用于鉴定人类受试者的医学病状的方法技术

本公开公开了一种用于检测受试者的医学病状的体外和非侵入性方法。所述方法涉及从样品富集非常小的胚胎样干细胞，以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物；从步骤的所述混合物获得核酸；用所述核酸执行测定以分析来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平；以及将来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平与对照样品中的Oct4A的表达水平进行比较。本公开还提供了一种用于预测癌症的发作和用于预测癌症的存在的方法。本文还公开了一种治疗癌症的方法。此外，还公开了一种试剂盒和检测试剂盒。测试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于鉴定人类受试者的医学病状的方法


[0001]本公开广泛涉及医疗保健
，并且具体地提供了用于检测人类受试者的医学病状的存在或不存在的简易方法。如本文所公开的方法还从血液样品中检测人类受试者的炎性病状的存在或不存在。进一步地，如本公开所描述的方法还检测受试者的癌症的存在或不存在或即将发生。如本文所描述的方法是涉及分析从人类受试者获得的样品的体外方法。

技术介绍

[0002]由于人基因组的完成和下一代测序技术的发展，已经加速了对疾病的遗传病因的研究，这开启了将个体基因组的改变翻译为临床相关信息以协助疾病诊断和治疗、临床决策策略的愿景。这些努力以海量数据的形式产生了大量潜在有用的信息，从而促进了生物医学研究。然而，对于研究者而言，应用和阐述此信息仍然是繁琐且耗时的，因为突变谱的临床相关分子指纹源自通过活检手术提取的组织。
[0003]活检是涉及在检查中取出组织用于疾病诊断和进一步治疗方法的公知技术。通常，活检是侵入性的，并且涉及将组织从其自然环境中取出的复杂的外科手术。组织活检是癌症的“黄金标准”，但有趣的是，许多非癌组织(即，病变组织)也被切除以便检测疾病的起源、传播(transmission)、进展等，这稀释了原始疾病数据并且导致包含误诊的假阳性。几乎所有的组织都可以通过活检进行研究，包含肌肉、甲状腺、膀胱、心脏、前列腺、皮肤、肺、淋巴结、肝、肾、神经等。科学文献中包含活检的一些疾病是脑白质病变中的皮质脱髓鞘，用于多发性硬化的早期检测(Lucchinetti等人2011)；用于肾疾病、肝硬化肝病、丙型肝炎相关肾小球肾炎和球蛋白性血管炎、单克隆丙种球蛋白病等的经皮肾活检(Hogan,Mocanu和Berns 2016)；用于检测骨关节炎患者的组织中的单核细胞浸润、纤维化、血管生成、巨噬细胞浸润和衬里层增厚的滑膜活检(Ene等人2015)；用于炎性皮肤病症的剃削、穿刺或切片活检(Harvey,Chan和Wood 2017)；用于评估COPD的计算机断层扫描导向肺活检(Asai等人2013)；心肌活检(Francis和Lewis 2018)；用于肝硬化患者的肝活检(Sherman等人2007)等。然而，大多数组织活检会导致手术并发症、出血和不良副作用等，并且因此与如血液、尿液、唾液等生物流体测试相反，不推荐组织活检。组织活检很难执行，导致疼痛，通常会使手术出现不适感，可能无法鉴定肿瘤的确切解剖学位置，或者可能由于手术切除血管生成富集区而进一步引起促进转移的并发症。由于组织活检手术的复杂性和所获得的混合结果，以及缺乏与关于待研究的组织与受试者的病状的此类研究相关的明确性，在此工作领域存在着知识鸿沟。
[0004]干细胞，特别是胚胎源干细胞，具有多能性标志物，即Oct4、Nanog、Sox2和其异构体，这些标志物表明在发育、稳态和老化过程中分化为形成器官的多种组织的潜力不同。由于干细胞促成组织发育，因此其充当表明组织损坏和损伤的分子生物传感器，即医学病状的标志。因此，干细胞标志物是用于确定医学病状的严重程度的重要生物标志物，并且鉴定体液中的胚胎样干细胞标志物可以非侵入性地检测医学病状。
[0005]因此，本领域迫切需要部署用于确定医学病状的严重程度以及鉴定体液中的胚胎样干细胞标志物以非侵入性地检测医学病状的方法。

