一种水解乳清蛋白中肽的分子量分布的测定方法技术

本发明专利技术涉及蛋白分子量检测技术领域，提供一种水解乳清蛋白中肽的分子量分布的检测方法，包括以下步骤：配制六种标准溶液，采用高效液相色谱法和紫外检测器进行检测；以标准品保留时间为横坐标，分子量的log值为纵坐标，通过GPC软件计算回归方程；将水解乳清蛋白配制成待测溶液，按照相同的色谱条件进行测定，由GPC软件分析水解乳清蛋白中肽的分子量分布。本发明专利技术的检测方法以不同分子量的标准品制成标准曲线，筛选合适的色谱柱，配合其他色谱条件，通过GPC软件对水解乳清蛋白中肽的分子量分布进行色谱分析，可以准确测定样品中分子量的分布情况，线性较好，准确度高。准确度高。准确度高。

【技术实现步骤摘要】
一种水解乳清蛋白中肽的分子量分布的测定方法


[0001]本专利技术涉及蛋白分子量检测
，具体涉及一种水解乳清蛋白中肽的分子量分布的测定方法。

技术介绍

[0002]水解乳清蛋白是乳清蛋白的水解产物，不仅溶解性好，耐酸、耐热，同样也具有多种生理调节功能。目前国内外通常用酶解法制备水解乳清蛋白。水解乳清蛋白其中某些肽段具有较强的免疫调节作用和抗菌作用，在婴幼儿配方奶粉中添加部分适度水解的乳清蛋白，可以预防过敏反应，其乳清蛋白短肽可以直接被肠道吸收，具有较高的消化吸收率。
[0003]目前测定聚合物分子量分布的方法有渗透压法、GPC法、粘度法、光散射法等，其中，高效凝胶渗透色谱法(GPC)是应用最广泛的检测聚合物分子量的方法，其具有精密度高、重复性好、分析速度快等优点。现阶段水解乳清蛋白中肽的分子量分布并没有现成的国标检测和分析方法，这种现状使得该产品没有统一的标准，因此，建立一套有效、稳定的水解乳清蛋白中肽的分子量分布检测方法十分必要。

