CLDN18.2抗体及其用途制造技术

提供了结合CLDN18.2的抗体及其去岩藻糖化的形式。还提供了制备上述抗体的方法，包含抗体的缀合物和组合物，及其在治疗疾病例如癌症中的用途。症中的用途。

【技术实现步骤摘要】
CLDN18.2抗体及其用途
[0001]本申请是申请号为202080046257.4，优先权日为2019年07月12日，申请日为2020年7月10日，专利技术名称为“CLDN18.2抗体及其用途”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]本申请要求于2019年07月12日递交的申请号为CN 201910628018.9，专利技术名称为“CLDN18.2抗体及其用途”的中国专利申请的优先权，在此全文引用上述中国专利申请公开的内容以作为本申请的一部分。


[0003]本公开涉及免疫治疗领域。具体而言，本公开涉及结合CLDN18.2的抗体及其去岩藻糖化的形式，及其在治疗疾病特别是癌症中的应用。
技术背景
[0004]包括胃癌及食道癌在内的上消化道肿瘤是一种全球常见，预后较差的恶性肿瘤。胃癌在中国尤其高发，全球有近42％的胃癌新发病例集中在中国。由于缺乏早期诊断，约80％胃癌患者发现时已是晚期。由于胃癌对常规化疗药物不够敏感，晚期胃癌的五年生存率极低，并已成为中国第三大致死的恶性肿瘤。因此，近年的研究致力于寻找胃癌特异性的靶向治疗。
[0005]封闭蛋白(Claudin)家族蛋白是广泛分布于上皮细胞中的紧密连接结构的主要组成部分。和其它封闭蛋白家族蛋白的结构类似，CLDN18.2是分子量约27.8kd，具有四个跨膜区的膜蛋白，且具有两个较短的胞外区EC1和EC2。与其它封闭蛋白家族蛋白不同的是，在正常组织中CLDN18.2非常特异地仅表达于胃部高度分化的上皮细胞中(Tureci O et al.,Gene,2011)。在来源于胃上皮细胞的肿瘤中，有很高比例的肿瘤细胞表面表达CLDN18.2。在胃癌细胞的淋巴结和其它组织转移肿瘤中，也可以检测到高水平的CLDN18.2表达(Woll S.et al.,Int.J.Cancer,2013)。除胃癌外，也有很高比例的胆管癌、食道癌和胰腺癌等肿瘤细胞中表达CLDN18.2。作为特异性表面标志物，CLDN18.2成为癌症治疗的潜在靶点。研发针对CLDN18.2的高效抗体药物将为多种癌症的治疗提供可能，具有巨大的应用潜力和市场价值。
[0006]治疗性单克隆抗体杀伤肿瘤细胞的主要作用机制之一是ADCC效应(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性，antibody dependent cell mediated cytotoxicity)。通过治疗性抗体的抗原识别段(Fab)与肿瘤细胞表面的特异性抗原结合后，利用抗体恒定区(Fc)与表达FC受体(FcγR)的效应细胞结合来激活效应细胞的细胞杀伤活性，从而分泌细胞毒性介质包括颗粒酶和穿孔素等，最终导致靶细胞(肿瘤细胞)的溶解破坏。抗体对抗原的结合力强弱，抗原表达丰度以及抗体FC区和效应细胞表面的FC受体的结合力强弱均可影响ADCC效应的强度，进而影响癌症的治疗效果(Jefferis and Lund,2002)。
[0007]专利技术概述
[0008]本公开提供了新的抗CLDN18.2的抗体。上述抗体能够以高亲和力和特异性结合CLDN18.2，并介导效应细胞对表达CLDN18.2的靶细胞(例如肿瘤细胞)的杀伤。此外，还生成
了上述抗体的去岩藻糖化形式，其能够比普通抗体更好地结合FcγRIIa并诱导ADCC效应。
[0009]相应地，在一方面，本公开涉及一种结合CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段，所述抗体具有以下重链CDR(CDRH)和轻链CDR(CDRL)：
[0010]a.如SEQ ID NO:1中所示的重链可变区(VH)中的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:6中所示的轻链可变区(VL)中的CDRL1、CDRL2和CDRL3；
[0011]b.如SEQ ID NO:11中所示的VH中的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:16中所示的VL中的CDRL1、CDRL2和CDRL3；
[0012]c.如SEQ ID NO:21中所示的VH中的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:26中所示的VL中的CDRL1、CDRL2和CDRL3；
[0013]d.如SEQ ID NO:31中所示的VH中的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:36中所示的VL中的CDRL1、CDRL2和CDRL3；
[0014]e.如SEQ ID NO:41中所示的VH中的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:46中所示的VL中的CDRL1、CDRL2和CDRL3；或
[0015]f.如SEQ ID NO:55中所示的VH中的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:60中所示的VL中的CDRL1、CDRL2和CDRL3。
[0016]在本公开的抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体具有以下CDRH和CDRL：
[0017]a.如SEQ ID NO:3
‑
5中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:8
‑
10中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3；
[0018]b.如SEQ ID NO:13
‑
15中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:18
‑
20中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3；
[0019]c.如SEQ ID NO:23
‑
25中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:28
‑
30中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3；
[0020]d.如SEQ ID NO:33
‑
35中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:38
‑
40中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3；
[0021]e.如SEQ ID NO:43
‑
45中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:48
‑
50中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3；或
[0022]f.如SEQ ID NO:57
‑
59中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:62
‑
64中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3。
[0023]在本公开的抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，所述抗体具有以下VH和VL：
[0024]a.包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH，和包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL；
[0025]b.包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH，和包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL；
[0026]c.包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VH，和包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的VL；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结合CLDN18.2的抗体或其抗原结合片段，所述抗体具有如SEQ ID NO:11所示的VH中的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:16所示的VL中的CDRL1、CDRL2和CDRL3。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体具有如SEQ ID NO:13
‑
15所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3；和如SEQ ID NO:18
‑
20所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3。3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体具有包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH，和包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体的重链包含：如SEQ ID NO:11所示的重链可变区和如SEQ ID NO:51所示的重链恒定区，且所述抗体的轻链包含：如SEQ ID NO:16所示的轻链可变区和如SEQ ID NO:53所示的轻链恒定区。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体具有Fc区。6.如权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体在Asn297处具有糖基结构修饰，其中根据EU编号系统编号。7.如权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述糖基结构中具有岩藻糖的糖基结构的比例为50％或更少。8.如权利要求7所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述糖基结构中具有岩藻糖的糖基结构的比例为30％或更少，例如20％或更少，10％或更少，5％或更少，2％或更少，或1％或更少。9.如权利要求7所述的抗体或其抗原能结合片段，其中所述抗体中具有岩藻糖的糖基结构的比例为0％
‑
1％。10.如权利要求7
‑
9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体由Fut8基因敲除的细胞产生。11.如权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞选自CHO细胞和HEK293细胞。12.如权利要求10或11所述的抗体或其抗原结合片段，其中相比于在不具有Fut8基因敲除的细胞中产生的抗体，所述抗体具有增加的FcγRIIIa结合活性。13.如权利要求10
‑
12中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中相比于在不具有Fut8基因敲除的细胞中产生的抗体，所述抗体具有增加的ADCC活性。14.如权利要求1
‑
13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是单克隆抗体。15.如权利要求1
‑
13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是双特异性抗体或多特异性抗体。16.如权利要求1
‑
15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD同种型。17.如权利要求1
‑
15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体选自IgG1、IgG...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳照宇，李芸，李锋，霍耐凡，金秀梅，任丽，闫哲贤，
申请(专利权)人：明济生物制药北京有限公司，
类型：发明
国别省市：