一种烟草瞬时表达调控关键因子及其在提高瞬时表达效率中的应用制造技术

本发明专利技术涉及植物转基因技术领域，尤其涉及一种烟草瞬时表达调控关键因子及其在提高瞬时表达效率中的应用。包括一种烟草瞬时表达调控关键因子TEF1，该关键因子能够作为促进因子应用到烟草瞬时表达效率提升。具体方法为通过构建35S::TEF1过表达载体，侵染外植体，提高了烟草的瞬时表达效率，而表达效率的提升会大大降低蛋白表达成本。降低蛋白表达成本。降低蛋白表达成本。

【技术实现步骤摘要】
一种烟草瞬时表达调控关键因子及其在提高瞬时表达效率中的应用


[0001]本专利技术涉及植物转基因
，尤其涉及一种烟草瞬时表达调控关键因子及其在提高瞬时表达效率中的应用。

技术介绍

[0002]植物瞬时表达技术是通过分子生物学手段将外源基因在底盘植物中短时间内表达的技术。该技术不需要外源基因整合到底盘植物基因组上，不存在基因飘移等风险，具有快速、高效、易量产等特点，被广泛应用的基因功能研究及生物反应器领域。瞬时表达作为最新一代生物反应器技术已经开始用于药用蛋白、疫苗等开发；2022年加拿大卫生部已批准新冠疫苗产品Covifenz(基于植物的病毒样颗粒[VLP]，重组，佐剂)。该疫苗适用于18
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64岁人群，进行主动免疫，以预防由SARS
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CoV
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2引起的新冠肺炎，该疫苗的生产正是通过烟草瞬时表达系统完成的。因此，瞬时表达技术正在推动生物制药领域的技术革新。
[0003]瞬时表达技术的关键就是外源蛋白的高效表达，只有高效的瞬时表达系统才能够满足该技术的产业化需求，但目前的烟草瞬时表达技术效率低，成本高，无法满足大量生产的需要。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是目前的烟草瞬时表达技术效率低，成本高，无法满足大量生产的需要。
[0005]为解决上述问题，本专利技术发现了一种烟草瞬时表达调控关键因子TEF1，能够作为促进因子应用到烟草瞬时表达效率提升。通过构建了35S::TEF1过表达载体，侵染外植体，提高了烟草的瞬时表达效率，而表达效率的提升会大大降低蛋白表达成本。
[0006]为达到上述目的，本专利技术具体通过以下技术方案实现：
[0007]一种烟草瞬时表达调控关键因子，其核酸序列为SEQ ID NO.1。
[0008]SEQ ID NO.1：
[0009]ATGCTTACTTTGCTTCTTGGATTTGACACAAAATCTGCTGCTGCTCTTTCCAAATGTATGATAATGGGGGCATCAGCATCATCAGTATGGTACAATTTGAGGGTACCACATCCATGCAGAGAAGTACCTATACTTGATTATGATTTGGCTCTATTATTTCAGCCTATGCTCATGTTTGGCATCACACTTGGTGTTTCTCTAAGTGTTGTCTTCCCTTATTGGCTCATTACTGTTCTCATCATCATCCTCTTCATGGGGACTTCATCAAGATCATTTTTTAAAGCAATTGAGATGTGGAAAGAAGAAACAATTTTCAAGAAATCAATGGAAGAAGTTCCAGTTAATTCACGTGGTGAACTTATTGTTATTGATACAATGTATGAGCCACTGGTCCCTAGGGAGGAGAAAACACCACTGGAAATTTTTAGGTTCAACCTTAATTTGAAGAGAATTATGGTGCTCTTCTTAGTATGGTTCATATTTCTGATTCTTCAAGTGTTCAAGAACGATCTAATGGCTTGTTCTCCATTGTACTGGGTGCTCAACTTACTACAGTTCCCAGTAGCATTCACAGTGTTTGGATATGAATGTGTGAAATTGTACAAGGAAAGCAAGAAGAGGAGACTTGAAGGGAATACACAGTCAATATGTGAGGCTGACATTCAATGGACTGCCACAAACCTCATCTTCTGTGCCCTTTGTGGCATATTGGGAGGCACTGTTGGAGGATTGCTTGGATCTGGTGGTGGATTCATTCTTGGC
