本发明专利技术公开了一种采用生物酶体外培植天然品质牛黄的方法，所述天然品质牛黄的制备方法为：向胆汁中加入维生素C和天然迷迭香，再加入第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和胰蛋白酶反应得到天然品质的牛黄。所述第一生物酶为大肠杆菌制备得到，第二生物酶由皱褶假丝酵母菌制备得到，第三生物酶由梭形芽孢杆菌制备得到，维生素C和天然迷迭香的加入有效的防止了胆红素的氧化，通过第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和胰蛋白酶的协同作用明显提高牛黄的收率，并且保证了牛黄中的胆红素和胆酸的含量。含量。
【技术实现步骤摘要】
NaCl。
[0011]优选的，步骤（2）中，第二生物酶的制备方法为：将皱褶假丝酵母接种于灭菌后的培养基上，于35~37℃下离心培养36h，得到培养液，将培养液离心后取上清液，加入硫酸铵进行盐析，得到第二生物酶。
[0012]进一步优选的，培养基包括：5g/1000mL马铃薯蔗糖、5g/1000mL橄榄油、5g/1000mL葡萄糖酸钙、1g/1000mLMgSO4·
7H2O、1g/1000mL K2HPO4、10g/1000mL(NH4)2SO4、5g/1000mL蛋白胨。
[0013]优选的，步骤（2）中，第三生物酶的制备方法为：将梭形芽孢杆菌接种于灭菌后的培养基上，于36~38℃下离心培养36h，得到培养液，将培养液离心后取上清液，加入硫酸铵进行盐析得到第三生物酶。
[0014]进一步优选的，培养基包括：10g/1000mL葡萄糖、0.1g/1000mL酵母提取物、0.5g/1000mLKH2PO4、0.2g/1000mLMgSO4·
7H2O、0.1g/1000mL蛋白胨、0.5g/1000mLK2HPO4、0.2g/1000mLNaCl、0.01g/1000mLFeSO4。
[0015]优选的，步骤（2）中，第一混合液与第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和胰蛋白酶的质量比为1000：（0.6~1.0）：（0.3~0.5）：（0.2~0.4）：（0.1~0.3）。
[0016]优选的，第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和胰蛋白酶的反应时间均为10~14h。
[0017]优选的，步骤（2）中，调节pH为7.8~8.5。
[0018]优选的，步骤（3）中，调节pH为2.0~4.0。
[0019]优选的，步骤（3）中，静置温度为0~8℃，静置时间为24~36h。
[0020]优选的，步骤（3）中，干燥温度为80~100℃，干燥时间为4~6h。
[0021]优选的，所述大肠杆菌的保藏编号为CCTCC AB 2012883，皱褶假丝酵母菌的保藏编号为CCTCC WY 2008204，梭形芽孢杆菌的菌株编号为SHBCC D18006。
[0022]本专利技术的有益效果：本专利技术通过将第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和胰蛋白酶加入到胆汁中进行酶促反应制备牛黄，其中，第一生物酶由大肠杆菌制得，第二生物酶由皱褶假丝酵母菌制得，第三生物酶由梭形芽孢杆菌制得，采用第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和胰蛋白酶四种生物酶协同促进牛黄的形成，使得制备的牛黄收率更高，且有效成分更接近于天然牛黄中的有效成分。
[0023]同时，本专利技术采用牛胆汁，并在胆汁中加入维生素C和天然迷迭香，其中，维生素C和天然迷迭香都是高效的抗氧化剂，将二者复配后加入胆汁中，可有效的防止胆红素氧化而形成胆绿素，且具有消除胃气胀，增强记忆力，促进血液循环等功效，使所得牛黄中胆红素的含量更高，更接近于天然牛黄的品质。
具体实施方式
[0024]应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0025]正如
技术介绍
所述，天然牛黄产量降低，我国中医药每年需要大量牛黄作为中成
药，现有体外培植牛黄中的胆红素和胆酸含量相较于天然牛黄有一定差距，基于此，本申请提供了一种采用生物酶体外培植天然品质牛黄的方法。
[0026]为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。
[0027]本专利技术实施例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。
[0028]其中，大肠杆菌（Escherichia coli）购于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC AB 2012883，大肠杆菌在中国典型培养物保藏中心的收藏时间为2012
‑
09
‑
05；皱褶假丝酵母（Candida rugosa）购于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC WY 2008204，皱褶假丝酵母在中国典型培养物保藏中心的收藏时间为2006
