一种编码鸡传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA及其mRNA疫苗制造技术

本发明专利技术提供了一种编码鸡传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA及其mRNA疫苗，所述mRNA至少含有编码鸡传染性法氏囊病病毒的至少一个蛋白，和/或至少一个蛋白的片段的编码区。本发明专利技术的编码鸡传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA生产速度更快、更灵活、成本更低，不会被整合到宿主基因组中，保证了基本的安全性。同时，本发明专利技术还公开了编码鸡传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA用于制备预防鸡传染性法氏囊病的mRNA疫苗的用途及mRNA疫苗，与其他复杂疫苗生产相比，本发明专利技术的疫苗反应时间快，污染风险低。污染风险低。污染风险低。

【技术实现步骤摘要】
一种编码鸡传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA及其mRNA疫苗


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种基于mRNA的表达传染性法氏囊病病毒蛋白抗原序列片段、变体或衍生物，可用于预防和治疗传染性法氏囊病病毒感染导致的疾病，更加具体地，涉及一种编码传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA及其mRNA疫苗。

技术介绍

[0002]传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease Virus, IBDV）属于双RNA病毒科，是一种包含两条双链RNA的病毒，包含两种血清型。在IBDV的两个血清型中，血清II型则对鸡不致病，引发IBD的主要为血清I型。血清I型自1957年发现以来，IBDV主要发生过两次较大的变异，可分为经典株、变异株和超强株。法氏囊是鸡免疫系统特有器官，病毒侵染会导致免疫抑制，造成与其他疾病的混合感染。一般感染症状为法氏囊病变，该病通常对雏鸡影响较大，急性发病时会造成大量鸡的死亡，给禽类养殖业造成严重的经济损失。针对鸡传染性法氏囊病病毒，目前国内在一般采用灭活疫苗、活疫苗等等方法进行免疫。但传统疫苗免疫效果相对较差、不能很快应对新毒株以及生成成本高的问题亟需新的疫苗方式来替代。
[0003]mRNA疫苗是一种核酸疫苗，将在体外合成的编码特定抗原的mRNA序列，导入至体内，并表达为相应的抗原蛋白，通过诱导免疫系统针对此抗原蛋白的免疫应答反应，从而达到预防疾病的目的。mRNA疫苗现在主要用来防治多种感染性疾病：（1）RNA病毒感染性疾病：mRNA疫苗可用于传染性强、危害性大的RNA病毒感染性疾病的预防，如新冠病毒感染，目前已经在预防新冠病毒感染方面起到重要作用；（2）DNA病毒感染性疾病：mRNA疫苗可用于巨细胞病毒等DNA病毒感染性疾病的预防。与大多数生物制品的生产相比，mRNA的制造具有优势。不需要细胞培养。此外，mRNA的非整合性和在细胞中的瞬时表达有利于其安全性。

