本发明专利技术涉及尿沉渣SNORD15A作为早期肿瘤的标志物的应用，属于生物医学领域。所述标志物选自尿沉渣SNORD15A；所述的试剂盒，包括：逆转录反应体系、荧光定量PCR反应体系和内参体系。研究发现，在TCGA数据库、石蜡样本（FFPE）、尿沉渣中，SNORD15A在肾癌患者中特别是早期肾癌患者中相比对照组中明显上调，且差异具有统计学意义。此外SNORD15A在尿沉渣中存在稳定，不易被酶降解，可作为肾癌诊断及早期诊断的生物标志物。受试者工作特征曲线（ROC曲线）显示SNORD15A诊断肾癌的诊断效能AUC为0.7432，敏感性是61.8%，特异性是79%；诊断早期肾癌的诊断效能AUC为0.7441，敏感性是54.2%，特异性是87.7%，证实了SNORD15A作为新型非侵入性肾癌诊断和早期诊断标志物的潜力。诊断和早期诊断标志物的潜力。诊断和早期诊断标志物的潜力。
【技术实现步骤摘要】
尿沉渣SNORD15A作为早期肿瘤的标志物的应用
[0001]本专利技术涉及尿沉渣SNORD15A作为早期肿瘤的标志物的应用，属于生物医学领域。
技术介绍
[0002]肾细胞癌（Renal cell carcinoma, RCC）简称肾癌，是泌尿系统常见的恶性疾病之一，占原发性肾恶性肿瘤的85%。肾癌主要包括三种病理类型：肾透明细胞癌(Clear Cell Renal Cell Cancer, ccRCC)、乳头状细胞癌(papillary Renal Cell Carcinoma, pRCC)和嫌色性细胞癌(chromophobe Renal Cell Carcinoma, chRCC)。肾细胞癌发生隐匿，在发病早期患者通常无法感知。加之大部分人也没有对癌症进行早期筛查的习惯，从而导致部分患者被确诊时已处于晚期或出现转移，错过最佳治疗时机。目前，传统上用于辅助筛查诊断肾癌的肿瘤标志物有癌胚抗原（Carcinoembryonic Antigen, CEA）和甲胎蛋白（A
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fetoprotein, AFP）等。但作为泛癌标志物，它们的敏感性和特异性并不理想。因此，仅依靠现有标志物难以实现针对肾癌的早筛早诊。脱落细胞学检查和组织病理结果仍然是确诊肾癌的金标准，但这些方法具有侵入性，会对患者的身心造成一定创伤。另一方面，对于肾癌的治疗，最有效的办法是手术切除，但总体治疗效果差强人意。尤其是那些晚期合并转移的患者，其五年生存率很低，他们对于放疗和化疗的敏感性较差也是限制肾癌预后改善的重要因素。因此，亟需寻找一种更敏感和特异的肾癌早期诊断标志物以及更有效的治疗靶点，实现对肾癌患者的早发现、早诊断和早治疗，改善患者预后生存状况，降低肾癌死亡率。
[0003]snoRNAs是一种广泛存在于真核生物体内的非编码RNA，包含60
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300个核苷酸(nucleotide, nt)。多种研究显示，在哺乳动物的组织、血浆、血清、尿液及其他体液中均有snoRNAs的表达。借助其自身与相应蛋白结合形成小分子核仁核糖核蛋白（small nucleolar Ribonucleoprotein,snoRNP）复合物而不易被降解的优势，snoRNAs存在较稳定且易被检测。
技术实现思路
[0004]针对肾癌患者的早发现、早诊断和早治疗存在的问题及现状，本专利技术提供了一种使用方便、快捷、特异性高的用于早期诊断肾癌的试剂盒。本申请通过研究发现尿沉渣SNORD15A在肾癌患者及早期肾癌患者中表达水平明显上调，具有较好的诊断肾癌特别是早期肾癌的效能。
[0005]本申请的技术方案如下：尿沉渣SNORD15A作为早期肿瘤的标志物的应用，所述的肿瘤为肾癌；所述的尿沉渣SNORD15A的核苷酸序列为SEQ ID No.1，具体为：CTTCGATGAAGAGATGATGACGAGTCTGACTTGGGGATGTTCTCTTTGCCCAGGTGGCCTACTCTGTGCTGCGTTCTGTGGCACAGTTTAAAGAGCCCTGGTTGAAGTAATTTCCTAAAGATGACTTAGAGGCATTTGTCTGAGAAGG。
[0006]优选地，所述的试剂盒包括尿沉渣SNORD15A；具体包括逆转录反应体系、荧光定量
PCR反应体系和内参体系；所述的荧光定量PCR反应体系包括针对尿沉渣SNORD15A的正向引物和针对尿沉渣SNORD15A的反向通用引物；所述的针对SNORD15A的正向引物的核苷酸序列为SEQIDNo.2，具体为：TTCGATGAAGAGATGATGACGAGTCTG；所述的针对SNORD15A的反向通用引物的核苷酸序列为SEQIDNo.3，具体为：：CCACAGAACGCAGCACAGAGTAG。