技术实现思路

[0004]因此，提供一种水解乳清蛋白中肽的分子量分布的检测方法，简洁快速、重复性好，可以准确测定样品中肽的分子量的分布情况。
[0005]为达到上述目的，本专利技术提供了一种水解乳清蛋白中肽的分子量分布的检测方法，包括以下步骤：
[0006](1)分别以牛血清蛋白、α
‑
乳清蛋白、抑菌肽、杆菌肽、缬氨酸
‑
酪氨酸
‑
缬氨酸和甘氨酸
‑
甘氨酸作为标准品配制六种标准溶液，采用高效液相色谱法和紫外检测器进行检测；
[0007](2)以标准品保留时间为横坐标，分子量的log值为纵坐标，通过GPC软件计算回归方程；
[0008](3)将水解乳清蛋白配制成待测溶液，按照相同的色谱条件进行测定，由GPC软件分析水解乳清蛋白中肽的分子量分布。
[0009]优选地，采用高效液相色谱法中的色谱条件包括：以亲水性硅胶基质为填充剂，色谱柱为PROTEIN KW
‑
802.5；以乙腈、水和三氟乙酸的混合溶液作为混合流动相进行梯度洗脱，其中，乙腈、水和三氟乙酸的体积比为35～45:55～65:0.1。
[0010]优选地，所述六种标准溶液的配置方法为：
[0011]将牛血清蛋白、α
‑
乳清蛋白、抑菌肽、杆菌肽、缬氨酸
‑
酪氨酸
‑
缬氨酸和甘氨酸
‑
甘氨酸分别溶于混合均匀的流动相中，六种标准品溶液的浓度均为1mg/mL。
[0012]优选地，所述待测溶液的配制方法如下：取水解乳清蛋白于容量瓶中，加入少量水使样品溶解，后使用流动相定容至刻度，混匀，超声后，滤膜过滤。
[0013]优选地，所述超声时间为5～15min，所述滤膜为0.22μm聚四氟乙烯滤膜。
[0014]优选地，所述色谱柱的长度为300mm，直径为8.0mm，填料粒径为5μm。
[0015]优选地，所述色谱条件：柱温为25～35℃，流速为0.3～0.7mL/min，进样量为10～50μL。
[0016]优选地，所述柱温为30℃，流速为0.5mL/min，进样量为50μL。
[0017]优选地，所述牛血清蛋白的分子量为66000，所述α
‑
乳清蛋白的分子量为14178，所述抑菌肽的分子量为6511，所述杆菌肽的分子量为1422，所述缬氨酸
‑
酪氨酸
‑
缬氨酸的分子量为379，所述甘氨酸
‑
甘氨酸的分子量为132。
[0018]通过采用前述技术方案，本专利技术的有益效果是：
[0019]本专利技术的检测方法以不同分子量的牛血清蛋白、α
‑
乳清蛋白、抑菌肽、杆菌肽、缬氨酸
‑
酪氨酸
‑
缬氨酸和甘氨酸
‑
甘氨酸作为标准品，筛选合适的色谱柱，配合其他色谱条件，通过GPC软件对水解乳清蛋白中肽的分子量分布进行色谱分析，可以准确测定样品中分子量的分布情况，线性较好，准确度高。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为本专利技术实施例的6种标准品液相色谱图；
[0022]图2为本专利技术实施例的标准品标准曲线图；
[0023]图3为本专利技术实施例的水解乳清蛋白液相色谱图；
[0024]图4为本专利技术对比例的标准品标准曲线图；
[0025]图5为本专利技术对比例的水解乳清蛋白液相色谱图。
具体实施方式
[0026]以下将结合具体实施例来详细说明本专利技术的实施方式，借此对本专利技术如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。
[0027]若未特别指明，实施例中所采用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所采用的试剂和产品也均为可商业获得的。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明。
[0028]实施例
[0029]高效液相色谱条件：
[0030]色谱柱为PROTEIN KW
‑
802.5色谱柱(300
×
8.0mm，5μm)，以乙腈
‑
水
‑
三氟乙酸(体积比为40:60:0.1)为流动相进行等度洗脱，检测器为紫外检测器，波长为210nm，柱温为30℃，流速为0.5mL/min，进样量为50μL。
[0031]样品配制：
[0032]标准品溶液：分别取牛血清蛋白、α
‑
乳清蛋白、抑菌肽、杆菌肽、缬氨酸
‑
酪氨酸
‑
缬氨酸和甘氨酸
‑
甘氨酸标准品约10mg置于10mL容量瓶中，用流动相溶解定容，作为标准品溶液。
[0033]样品待测溶液：取0.1g水解乳清蛋白于25mL容量瓶中，加入少量的水使样品溶解，
后使用流动相定容至刻度，混匀，超声10分钟后，过0.22μm聚四氟乙烯滤膜，得到待测溶液。
[0034]实验操作：取上述溶液20μL进样，记录色谱图，如图1～图3所示。
[0035]标准品的分子量为：
[0036]表1标准品的分子量及其log值
[0037]标准品分子量(M.W)Log(M.W)牛血清蛋白660004.82α
‑
乳清蛋白141784.15抑菌肽65113.81杆菌肽14223.15缬氨酸
‑
酪氨酸
‑
缬氨酸3792.58甘氨酸
‑
甘氨酸1322.12
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种水解乳清蛋白中肽的分子量分布的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）分别以牛血清蛋白、α
‑
乳清蛋白、抑菌肽、杆菌肽、缬氨酸
‑
酪氨酸
‑
缬氨酸和甘氨酸
‑
甘氨酸作为标准品配制六种标准溶液，采用高效液相色谱法和紫外检测器进行检测；（2）以标准品保留时间为横坐标，分子量的log值为纵坐标，通过GPC软件计算回归方程；（3）将水解乳清蛋白配制成待测溶液，按照相同的色谱条件进行测定，由GPC软件分析水解乳清蛋白中肽的分子量分布。2.根据权利要求1所述的一种水解乳清蛋白中肽的分子量分布的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法中的色谱条件包括：以亲水性硅胶基质为填充剂，色谱柱为PROTEIN KW
‑
802.5；以乙腈、水和三氟乙酸的混合溶液作为混合流动相进行梯度洗脱，其中，乙腈、水和三氟乙酸的体积比为35~45: 55~65: 0.1。3.根据权利要求2所述的一种水解乳清蛋白中肽的分子量分布的检测方法，其特征在于，所述六种标准溶液的配置方法为：将牛血清蛋白、α
‑
乳清蛋白、抑菌肽、杆菌肽、缬氨酸
‑
酪氨酸
‑
缬氨酸和甘氨酸
‑
甘氨酸分别溶于混合均匀的流动相中，六种标准品溶液的浓度均为1mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨旭，简康，
申请(专利权)人：辰欣药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：