技术实现思路

[0006]在本公开的一方面，提供了一种用于检测受试者的医学病状的体外方法，所述方法包括：(a)获得样品；(b)从所述样品富集非常小的胚胎样干细胞，以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物；(c)从步骤(b)的所述混合物获得核酸；(d)用所述核酸执行测定以分析来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平；以及(e)将来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平与对照样品中的Oct4A的表达水平进行比较，其中与所述对照样品中的所述Oct4A的表达水平相比，来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平的增加范围为1.1
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3倍检测到所述受试者体内存在医学病状。
[0007]在本公开的另一方面，提供了一种用于预测受试者的癌症的发作的体外方法，所述方法包括：(a)获得样品；(b)从所述样品富集非常小的胚胎样干细胞，以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物；(c)从步骤(b)的所述混合物获得核酸；(d)用所述核酸执行测定以分析所述非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平；以及(e)将来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平与对照样品中的Oct4A的表达水平进行比较，其中与所述对照样品中的所述Oct4A的表达水平相比，来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平的增加范围为3
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5倍预测了所述受试者的癌症的发作。
[0008]在本公开的另一方面，提供了一种用于检测受试者的癌症的存在的体外方法，所述方法包括：(a)获得样品；(b)从所述样品富集非常小的胚胎样干细胞，以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物；(c)从步骤(b)的所述混合物获得核酸；(d)用所述核酸执行测定以分析所述非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平；以及(e)将来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平与对照样品中的Oct4A的表达水平进行比较，其中与所述对照样品中的所述Oct4A的表达水平相比，来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平增加至少5倍检测到所述受试者体内存在癌症。
[0009]在本公开的另一方面，提供了一种用于监测对抗癌疗法的应答的体外方法，所述方法包括：(a)在抗癌疗法期间的一个时间点获得样品；(b)从所述样品富集非常小的胚胎样干细胞以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物；(c)从步骤(b)的所述混合物获得核酸；(d)用所述核酸执行测定以分析来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平；以及(e)将来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平与参照物中的非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平进行比较，所述比较监测到所述对抗癌疗法的应答。
[0010]在本公开的另一方面，提供了一种用于检测对抗癌疗法的积极应答的体外方法，所述方法包括：(a)在施用抗癌疗法之前获得样品
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I；(b)在施用所述抗癌疗法之后获得样品
‑
II；(c)从所述样品
‑
I富集非常小的胚胎样干细胞以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物
‑
I；(d)从所述样品
‑
II富集非常小的胚胎样干细胞以获得包括所述非常小的胚
胎样干细胞的混合物
‑
II；(e)从所述混合物
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I获得核酸
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I；(f)从所述混合物
‑
II获得核酸
‑
II；(g)用所述核酸
‑
I和所述核酸...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于检测受试者的医学病状的体外方法，所述方法包括：a)获得样品；b)从所述样品富集非常小的胚胎样干细胞，以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物；c)从步骤(b)的所述混合物获得核酸；d)用所述核酸执行测定以分析来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平；以及e)将来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平与对照样品中的Oct4A的表达水平进行比较，其中与所述对照样品中的所述Oct4A的表达水平相比，来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平的增加范围为1.1
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3倍检测到所述受试者体内存在医学病状。2.一种用于预测受试者的癌症的发作的体外方法，所述方法包括：a)获得样品；b)从所述样品富集非常小的胚胎样干细胞，以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物；c)从步骤(b)的所述混合物获得核酸；d)用所述核酸执行测定以分析所述非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平；以及e)将来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平与对照样品中的Oct4A的表达水平进行比较，其中与所述对照样品中的所述Oct4A的表达水平相比，来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平的增加范围为3
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5倍预测了所述受试者的癌症的发作。3.一种用于检测受试者的癌症的存在的体外方法，所述方法包括：a)获得样品；b)从所述样品富集非常小的胚胎样干细胞，以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物；c)从步骤(b)的所述混合物获得核酸；d)用所述核酸执行测定以分析所述非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平；以及e)将来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平与对照样品中的Oct4A的表达水平进行比较，其中与所述对照样品中的所述Oct4A的表达水平相比，来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平增加至少5倍检测到所述受试者体内存在癌症。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括通过执行基于序列的测定对所述核酸进行分析。5.根据权利要求2至3中任一项所述的方法，其中通过基于序列的测定对所述核酸进行分析检测到癌症的类型。
6.根据权利要求3所述的方法，其中与对照中的所述Oct4A的表达水平相比，来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平的增加范围为5
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10倍。7.根据权利要求3所述的方法，其中与所述对照中的所述Oct4A的表达水平相比，来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平的增加范围为10
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15倍。8.根据权利要求3所述的方法，其中与所述对照中的所述Oct4A的表达水平相比，来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平的增加范围为15
