一种提高水产动物抗病能力的复合制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种提高水产动物抗病能力的复合制剂及其制备方法，首先提供一株贝莱斯芽孢杆菌BLS001，其分类学名称为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M20221309。该菌株能够有效抑制多种致病菌，并且具有耐盐碱的优点。本发明专利技术还提供一种复合制剂，其包括贝莱斯芽孢杆菌BLS001菌剂、枯草芽孢杆菌菌粉、丁酸梭菌菌粉、凝结芽孢杆菌菌粉、甾醇、γ－氨基丁酸和维生素B6。该复合制剂有利于提高水产动物的免疫力，提高对饲料的利用率和成活率，在优化和规范集约化养殖模式方面具有优良的应用前景。应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种提高水产动物抗病能力的复合制剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及微生物制剂
，具体涉及一种提高水产动物抗病能力的复合制剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]在水产动物养殖业的发展过程中，养殖模式由粗放、半粗放养殖转变为高密度、集约化养殖，伴生出养殖环境污染、养殖病害频繁发生、产品品质下降等问题。长期以来，抗生素在治疗水产养殖动物病害时见效快、疗效显著，成为水产养殖领域治疗细菌性疾病的首选药物。然而，随着抗生素在水产动物养殖领域应用规模的不断扩大，人们发现，常用抗生素的治疗效果逐渐减弱，与之对应的是，病原菌耐药性不断增强，导致抗生素的单位用药量不断加大，抗生素在水产品中的残留问题也愈发严重，威胁食品安全，抗生素在环境中的广泛残留也威胁着人类健康。由于抗生素耐药性和残留问题的日益突出，抗生素替代品的发展与应用势在必行，本领域技术人员希望开发新的制剂，以用于增强水产动物免疫力、提高水产动物抗病能力。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种提高水产动物抗病能力的复合制剂及其制备方法，该复合制剂可有效提高水产动物的免疫力和抗病能力，改善水产动物的生长性能。
[0004]为此，本专利技术的第一方面提供了一株贝莱斯芽孢杆菌BLS001，其分类学名称为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M20221309，保藏单位地址：中国武汉，保藏日期2022年8月22日。
[0005]本专利技术的第二方面，提供一种菌剂，其包含本专利技术第一方面所述的贝莱斯芽孢杆菌BLS001的发酵培养物。
[0006]在一些实施方式中，所述菌剂为液体菌剂或者固体菌剂。
[0007]在一些实施方式中，所述发酵培养物的制备方法包括：将所述贝莱斯芽孢杆菌BLS001接种于发酵培养基中进行发酵；所述发酵培养基包括葡萄糖20
‑
30g/L，大豆蛋白胨10
‑
20g/L，酵母粉10
‑
15g/L，MgSO
4 0.2
‑
0.5g/L，KH2PO40.2
‑
0.5g/L，NaCl 10
‑
20g/L。
[0008]在一些实施方式中，所述发酵培养基包括葡萄糖25g/L，大豆蛋白胨15g/L，酵母粉13g/L，MgSO
4 0.5g/L，KH2PO
4 0.5g/L，NaCl 10g/L。
[0009]在一些实施方式中，所述发酵培养的温度为28
‑
37℃，培养时间为18
‑
32小时。
[0010]在一些实施方式中，所述贝莱斯芽孢杆菌BLS001在接种于发酵培养基之前经过菌种活化步骤。
[0011]在一些实施方式中，所述菌剂还包括载体；所述载体选自麦麸、秸秆屑和甘蔗渣粉末中的一种或两种以上的组合。
[0012]在一些实施方式中，所述菌剂的制备方法包括：将所述载体与所述发酵培养物混合均匀，经低温干燥制备得到。
[0013]本专利技术的第三方面，提供一种复合制剂，其包括本专利技术第二方面所述的菌剂。
[0014]在一些实施方式中，所述复合制剂包括：本专利技术第二方面所述的菌剂、微生物菌粉、甾醇、γ
‑
氨基丁酸和维生素B6；其中，所述微生物菌粉包括枯草芽孢杆菌菌粉、丁酸梭菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉。
[0015]在一些实施方式中，所述复合制剂按重量份数包括：本专利技术第二方面所述的菌剂50
‑
60份、所述微生物菌粉40
‑
50份、甾醇10
‑
15份、γ
‑
氨基丁酸5
‑
10份、维生素B6 1
‑
5份。
[0016]在一些实施方式中，所述微生物菌粉中，所述枯草芽孢杆菌菌粉、丁酸梭菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉的质量比为35
‑
50:15
‑
30:10
‑
20。
