一种头孢克肟中有关物质的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种头孢克肟中有关物质的检测方法，采用反相高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填料，以流动相进行梯度洗脱；其中，流动相A为质量浓度为20mmol/L～100mmol/L，pH值为3.5～6.0的甲酸盐水溶液和/或甲酸水溶液，流动相B为乙腈和/或甲醇；梯度洗脱的程序为：0～60min，流动相A的体积占比为65％～97％；60～80min，流动相A的体积占比为45％～75％；总时长不少于80min。该方法简单方便，实用，灵敏度好，能够在一个色谱系统中同时检测头孢克肟的小分子杂质及高分子聚合物杂质，缩短检测时间，提高检测效率，节约检测成本，便于头孢克肟原料及其制剂的质量控制。便于头孢克肟原料及其制剂的质量控制。

【技术实现步骤摘要】
一种头孢克肟中有关物质的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物分析
，尤其是涉及一种头孢克肟中有关物质的检测方法。

技术介绍

[0002]头孢克肟(商品名为Cefixime)为第三代头孢菌素类口服抗生素，其主要适用于治疗敏感菌所致的泌尿、呼吸和胆道等部位的感染，目前上市销售的头孢克肟包括片剂、胶囊、分散片、干混悬剂和颗粒剂等多种剂型。头孢克肟为β
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内酰胺类化合物，稳定性差，易降解，杂质种类也相对复杂，USP PF 44提供了头孢克肟7个特定杂质的结构，分别为杂质A、B(7Z)、C、D、E、F、G。头孢克肟主要降解杂质杂质A有两个手性中心(以*标出)，因此有4个异构体。主要降解杂质B的C
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7位侧链上的α位乙酸氧基肟基有两个顺反异构体，命名为杂质B(7Z)及杂质B(7E)，各含有一个手性中心(以*标出)，因此杂质B亦含有4个异构体杂质。头孢克肟含有易致敏的聚合物杂质，已知的有聚合物杂质B、聚合物杂质D。USP PF 44版中头孢克肟、头孢克肟干混悬剂、头孢克肟片及头孢克肟胶囊的有关物质检查均将杂质A1～A4、杂质B1～B2、杂质C、D、E、F、G定为特定杂质，并制定了各特定杂质的控制限度。
[0003]中国药典2020版、美国药典USP 43版，日本药典JP 18版、EP 10.0等现行药典中，头孢克肟及其制剂的有关物质检查项均以四丁基氢氧化铵(pH6.5)
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乙腈(75：25)为流动相进行等度洗脱。采用药典方法进行有关物质检测时，杂质A、杂质B在四丁基氢氧化铵(pH6.5)
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乙腈系统中表现为肩峰，杂质A、杂质B的4个异构体杂质难以有效分离，无法准确定量。CN201810509889.4公开了以四丁基氢氧化铵(pH6.5)
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乙腈(50：50)为流动相A，四丁基氢氧化铵(pH6.5)
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乙腈(85：15)为流动相B进行梯度洗脱，但该专利未对杂质进行杂质定位，且检出6个杂质，杂质个数较少。
[0004]USP PF 44中的有关物质分析方法采用流动相A醋酸铵(pH4.2)
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甲醇(95：5)、流动相B醋酸铵(pH4.2)
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甲醇(50：50)进行梯度洗脱，CN202010344563.8公开的头孢克肟有关物质方法的体系亦为流动相A醋酸铵
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甲醇(1000：52.5)及流动相B醋酸铵
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甲醇(1：1)，两相梯度洗脱，上述分析方法虽能分离杂质A的4个异构体杂质，但杂质B的2个反式异构体B3、B4表现为肩峰，无法基线分离。
[0005]对于头孢克肟聚合物杂质，常用凝胶色谱法，与有关物质分别控制，检验效率较低，且部分小分子杂质易与聚合物共出峰，方法专属性较差、定量准确性较差。CN202110712152.4公开了一种能同时检测头孢克肟有关物质及聚合物D的方法，该方法以流动相A醋酸铵
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甲醇(95：5)及流动相B醋酸铵
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甲醇(20：80)进行梯度洗脱，该方法流动相体系与USP PF44相似，均为醋酸铵
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甲醇，两组流动相均为盐与甲醇的混合溶液，操作较为繁琐，两相混合时，若操作不当，较易出鬼峰，且该方法未对头孢克肟特定杂质G及聚合物杂质B进行控制。
[0006]CN202010378071.0公开了一种以甲酸作为流动相A相，乙腈作为B相，以检测头孢克肟聚合物杂质B及聚合物杂质D的方法，该方法结果显示在保留时间0～10分钟时，头孢克
肟及小分子杂质均已被洗脱出峰，小分子杂质在该色谱条件下基本无保留，该方法无法分离各小分子杂质，该方法仅能用于检测聚合物杂质，无法对小分子杂质进行准确定量。
[0007]因此，需开发一种头孢克肟及制剂的有关物质检测方法，以同时检测头孢克肟的小分子杂质及高分子聚合物杂质B、聚合物杂质D。