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20倍。9.根据权利要求3所述的方法，其中与所述对照中的所述Oct4A的表达水平相比，来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平的增加范围为20
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25倍。10.一种用于监测对抗癌疗法的应答的体外方法，所述方法包括：a)在抗癌疗法期间的一个时间点获得样品；b)从所述样品富集非常小的胚胎样干细胞以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物；c)从步骤(b)的所述混合物获得核酸；d)用所述核酸执行测定以分析来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平；以及e)将来自所述样品的所述非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平与参照物中的非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平进行比较，所述比较监测到所述对抗癌疗法的应答。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述参照物是选自由以下组成的组的至少一个：(a)在施用抗癌疗法之前获得的样品；(b)相较于权利要求10的步骤(a)中所提及的时间点在稍早的时间点获得的样品；(c)相较于权利要求10的步骤(a)中所提及的时间点在稍后的时间点获得的样品；以及(d)从无癌症受试者获得的样品。12.根据权利要求10所述的方法，其中与所述参照物中的所述表达水平相比，所述样品中的非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平降低指示对所述抗癌疗法的积极应答，并且其中所述参照物是选自由以下组成的组的至少一个：(a)在施用抗癌疗法之前获得的样品；(b)相较于权利要求10的步骤(a)中所提及的时间点在稍早的时间点获得的样品；以及(c)从无癌症受试者获得的样品。13.一种用于检测对抗癌疗法的积极应答的体外方法，所述方法包括：a)在施用抗癌疗法之前获得样品
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I；b)在施用所述抗癌疗法之后获得样品
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II；c)从所述样品
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I富集非常小的胚胎样干细胞，以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物
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I；d)从所述样品
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II富集非常小的胚胎样干细胞，以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物
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II；e)从所述混合物
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I获得核酸
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I；f)从所述混合物
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II获得核酸
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II；g)用所述核酸
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I和所述核酸
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II独立地执行测定以分析Oct4A的表达水平；以及h)将来自所述核酸
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II的所述Oct4A的表达水平与来自所述核酸
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I的所述Oct4A的表达水平进行比较，
其中与来自所述核酸
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I的所述Oct4A的表达水平相比，来自所述核酸
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II的所述Oct4A的表达水平降低检测到对癌症治疗的积极应答。14.一种用于检测癌症的体外方法，所述方法包括：a)获得样品；b)从所述样品富集非常小的胚胎样干细胞，以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的混合物；c)从步骤(b)的所述混合物获得核酸；d)用所述核酸执行测定以分析非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平；(e)将所述样品中的非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平与对照样品中的非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平进行比较，其中与所述对照样品中的非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平相比，所述样品中的非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平增加指示癌症的存在；以及(f)对所述核酸执行基于序列的测定并分析至少一种癌症相关标志物中的突变，其中所述至少一种癌症相关标志物中的突变的存在指示基于所分析的癌症相关标志物的特定类型的癌症的存在。15.根据权利要求1至3、10、13或14中任一项所述的方法，其中从所述混合物获得所述核酸通过选自由以下组成的组的任何一种方法进行：(a)硫氰酸胍
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苯酚
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氯仿核酸提取；(b)氯化铯梯度离心法；(c)十六烷基三甲基溴化铵核酸提取；(d)碱性提取；(e)基于树脂的提取；以及(f)固相核酸提取。16.根据权利要求1至3、10、13或14中任一项所述的方法，其中用所述核酸执行测定以分析Oct4A的表达是通过选自由定量PCR、流式细胞术和下一代测序(NGS)组成的组的技术进行的。17.根据权利要求1至3或14中任一项所述的方法，其中所述对照是从无癌症受试者获得的非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A的表达水平。18.根据权利要求1至3、10、13或14中任一项所述的方法，其中所述从血液样品富集所述非常小的胚胎样干细胞包括：a)使所述血液样品与中性缓冲液以1:1至1:20的比率范围接触，以获得第一混合物；b)使至少一种盐溶液与所述第一混合物以1:2至1:10的比率范围接触，以获得第二混合物；以及c)处理所述第二混合物以获得富集的非常小的胚胎样干细胞。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述处理所述第二混合物包括选自由以下组成的组的至少一种方法：(a)提取过程；(b)洗涤过程；(c)离心过程和其组合。20.根据权利要求14所述的方法，其中所述癌症相关标志物选自由确定与癌症相关的已知标志物组成的组。21.根据权利要求1至3、10、13或14中任一项所述的方法，其中所述方法并不依赖于侵入性技术。22.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括：a)从受试者获得样品；b)从所述样品富集非常小的胚胎样干细胞，以获得包括所述非常小的胚胎样干细胞的
混合物；c)从步骤(b)的所述混合物获得核酸；d)用所述核酸执行测定以分析非常小的胚胎样干细胞中的Oct4A的表达水平；(e)将所述样品中的非常小的胚胎样干细胞中的所述Oct4A...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿希什，
申请(专利权)人：二三吉盖私人有限公司，
类型：发明
国别省市：