CCTCTTCTTCTTGAGATTGGAGTTATCCCTCAGGTAGCTAGTGCGACAGCAACATTTGTGATGATGTTCTCATCGTCTTTATCAGTGGTGGAGTTTTATCTCCTCAAGAGATTTCCAATGCCTTATGCTCTATATCTCATGAGTGTATCTATTCTTGCTGGCTTTTGGGGACAATGCTTCATTAGAAAACTTATCGCAATCTTAAAGAGAGCATCACTCATTGTATTCATACTTTCTGGTGTCATTTTCGCCAGCGCTCTCACAATGGGAGTGGTCGGGATAGAGAAGAGCATCAGTATGATACAGAACCATGAGTTCATGGGGTTCTTGGATTTCTGCAGCAGTCAATAA
[0010]本专利技术命名该瞬时表达调控关键因子为TEF1_CDS，转录数据表明该基因在农杆菌入侵烟草后明显下调表达，推测TEF1的表达量降低能够抵抗外源菌的入侵。烟草瞬时表达本质上是农杆菌入侵叶片的过程因此，降低烟草对外源菌的侵染能力就可以提高瞬时表达效率，TEF1表达降低可能提高植物对外源菌的侵染，因此，本专利通过过量表达TEF1可以降低烟草对外源菌的入侵，进而提高瞬时表达效率。
[0011]一种利用上述瞬时表达调控关键因子构建的过表达载体35S::TEF1，其核酸序列为SEQ ID NO.2。
[0012]SEQ ID NO.2：
[0013]TGGCAGGATATATTGTGGTGTAAACAAATTGACGCTTAGACAACTTAATAACACATTGCGGACGTTTTTAATGTACTGAATTAACGCCGAATTAATTCGAGCTCGGATCTGATAATTTATTTGAAAATTCATAAGAAAAGCAAACGTTACATGAATTGATGAAACAATACAAAGACAGATAAAGCCACGCACATTTAGGATATTGGCCGAGATTACTGAATATTGAGTAAGATCACGGAATTTCTGACAGGAGCATGTCTTCAATTCAGCCCAAATGGCAGTTGAAATACTCAAACCGCCCCATATGCAGGAGCGGATCATTCATTGTTTGTTTGGTTGCCTTTGCCAACATGGGAGTCCAAGATTCTGCAGTCAAATCTCGGTGACGGGCAGGACCGGACGGGGCGGTACCGGCAGGCTGAAGTCCAGCTGCCAGAAACCCACGTCATGCCAGTTCCCGTGCTTGAAGCCGGCCGCCCGCAGCATGCCGCGGGGGGCATATCCGAGCGCCTCGTGCATGCGCACGCTCGGGTCGTTGGGCAGCCCGATGACAGCGACCACGCTCTTGAAGCCCTGTGCCTCCAGGGACTTCAGCAGGTGGGTGTAGAGCGTGGAGCCCAGTCCCGTCCGCTGGTGGCGGGGGGAGACGTACACGGTCGACTCGGCCGTCCAGTCGTAGGCGTTGCGTGCCTTCCAGGGGCCCGCGTAGGCGATGCCGGCGACCTCGCCGTCCACCTCGGCGACGAGCCAGGGATAGCGCTCCC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种烟草瞬时表达调控关键因子，其核酸序列为SEQ ID NO.1。2.一种利用权利要求1中瞬时表达调控关键因子构建的过表达载体35S::TEF1，其核酸序列为SEQ ID NO.2。3.一种权利要求1中烟草瞬时表达调控关键因子TEF1在提高烟草瞬时表达效率中的应用。4.一种利用权利要求1中烟草瞬时表达调控关键因子TEF1提供烟草瞬时表达效率的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)活化农杆菌菌株；(2)扩大培养；(3)农杆菌侵染。5.如权利要求4中的方法，其特征在于：步骤(1)包括从超低温冰箱中取出冻存的农杆菌，在含有特定抗生素的固体培养基上划线培养3天；挑取长势良好的单菌落接入含相应抗生素的10mLYEP培养基。6.如权利要求5中的方法，其特征在于：步骤(1)中35S::TEF1农杆菌培养基加入的抗生素为利福平和卡那霉素；pJL
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TRBO
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GFP农杆菌培养基加入的抗生素为Rif和卡那霉素。7.如权利要求4中的方法，其特征在于：步骤(2)包括准备2份YEP培养基，分别接菌35S::TEF1和...

【专利技术属性】
技术研发人员：张增林，郭永峰，李伟，吴荣荣，潘晓璐，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所中国烟草总公司青州烟草研究所，
类型：发明
国别省市：