[0007]优选地，所述内参体系中包括内参U6的正向和反向引物；所述的内参U6的正向引物的核苷酸序列为SEQIDNo.4，具体为：TGGAACGCTTCACGAATTTGCG；所述的内参U6的反向引物的核苷酸序列为SEQIDNo.5，具体为：GGAACGATACAGAGAAGATTAGC。
[0008]优选地，所述反转录反应体系的试剂包括多聚腺苷酸聚合酶、反转录酶混合液、反转录缓冲液和无核酸酶双蒸水。
[0009]上述试剂盒的制备方法，包括以下步骤：(1)提取尿沉渣；(2)提取总RNA；(3)基因组DNA去除反应；(4)逆转录反应； (5)荧光定量PCR扩增前准备； (6)荧光定量PCR扩增反应； (7)内参体系反应 (8)数据分析绘制荧光扩增曲线和溶解曲线，得出Ct值，应用ΔCt法分析荧光定量PCR结果，ΔCt值表示目的RNA的相对表达量，ΔCt值越小表明目的RNA表达越强；ΔCt=目的RNACt值－内参RNACt值。
[0010]本专利技术的有益效果：本专利技术首次提出相比于健康供者，肾癌患者尿沉渣SNORD15A明显上调，ROC曲线分析显示SNORD15A诊断肾癌的诊断效能AUC为0.7432，敏感性是61.8%，特异性是79%；相比于健康供着，早期肾癌患者尿沉渣SNORD15A明显上调。ROC曲线分析显示，AUC为0.7441，敏感性是54.2%，特异性是87.7%。
附图说明
[0011]图1.SNORD15A在肾癌FFPE组织中表达上调；图2.SNORD15A在肾癌尿沉渣中显著上调；图3.SNORD15A在早期肾癌尿沉渣中显著上调；图4.尿沉渣SNORD15A作为肾癌诊断标志物的ROC曲线分析；图5.尿沉渣SNORD15A作为早期肾癌诊断标志物的ROC曲线分析。
具体实施方式
[0012]以下实施用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施案例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料为市售商品。
[0013]实施例11、实验设计该实验设计为采集山东省肿瘤医院诊断为肾癌初治病人以及健康志愿者尿液样本，分离富集尿沉渣并获得尿沉渣RNA。通过qPCR的方法检测尿沉渣SNORD15A表达，统计分析其表达在健康志愿者与肾癌的差异，并分析其诊断效能。
[0014]2、实验所涉及的病人及样本共100例肾癌患者尿沉渣样本收集于山东第一医科大学附属肿瘤医院，131例健康志愿者尿沉渣样本收集于山东省立第三医院。
[0015]肾癌患者的纳入标准：通过临床症状、影像学和病理学检测结果联合确诊为肾癌；取材前未经过放疗、化疗或手术治疗；肾癌患者的TNM分期依据美国癌症联合委员会(AJCC)第八版TNM分期标准判定；Grade分级依据世界卫生组织(WHO) 2016版Furman分级系统判定。肾癌患者的排除标准：接受过抗肿瘤治疗；同时患有其他可能影响结果的肿瘤或代谢性疾病；健康志愿者的纳入标准：在体格检查中显示无肿瘤或其他干扰性疾病。
[0016]3、尿沉渣SNORD15A水平的测定使用qPCR方法分析肾癌患者和健康志愿者的者尿沉渣SNORD15A的表达水平，具体步骤如下：3.1、尿沉渣收集由以上肾癌患者或本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.尿沉渣SNORD15A作为早期肾癌的标志物的应用，其特征在于，所述的肿瘤为肾癌；所述的尿沉渣SNORD15A的核苷酸序列为SEQ ID No.1，具体为：CTTCGATGAAGAGATGATGACGAGTCTGACTTGGGGATGTTCTCTTTGCCCAGGTGGCCTACTCTGTGCTGCGTTCTGTGGCACAGTTTAAAGAGCCCTGGTTGAAGTAATTTCCTAAAGATGACTTAGAGGCATTTGTCTGAGAAGG。2.一种用于诊断早期肾癌的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括尿沉渣SNORD15A；具体包括逆转录反应体系、荧光定量PCR反应体系和内参体系；所述的荧光定量PCR反应体系包括针对尿沉渣SNORD15A的正向引物和针对尿沉渣SNORD15A的反向通用引物；所述的针对SNORD15A的正向引物的核苷酸序列为SEQ ID No.2，具体为：TTCGATGAAGAGATGATGACGAGTCTG；所述的针对SNORD15A的反向通用引物的核苷酸序列为SEQ ID No.3，具体为：CCACAGAACGCAGCACAGAGTAG。3.根据权利要求2所述的用于...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈亮，宋兴国，
申请(专利权)人：山东第一医科大学附属肿瘤医院山东省肿瘤防治研究院，山东省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：
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