‑
06
‑
07；梭形芽孢杆菌（Bcillus fusiformis）购于上海保藏生物技术中心（SHBCC），菌株编号为SHBCC D18006；胰蛋白酶购于江苏采薇生物科技有限公司。
[0029]实施例1：（1）向牛胆汁中加入维生素C和天然迷迭香，三者质量比为1000:6:1.8，加热至60℃，加热30min，得第一混合液；（2）第一混合液冷却至36℃，保温，向第一混合液中加入第一生物酶，反应12h，再加入第二生物酶，反应12h，加入第三生物酶，反应12h，调节pH为8.2后，加入胰蛋白酶，反应12h，得到第二混合液；其中，第一混合液、第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和胰蛋白酶的质量比为1000：0.8：0.4：0.3：0.2；第一生物酶的制备为：将大肠杆菌接种到灭菌后的培养基上，培养基包括：7g/1000mL牛肉膏、14g/1000mL牛肉胨、7g/1000mL NaCl，于37℃下培养36h得大肠杆菌培养液，将大肠杆菌培养液在4500r/min离心20min，弃上清液，加入硫酸铵进行盐析，得第一生物酶；第二生物酶的制备为：将皱褶假丝酵母接种到灭菌后的培养基上，培养基包括：5g/1000mL马铃薯蔗糖、5g/1000mL橄榄油、5g/1000mL葡萄糖酸钙、1g/1000mLMgSO4·
7H2O、1g/1000mL K2HPO4、10g/1000mL(NH4)2SO4、5g/1000mL蛋白胨，于35℃下200r/min离心培养36h，得培养液，将培养液在4000r/min离心20min，取上清液，加入硫酸铵进行盐析，得第二生物酶；第三生物酶的制备过程为：将梭形芽孢杆菌接种到灭菌后的培养基上，培养基包括：10g/1000mL葡萄糖、0.1g/1000mL酵母提取物、0.5g/1000mLKH2PO4、0.2g/1000mLMgSO4·
7H2O、0.1g/1000mL蛋白胨、0.5g/1000mLK2HPO4、0.2g/1000mLNaCl、0.01g/1000mLFeSO4，于36℃下培养36h得梭形芽孢杆菌培养液，将梭形芽孢杆菌培养液在4500r/min离心20min，弃上清液，加入硫酸铵进行盐析，得第三生物酶；（3）向第二混合液中加入质量分数为25%的硫酸调节pH为3.0，在4℃下静置30h，弃上层清液后，5000r/min离心，抽滤得沉淀物，将沉淀物用纯净水洗涤至中性，在90℃下干燥5h，即得天然品质的牛黄，所得牛黄产率为10.2
‰
，其中，产率=生成牛黄质量/新鲜牛胆汁的质量
×
1000%。
[0030]实施例2：
（1）向牛的新鲜胆汁加入维生素C和天然迷迭香，三者质量比为1000:3:本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种采用生物酶体外培植天然品质牛黄的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）向牛胆汁中加入维生素C和天然迷迭香，加热，得第一混合液；（2）向第一混合液中加入第一生物酶，反应后依次加入第二生物酶和第三生物酶进行反应，调节pH后再加入胰蛋白酶进行反应，得第二混合液；（3）调节第二混合液的pH，静置，弃上清液后，离心、过滤、洗涤、干燥，即得天然品质牛黄。2.如权利要求1所述的采用生物酶体外培植天然品质牛黄的方法，其特征在于，步骤（1）中，胆汁、维生素C和天然迷迭香的质量比为1000：（3~8）：（1.5~2）。3.如权利要求1所述的采用生物酶体外培植天然品质牛黄的方法，其特征在于，步骤（1）中，加热温度为50~70℃，加热时间为20~40min。4.如权利要求1所述的采用生物酶体外培植天然品质牛黄的方法，其特征在于，步骤（2）中，第一混合液与第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和胰蛋白酶的质量比为1000：（0.6~1.0）：（0.3~0.5）：（0.2~0.4）：（0.1~0.3）。5.如权利要求1所述的采用生物酶体外培植天然品质牛黄的方法，其特征在于，步骤（2）中，第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和胰蛋白酶的反应时间均为10~14h。6.如权利要求1所述的采用生物酶体外培植天然品质牛黄的方法，其特征在于，步骤（2）中，第一生物酶的制备方法为：将大肠杆菌接种于灭菌后的培养基上，在37℃下离心培养36h，得到培养液，将培养液离心后取上清液，加入硫酸铵进行盐析得到第一生物酶；培养基包括：7g/1000mL牛肉膏、14g/1000mL牛肉胨、7g/1000mL NaCl。7...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙付军，王伟，李长鸿，
申请(专利权)人：济南七贤堂生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。