技术实现思路

[0008]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提供了一种头孢克肟中有关物质的检测方法，该方法能够缩短检测时间，提高检测效率，能够准确测定头孢克肟杂质A1、A2、A3、A4、B1、B2、B3、B4、C、D、E、F、G、聚合物杂质B及聚合物杂质D的含量，同时能使主成分头孢克肟峰及相邻杂质峰，各杂质峰之间的分离度均符合要求。
[0009]本专利技术的第一方面，提供了一种头孢克肟中有关物质的检测方法，包括以下步骤：
[0010]采用反相高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填料，以流动相进行梯度洗脱，检测头孢克肟中有关物质的含量；
[0011]所述流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为质量浓度为20mmol/L～100mmol/L，pH值为3.5～6.0的甲酸盐水溶液和/或甲酸水溶液，所述流动相B为乙腈和/或甲醇；
[0012]所述梯度洗脱的程序为：0～60min，流动相A的体积占比为65％～97％；60～80min，流动相A的体积占比为45％～75％；总时长不少于80min。
[0013]根据本专利技术的一些实施例，所述色谱柱可选自YMC
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Triart C18或Phenomenex Gemini C18。
[0014]根据本专利技术的一些实施例，所述色谱柱的规格为250mm
×
4.6mm，3μm或250mm
×
4.6mm，5μm。
[0015]根据本专利技术的一些实施例，所述反相高效液相色谱法的色谱条件还包括以下i
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v中的至少一项：
[0016]i.检测器：紫外检测器；
[0017]ii.柱温：30℃～55℃；
[0018]iii.流速：0.5～1.5mL/min；
[0019]iv.检测波长：254nm；
[0020]v.进样量：5～20μL。
[0021]根据本专利技术的一些实施例，所述甲酸盐水溶液和/或甲酸水溶液的pH值为4.3～6.0。
[0022]当甲酸盐水溶液和/或甲酸水溶液的pH值为4.3～6.0时，各已知峰之间的最小分离度≥1.15。
[0023]根据本专利技术的一些优选的实施例，所述甲酸盐水溶液和/或甲酸水溶液的pH值为4.3～4.7。
[0024]当甲酸盐水溶液和/或甲酸水溶液的pH值为4.3～4.7时，各已知峰之间的最小分离度≥1.45。
[0025]根据本专利技术的一些更优选的实施例，所述甲酸盐水溶液和/或甲酸水溶液的pH值为4.5～4.7。
[0026]当甲酸盐水溶液和/或甲酸水溶液的pH值为4.5～4.7时，各已知峰之间的最小分离度≥1.50。
[0027]根据本专利技术的一些实施例，所述甲酸盐水溶液和/或甲酸水溶液中还包括pH调节剂。
[0028]根据本专利技术的一些实施例，所述pH调节剂为甲酸、氨水、磷酸、乙酸、氢氧化钠、氢氧化钾中的至少一种。
[0029]根据本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种头孢克肟中有关物质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：采用反相高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱柱填料，以流动相进行梯度洗脱；所述流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为质量浓度为20mmol/L～100mmol/L，pH值为3.5～6.0的甲酸盐水溶液和/或甲酸水溶液，所述流动相B为乙腈和/或甲醇；所述梯度洗脱的程序为：0～60min，流动相A的体积占比为65％～97％；60～80min，流动相A的体积占比为45％～75％；总时长不少于80min。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述反相高效液相色谱法的色谱条件还包括以下i
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v中的至少一项：i.检测器：紫外检测器；ii.柱温：30℃～55℃；iii.流速：0.5～1.5mL/min；iv.检测波长：254nm；v.进样量：5～20μL。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述甲酸盐水溶液和/或甲酸水溶液中还包括pH调节剂；优选地，所述pH调节剂为甲酸、氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄冰娥，蔡国伟，叶伟文，胡海容，王健松，王玮，
申请(专利权)人：广州白云山医药集团股份有限公司白云山制药总厂，
类型：发明
国别省市：