重组人源III型胶原蛋白脂质体制备方法技术

本发明专利技术涉及生物医用材料技术领域，公开了重组人源III型胶原蛋白脂质体制备方法，S1、称取蛋黄卵磷脂、胆固醇和胶原蛋白溶液，溶于7.5％无水乙醇中，混匀，得到悬浊液；S2、将悬浊液置于超临界设备中进行制备；S3、制备结束后，恒速泄压，得到乳白色的混悬重组人源III型胶原蛋白脂质体；S4、将混悬重组人源III型胶原蛋白脂质体经微孔滤膜过滤，得到重组人源III型胶原蛋白脂质体。本发明专利技术采用超临界二氧化碳流体技术制备重组人源III型胶原蛋白脂质体，具有操作条件温和，工艺简单，可实现工业化、规模化生产，且整个生产过程无溶剂残留、无污染，且脂质体包封率高、颗粒粒径小、稳定性较高，是制备纳米脂质体的理想选择。备纳米脂质体的理想选择。

【技术实现步骤摘要】
重组人源III型胶原蛋白脂质体制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医用材料
，更具体地说，它涉及重组人源III型胶原蛋白脂质体制备方法。

技术介绍

[0002]重组人源Ⅲ型胶原蛋是利用基因工程技术以人胶原III型原始基因序列经过优化重组表达得到的，与人体天然胶原氨基酸序列高度一致。并将容易引起人体免疫反应的色氨酸等氨基酸残基排除在外，重组人源胶原蛋白应用于人体后所引起的免疫排斥反应要低很多，甚至能达到无排斥反应水平。具有高生物活性和生物相容性，且水溶性好。它的主要功效为:
①
修复皮肤损伤
②
改善皮肤角质层含水量
③
增加皮肤弹性
④
改善皮肤的紧致度
⑤
祛除皱纹促进全层创面愈合和血管新生，直接补充创面的Ⅲ型胶原蛋白，修复皮肤创伤、改善伤口愈合质量的功能。
[0003]但是水溶性的重组人源III型胶原蛋白难以穿透角质层细胞间的脂质结构，且作用时间短，因此，需要依靠载体的帮助穿透角质层，延长其作用时间，从而达到与其治疗的效果。脂质体的皮肤穿透力是常规物质的几十倍，提高靶器官浓度达几百倍。
[0004]脂质体的结构与人体的皮肤脂质有着高度的相似性，具有生物相容性高，生物降解性好，能够促进药物的透皮吸收等优点。能顺利穿透比自身粒径小1/10的角质层小孔，进入血液循环。能够在真皮中形成药物储库而缓慢的释放药物。
[0005]因此，针对上述问题，本专利技术提供一种重组人源III型胶原蛋白脂质体制备方法
。