技术实现思路

[0004]基于此，有必要针对现有技术中所存在的预防鸡传染性法氏囊病的传统疫苗免疫效果相对较差、不能很快应对新毒株以及生成成本高的问题，提供一种预防和治疗传染性法氏囊病病毒引起疾病的人工设计的核糖核酸分子，该核酸分子可以用于制备预防鸡传染性法氏囊病病毒导致的疾病的疫苗。在本专利技术中，传染性法氏囊病病毒可以指I类或II类各种不同的血清型。
[0005]本专利技术具体用如下技术方案：一种编码传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA，所述mRNA至少含有编码传染性法氏囊病病毒的至少一个蛋白，和/或至少一个蛋白的片段的编码区。具体的，蛋白的片段例如可以为但不限于为蛋白的亚基、功能区域或提供稳定抗原功能的片段。由人工合成mRNA表达的外源蛋白作为抗原在接种动物体会被抗原呈递细胞APC识别，引发机体的免疫反应。通常能引起免疫反应的抗原表位位于蛋白三维结构的表面，只需要较短的肽段序列或局部空间结构就可以足够产生相对应的抗体，各个表位的免疫原性强度不一。一般来说全长蛋白由
于折叠最容易接近于天然蛋白，所产生的中和抗体效果较好。而经过具体的实验分析，中和抗体表位集中于某些特定的部分序列，也可以只表达蛋白的部分达到相似甚至更好的效果。
[0006]传染性法氏囊病病毒基因组编码蛋白有VP1、VP2、VP3、VP4和VP5，其中VP2蛋白是IBDV外壳的主要成分，其暴露于外壳表面的表位最适合引起免疫反应以及诱导产生中和抗体。
[0007]具体地，所述的编码传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA，编码区编码的传染性法氏囊病病毒的至少一个蛋白，和/或至少一个蛋白的片段的氨基酸序列是从传染性法氏囊病病毒编码蛋白而来的全长或部分序列，优选地，所述蛋白为VP2蛋白，如SEQ ID NO.1所示。
[0008]具体地，所述的编码传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA，为了提高翻译效果，编码区经过序列设计优化，包括密码子优化、GC含量调整、核酸二级结构稳定化处理。同样的蛋白序列编码由于密码子简并性可以对应为多种核酸序列。所述mRNA抗原功能编码序列是与SEQ ID NO.4全长或相对应的片段有75%、80%、85%、90%、95%、99%相同的多聚核苷酸序列，或者与之功能相同的序列。
[0009]具体地，所述的编码传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA，为了模拟内源生成的mRNA，需要的功能区块包含5
’
非翻译区、开放阅读框、3
’
非翻译区和多聚腺苷酸尾序列，来达到高表达抗原的目的。所述mRNA包含SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6中的多条序列，与所述序列之一的同源性有70%
‑
100%。其中的开放阅读框编码病毒蛋白全长或部分肽段序列。
[0010]优选地，所述mRNA序列由SEQ ID NO.3
‑
6组成。
[0011]优选地，其编码的蛋白可以包含异源的肽段与之形成融合蛋白。
[0012]优选地，异源肽段可以为信号肽、起到辅助蛋白形成多聚结构的肽段。
[0013]具体地，为了在细胞内稳定mRNA分子，高效利用翻译系统和降低针对mRNA本身的免疫反应，所述的编码传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA，所述mRNA包含有帽子结构。天然mRNA结构区别于其他胞内核酸分子的一个重要方面是在其5
’
端含有一个倒扣的鸟苷酸。这个结构一方面保护了mRNA不被核酸外切酶降解，更重要的是起到募集翻译起始复合物的作用，在“帽依赖型翻译起始”过程中扮演了最关键的角色。前人研究表明具有Cap结构的mRNA相对于无Cap的相同序列分子其蛋白翻译能力有巨大差异。在mRNA第一个碱基的核糖2
’
基团为羟基时，Cap结构被称为Cap0，如果被
‑
O
‑
甲基取代则称为Cap1。文献报道证明Cap1的蛋白翻译效果要优于Cap0结构。
[0014]优选地，该帽子结构为Cap1。
[0015]具体地，所述的编码传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA，所述mRNA序列中的核苷包含如下一种或多种化学修饰的核苷：5
‑
甲基胞苷、假尿苷、N
‑1‑
甲基
‑
假尿苷、N
‑6‑
甲基腺苷。
[0016]优选地，所述的mRNA序列含有经过修饰的核苷N
‑1‑
甲基假尿苷，其与尿苷的比例为50%：50%。
[0017]优选地，核苷修饰比例为1%
‑‑
70%。
[0018]优选地，核苷修饰比例为5%
‑‑
70%。
[0019]优选地，核苷修饰比例为10%
‑‑
60%。
[0020]优选地，核苷修饰比例为20%
‑‑
60%。
[0021]优选地，核苷修饰比例为30%
‑‑
60%。
[0022]优选地，核苷修本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种编码鸡传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA，其特征在于，所述mRNA至少含有编码鸡传染性法氏囊病病毒的至少一个蛋白，和/或至少一个蛋白的片段的编码区。2. 根据权利要求1所述的编码鸡传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA，其特征在于，编码区编码的鸡传染性法氏囊病病毒的至少一个蛋白，和/或至少一个蛋白的片段的氨基酸序列是从鸡传染性法氏囊病病毒编码蛋白而来的全长或部分序列，如SEQ ID NO.1所示。3. 根据权利要求2所述的编码鸡传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA，其特征在于，所述mRNA是与SEQ ID NO.4有75%、80%、85%、90%、95%、99%相同的多聚核苷酸序列，或者与之功能相同的序列。4. 根据权利要求3所述的编码鸡传染性法氏囊病病毒抗原的mRNA，其特征在于，所述mRNA包含SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6中的多条序列，与所述序列之一的同源性有70%

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋剑豪，何召明，曹晴晴，易诚，胡洪鹏，谭翔，张帆，耿亦程，魏善明，赵李祥，钟天翼，
申请(专利权)人：苏州慧疗生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：