[0017]在一些实施方式中，所述微生物菌粉中，所述枯草芽孢杆菌菌粉、丁酸梭菌菌粉和凝结芽孢杆菌菌粉的质量比为35:17:12、35:30:10或者50:15:20等。
[0018]在一些实施方式中，所述微生物菌粉中，活菌数为30
×
108‑
35
×
108CFU/g。
[0019]本专利技术的第四方面，提供本专利技术第二方面所述的菌剂或本专利技术第三方面所述的复合制剂在制备饲料添加剂中的应用。
[0020]在一些实施方式中，所述饲料为水产动物养殖饲料。
[0021]在一些实施方式中，所述水产动物包括淡水养殖动物和海水养殖动物。
[0022]与现有技术相比，本专利技术的技术方案具有以下有益效果：
[0023]本专利技术筛选得到一株贝莱斯芽孢杆菌BLS001，该菌株能够有效抑制多种致病菌，并且具有耐盐碱的性能，能够用于改善淡水养殖动物和海水养殖动物的生长性能。本专利技术进一步提供了包含贝莱斯芽孢杆菌BLS001菌剂的复合制剂，将其用于水产动物养殖时，能够取得更为优异的技术效果，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
[0024]下面将更详细地描述本公开的示例性实施方式。应当理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施方式所限制。相反，提供这些实施方式是为了能够更透彻地理解本公开，并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。
[0025]实施例1
[0026](1)菌株分离
[0027]在无菌条件下从鱼肠道后肠往前肠道缓慢挤出肠道内含物，置于PBS缓冲液中，混匀并静置5分钟后，取上清液进行梯度稀释并涂布于TSA固体培养基(15g/L酪蛋白胰酶消化物，5g/L大豆粉木瓜酶消化物，5g/L NaCl，15g/L琼脂)，37℃培养20小时后，挑取菌落划线纯化，将纯化后的单菌落编号后，分别接种到LB液体培养基，37℃培养16小时后，取适量菌液送至测序公司进行16SrDNA测序及鉴定，经鉴定编号为7#的菌株属于贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。
[0028](2)菌株的紫外诱变及筛选
[0029]将7#菌株接种于LB液体培养基，37℃培养12小时后，用无菌水稀释10倍，得到菌悬液。将稀释得到的菌悬液移至灭菌的带转子的空平板中，置于在带磁力搅拌器的紫外诱变箱中(已经开启紫外，预热30分钟)，根据经验值选用30W紫外灯进行诱变照射，照射距离45cm，开启搅拌，照射剂量分别为0s、10s、20s、30s、40s、50s、60s、80s、100s，盖上培养皿盖，关闭紫外灯，黑布包好平板，避光稀释涂布于LB平板上。37℃避光培养3天，计算诱变处理后
的活菌数，以未经诱变的平板作为对照组计算致死率。紫外照射处理菌体悬液后，吸取1ml紫外处理液于50ml pH为8.0的液体LB高盐培养基(在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.贝莱斯芽孢杆菌BLS001，其分类学名称为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M20221309，保藏单位地址：中国武汉。2.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂包含权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌BLS001的发酵培养物。3.如权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂为液体菌剂或者固体菌剂。4.如权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述发酵培养物的制备方法包括：将所述贝莱斯芽孢杆菌BLS001接种于发酵培养基中进行发酵；所述发酵培养基包括葡萄糖20
‑
30g/L，大豆蛋白胨10
‑
20g/L，酵母粉10
‑
15g/L，MgSO40.2
‑
0.5g/L，KH2PO
4 0.2
‑
0.5g/L，NaCl 10
‑
20g/L。5.如权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂还包括载体；所述载体选自麦麸、秸秆屑和甘蔗渣粉末中的一种或两种以上的组合。6.一种复合制剂，其特征在于，所述复合制剂包括权利要求2
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【专利技术属性】
技术研发人员：江国托，单春乔，李娟，刘艳，刘秋晨，王岩，吴怡琦，郭雪萍，
申请(专利权)人：大连三仪动物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：