一种植物免疫激活蛋白PsRLK6及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种植物免疫激活蛋白PsRLK6及其应用，属于农作物生物防治技术领域；本发明专利技术的发明专利技术人通过系统研究大豆疫霉LRR

【技术实现步骤摘要】
一种植物免疫激活蛋白PsRLK6及其应用


[0001]本专利技术涉及一种植物免疫激活蛋白PsRLK6及其在农作物病害防治中的应用，属于农作物生物防治


技术介绍

[0002]疫霉菌是一类破坏性强的植物病原菌，有近200种，能侵染众多粮食及经济作物引起多种被称为“植物疫病”的毁灭性病害，在全世界范围内造成重大损失，严重威胁全球农林业生产和粮食安全。比如大豆疫霉(Phytophthora sojae，也称为P.sojae)引起大豆根腐病，严重时造成减产30％以上甚至绝收，在全世界范围内每年造成数十亿美元的经济损失，严重威胁大豆安全绿色高效生产。据统计，每年疫霉菌导致我国马铃薯、大豆、蔬菜等作物的经济损失超过160亿元。
[0003]疫霉菌虽然形态上与真菌相似，但在分类上隶属于茸鞭生物界卵菌门，真菌杀菌剂对疫霉菌无效(Tyler，2007)。且由于疫霉菌遗传多样性复杂、基因组可塑性强、在自然环境下变异快等特点，极易出现耐药和能克服寄主抗性的菌株，导致疫霉菌在生产上很难防治(叶文武等,2020；Kamounet al.,2015)。因此，迫切需要开发高效安全的防控植物疫病的措施。
[0004]近年来，随着学科发展和技术进步，植物免疫学得到了快速发展。其要点是植物利用位于细胞表面和胞内的两大类免疫受体，识别病毒、细菌、真菌、卵菌、线虫、昆虫等入侵生物，激活植物免疫系统保护自身。细胞表面免疫受体也被称为模式识别受体(pattern
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recognition receptors,PRRs)，主要由单次跨膜的类受体激酶(receptor
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like kinases,RLKs)和类受体蛋白(receptor
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like proteins,RLPs)组成，在细胞表面识别来自入侵生物的分子模式和植物自身来源的、与感染损伤相关的分子模式(molecular patterns)，其激活的免疫被称作模式触发的免疫(pattern
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triggered immunity,PTI)。这类能够激活植物免疫的因子统称为植物免疫激发子，植物免疫激活蛋白是其中重要的一类。因此，如果能够应用植物免疫的原理防治农作物病虫害，就能开发出更高效安全的防控植物疫病的措施。
[0005]大量文献表明，在大豆疫霉与植物互作早期，植物能识别病原菌分泌的免疫激活蛋白，从而激发植物免疫。例如，大豆疫霉菌的胞外效应蛋白XEG1具有激活蛋白活性；进一步的功能基因筛选发现烟草类受体蛋白RXEG1是其受体，由于XEG1同源蛋白在致病卵菌和真菌中广泛存在，RXEG1的发现有望改良作物对这些病菌的广谱抗性。
[0006]因此，本领域技术人员希望能够找到并鉴定出新的大豆疫霉菌的植物免疫激活蛋白，不仅能够揭示大豆疫霉与植物互作机理，而且能为开发激活植物免疫的蛋白质生物药物提供资源。

