一种特发性血小板减少性紫癜动物模型的制作方法技术

本发明专利技术的制备方法为：ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，摘眼球或眶静脉采血，ＥＤＴＡ－Ｎａ↓［２］抗凝；梯度离心分离血小板并洗涤，调整浓度为１～２×１０↑［９］／Ｌ。取以上血小板悬液分别与等量的完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂混匀成乳白色油包水状混合物，作为抗原液。取含完全弗氏佐剂的抗原液分别注射于豚鼠的后足掌、背部皮下及腹股沟，前后共４次注射，每次注射至少５点，每点１００μｌ。于第６周取豚鼠全血，离心后取血清备用。抗血清从－２０℃取出，待完全融化后置于５６℃水浴３０ｍｉｎ。ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，分别在第１、３、５、７、９、１１、１３天腹腔注射抗血清，每次１００μｌ，在第１５天取材。本发明专利技术解决血小板减少维持时间较短的问题。可制备出小鼠特发性血小板减少性紫癜的动物模型稳定可控。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种特发性血小板减少性紫癜动物模型的制作方法，其特征在于：　抗原的制备ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，摘眼球或眶静脉采血，ＥＤＴＡ－Ｎａ↓［２］抗凝；梯度离心分离血小板并洗涤，调整浓度为１～２×１０↑［９］／Ｌ；　免疫豚鼠取以上血小板悬液分别 与等量的完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂混匀成乳白色油包水状混合物，作为抗原液，第１周取含完全弗氏佐剂的抗原液分别注射于豚鼠的后足掌、背部皮下及腹股沟；第２、３、５周取含不完全弗氏佐剂的抗原液分别注射于豚鼠后足掌、背部皮下及腹股沟，前后共４次注射，每次注射至少５点，每点１００μｌ，于第６周取豚鼠全血，１８００ｒｐｍ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ后取血清，即为豚鼠抗小鼠血小板抗血清（ＧＰ－ＡＰＳ），－２０℃冰箱储存备用；　抗血清的处理ＧＰ－ＡＰＳ从－２０℃取出，待完全融化后置于５６℃ 水浴３０ｍｉｎ，灭活；　抗体效价的检测采用双向琼脂扩散法测定豚鼠抗体效价，确定最佳血清稀释度，一般为１∶４或１∶８；　造模ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，分别在第１、３、５、７、９、１１、１３天腹腔注射抗血清，每次１００μｌ，在第１５天取材； 成模率在９５％－９８％，３周内没有自愈倾向。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：才丽平，范颖，蒋宁，林庶茹，曲道炜，曲怡，
申请(专利权)人：辽宁中医药大学，
类型：发明
国别省市：89[中国|沈阳]