8kD。CXCL12包含α和β两个异构体，由骨髓基质细胞及其他相关的间皮细胞和上皮细胞分泌(De Paepe，Boel，et al.2004)。CXCR4作为CXCL12行使功能的唯一跨膜受体，组成的CXCR4/CXCL12轴参与诸多生物学过程，包括
①
肿瘤的转移、增殖、黏附以及血管新生多种机制；
②
介导造血干细胞的动员与归巢，与趋化干细胞靶向受损组织、扩大旁分泌和促进血管新生有关；
③
调节成熟B细胞、浆细胞、中性粒细胞、单核细胞、T细胞和树突状细胞的运动，与机体的免疫功能有着密切的关系(Chatterjee，et al.2014；Asri，Amir，et al.2016)。因此，CXCR4通过结合CXCL12，在介导免疫及炎症反应、调控造血、诱导血管生成、肿瘤侵袭转移等多种生理本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体，其特征在于，为以下至少一种：(1)靶向表达GPR87表面抗原细胞的嵌合抗原受体；(2)靶向表达GPR87表面抗原细胞，同时分泌IL
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15SA融合蛋白，IL
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36γ或CXCL11的招募嵌合抗原受体(3)靶向表达GPR87表面抗原细胞，同时膜表达CXCR4或CXCR6的浸润嵌合抗原受体；(4)靶向表达GPR87表面抗原细胞，且分泌IL
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15SA融合蛋白，IL
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36γ或CXCL11，同时膜表达CXCR4或CXCR6的融合嵌合抗原受体。2.根据权利要求1所述靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体，其特征在于，所述融合嵌合抗原受体包括：CD8α信号肽结构域，GPR87结合结构域，标签蛋白Strep II结构域，跨膜蛋白CD28 TM结构域和细胞内信号CD28 ICD、4
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1BB ICD、CD3ζ结构域，分泌IL
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15SA融合蛋白、IL
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36γ或CXCL11的结构域，膜表达CXCR4或CXCR6的结构域。3.根据权利要求2所述靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体，其特征在于，所述GPR87结合结构域的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：13中的至少一种，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：14所示；所述CD8α信号肽结构域的氨基酸序列包括SEQ ID NO：21，其核苷酸序列如SEQ ID NO：22所示。4.根据权利要求2所述靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体，其特征在于，所述标签蛋白为Strep II，其氨基酸序列序列如SEQ ID NO：3所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述连接域为CD8铰链区，其氨基酸序列序列如SEQ ID NO：23所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述跨膜结构域为CD28 TM，其氨基酸序列序列如SEQ ID NO：25所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO：26所示。5.根据权利要求2所述靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体，其特征在于，所述细胞内信号结构域由CD28 ICD、4
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1BB ICD和CD3ζ组成，其氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。6.根据权利要求2所述靶向表达GPR87表面抗原细胞的融合嵌合抗原受体，其特征在于，所述分泌IL
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15SA融合蛋白结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述IL
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36γ结构域的氨基酸序列如SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：张同存，孙钒，崔烨挺，吕梦清，
申请(专利权)人：武汉波睿达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：