技术实现思路

[0006]为了克服现有技术中所存在的上述缺陷，本专利技术提供了重组人源III型胶原蛋白脂质体制备方法，采用超临界二氧化碳流体技术制备重组人源III型胶原蛋白脂质体，具有操作条件温和，工艺简单，可实现工业化、规模化生产，且整个生产过程无溶剂残留、无污染，且脂质体包封率高、颗粒粒径小、稳定性较高，是制备纳米脂质体的理想选择。
[0007]本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：重组人源III型胶原蛋白脂质体制备方法，包括以下步骤：
[0008]S1、称取蛋黄卵磷脂、胆固醇和胶原蛋白溶液，溶于7.5％无水乙醇中，混匀，得到悬浊液；
[0009]S2、将悬浊液置于超临界设备中进行制备；
[0010]S3、制备结束后，恒速泄压，得到乳白色的混悬重组人源III型胶原蛋白脂质体；
[0011]S4、将混悬重组人源III型胶原蛋白脂质体经微孔滤膜过滤，得到重组人源III型胶原蛋白脂质体。
[0012]进一步的，所述步骤S1中的药脂比为l：lO。
[0013]进一步的，步骤S1中所述的蛋黄卵磷脂和胶原蛋白的重量比为7.5：1。
[0014]进一步的，步骤S2中所述的制备条件为：临界压力20MPa，温度45
‑
70℃，孵化时间
0.3
‑
1h。
[0015]进一步的，步骤S4中所述的微孔滤膜的滤孔直径为0.22μm。
[0016]综上所述，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术采用超临界二氧化碳流体技术制备重组人源III型胶原蛋白脂质体，具有操作条件温和，工艺简单，可实现工业化、规模化生产，且整个生产过程无溶剂残留、无污染，且脂质体包封率高、颗粒粒径小、稳定性较高，是制备纳米脂质体的理想选择。
具体实施方式
[0017]以下对本专利技术作进一步详细说明。
[0018]实施例1：重组人源III型胶原蛋白脂质体制备方法，包括以下步骤：
[0019]S1、称取蛋黄卵磷脂、胆固醇和胶原蛋白溶液，溶于7.5％无水乙醇中，药脂比为10:1，蛋黄卵磷脂和胶原蛋白的重量比为7.5：1，混匀，得到悬浊液，其中，药脂比指胶原蛋白与蛋黄卵磷脂和胆固醇之比；
[0020]S2、将悬浊液置于超临界设备中进行制备，制备时需满足：临界压力20MPa，温度45
‑
70℃，孵化时间0.3
‑
1h；
[0021]S3、制备结束后，恒速泄压，得到乳白色的混悬重组人源III型胶原蛋白脂质体；
[0022]S4、将混悬重组人源III型胶原蛋白脂质体经滤孔直径为0.22μm的微孔滤膜过滤，得到重组人源III型胶原蛋白脂质体。
[0023]在本实施例中，蛋黄卵磷脂是从蛋黄中提取得到，具有价格低、中性电荷、化学惰性的性质，而且是细胞膜的主要的磷脂成分，生物相容性好，无免疫原性，蛋黄卵磷脂分散在水相时，分子的疏水尾部倾向于聚集在一起，避开水相，而亲水头部暴露于水相，形成具有双分子结构的封闭囊泡，将水溶性的重组III型人源化胶原蛋白包裹在囊泡内水相中。
[0024]胆固醇是生物膜中重要成分之一，它本身不会形成脂质双分子层结构，但它能以高浓度方式掺入磷脂膜中，起着调节膜结构流动性的作用。
[0025]本实施例中超临界设备可满足制备混悬重组人源III型胶原蛋白脂质体所需的临界条件：临界压力20MPa，温度45
‑
70℃。
[0026]实施例2：观察得到，Rhc.III.Lips的外观呈乳白色的混悬液，粒子呈类球形且均一。通过电镜照片进行粒径检测得到，粒径可控(50
‑
300)nm，选择使用透析法进行包封率的测定，通过测定脂质体中游离药物的含量来计算包封率，测得的结果为，包封率大于80％，载药量不低于6％，pH值为(6.25
±
O.)。
[0027]采用动态膜透析法考察Rhc.Ⅲ.Lips中药物的释放行为。采用扩散池法，以pH 7.4的PBS作为释放介质，对Rhc.Ⅲ.Lips进行体外释放特性试验，在预定时间点取样并检测总胶原蛋白的含量，计算累积释放百分率。结果显示：Rhc.III.Lips在24h累积释放百分率分别达到(77.6士6.36)％，在48h累积释放百分率为(75.1+1.56)％，得出结论：Rhc.III.Lips具有一定的缓释作用。
[0028]本具体实施例仅仅是对本专利技术的解释，其并不是对本专利技术的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本专利技术的权利要求范围内都受到专利法的保护。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.重组人源III型胶原蛋白脂质体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、称取蛋黄卵磷脂、胆固醇和胶原蛋白溶液，溶于7.5％无水乙醇中，混匀，得到悬浊液；S2、将悬浊液置于超临界设备中进行制备；S3、制备结束后，恒速泄压，得到乳白色的混悬重组人源III型胶原蛋白脂质体；S4、将混悬重组人源III型胶原蛋白脂质体经微孔滤膜过滤，得到重组人源III型胶原蛋白脂质体。2.根据权利要求1所述的重组人源III型胶原蛋白脂质体制备方法，其特征在于，所述步骤S1中的药脂比为l：lO。3...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈进，沈阳，姜楠，应国量，
申请(专利权)人：成都君科康蓉科技有限公司，
类型：发明
国别省市：