技术实现思路

[0007]为解决
技术介绍
所提出的技术问题，本专利技术提供了一种植物免疫激活蛋白PsRLK6及其在农作物病害防治方面的应用。
[0008]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0009]一种植物免疫激活蛋白PsRLK6，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0010]上述的植物免疫激活蛋白PsRLK6在农作物病害防治方面的应用。
[0011]上述的植物免疫激活蛋白PsRLK6在制备用于防治农作物病害的农药方面的应用。
[0012]优选的，上述的农作物为大豆、番茄和烟草中的至少一种。
[0013]优选的，上述的农作物病害由辣椒疫霉和大豆疫霉中的至少一种引起的大豆、番茄或烟草的病害。
[0014]进一步优选的，所述的农作物病害为大豆根腐病和番茄根腐病中的至少一种。
[0015]一种农药组合物，该农药组合物的有效成分包含权利要求1所述的植物免疫激活蛋白PsRLK6。
[0016]进一步优选的，所述农药组合物的有效成分还包含精甲霜灵和咯菌腈中的至少一种。
[0017]进一步优选的，该农药组合物由所述的有效成份分和农药辅料制成农药上允许的剂型。
[0018]本专利技术的有益效果：
[0019]本专利技术的专利技术人鉴定到了一种新的植物免疫激活蛋白PsRLK6，该植物免疫激活蛋白PsRLK6具有较强的活性，能够诱导植物的抗性和免疫防卫反应，可以应用于农作物的病害防治，例如可以用于大豆、番茄、烟草等的病害防治。
附图说明
[0020]图1为分别注射了对照克隆农杆菌和实施例2克隆农杆菌悬浮液24h后用DAB染色后的烟草叶照片。
[0021]图2为注射对照克隆和实施例2克隆农杆菌悬浮液至烟草叶片36h后提取蛋白的western图。
[0022]图3为注射对照克隆和实施例2克隆农杆菌悬浮液36h后接种辣椒疫霉LT263的烟草叶病斑照片和病斑面积统计图。
[0023]图4为分别用大肠杆菌原核表达对照克隆和实施例3克隆经亲和层析纯化后的蛋白考马斯亮蓝染色图。
[0024]图5为分别注射1μM纯化后的蛋白”GFP
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His”和“PsRLK6
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His”24h后用DAB染色后的烟草叶照片。
[0025]图6为分别注射1μM纯化后的”GFP
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His”和“PsRLK6
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His”蛋白进入烟草叶12h后检测的抗性相关基因表达图。
[0026]图7为注射1μM纯化后的“GFP
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His”和“PsRLK6
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His”蛋白24h后接种辣椒疫霉LT263的烟草叶病斑照片和病斑面积统计图。
[0027]图8为用50nM“GFP
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His”和“PsRLK6
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His”蛋白溶液处理大豆黄化苗12h后后接种大豆疫霉菌的36h后的大豆黄化苗发病照片及病斑长度和生物量统计图。
[0028]图9为用50nM“GFP
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His”和“PsRLK6
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His”蛋白溶液喷施番茄叶后接种辣椒疫霉菌的番茄叶发病照片及病斑长度和生物量统计图。
具体实施方式
[0029]下面将结合附图所示的具体实施方式对本专利技术进行详细描述。但这些实施方式并不限制本专利技术，本领域的普通技术人员根据这些实施方式所做出的结构、方法或功能上的变换均包含在本专利技术的保护范围内。
[0030]实施例1克隆植物诱抗蛋白PsRLK6编码基因的胞外区域
[0031]步骤1)总RNA提取
[0032]以液体V8培养的大豆疫霉菌菌丝为材料，采用翼飞雪公司RNA提取试剂盒抽提总RNA，具体操作按照说明书进行，用分光光度计检测提取的总RNA的含量和质量。
[0033]步骤2)反转录生成第一链
[0034]取1μg上述步骤1)获得的总RNA为模板，采用诺维赞公司(Vazyme)的HiScript II 1st Stra本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物免疫激活蛋白PsRLK6，其特征在于：该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.如权利要求1所述的植物免疫激活蛋白PsRLK6在农作物病害防治方面的应用。3.如权利要求1所述的植物免疫激活蛋白PsRLK6在制备用于防治农作物病害的农药方面的应用。4.根据权利要求2或3所述应用，其特征在于：所述的农作物为大豆、番茄和烟草中的至少一种。5.根据权利要求2或3所述应用，其特征在于：所述的农作物病害由辣椒疫霉和大豆疫霉中的至少一种引起的大...

【专利技术属性】
技术研发人员：‑，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：