一种蛋白质组学标准品及其制备系统技术方案

本发明专利技术提供一种蛋白质组学标准品及其制备系统，涉及蛋白质组学技术领域。该蛋白质组学标准品及其制备系统，所述蛋白质组学标准品为从AC16细胞株中提取获得的细胞全蛋白质或由AC16细胞全蛋白质水解得到的多肽。通过采用AC16细胞作为该蛋白质组学标准品，AC16细胞为人体心肌细胞，人体的心肌细胞，含有丰富的肌原纤维，肌原纤维由粗肌丝和细肌丝组装而成，粗肌丝的成分是肌球蛋白，细肌丝的主要成分是肌动蛋白，辅以原肌球蛋白和肌钙蛋白，因此，心肌细胞中含有大量蛋白质，且人体心肌细胞可以完整记录人体的基因组，在确保成品产量的同时，确保成品的品质，提升该蛋白质组学标准品的使用效果。的使用效果。的使用效果。

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白质组学标准品及其制备系统


[0001]本专利技术涉及蛋白质组学
，具体为一种蛋白质组学标准品及其制备系统。

技术介绍

[0002]蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象，研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化规律的科学，其研究内容包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生，细胞代谢等过程的整体而全面的认识，而在蛋白质组学研究实验过程中通常需要使用到蛋白质组学标准品来作为实验素材，进行研究。
[0003]现有的蛋白质组学标准品大多采用人体的肝肾组织癌变细胞作为基础进行培养，将培养后的细胞作为原材料进行蛋白质组学标准品制备，而癌变细胞本身的基因组相比于人体的正常细胞表达已发生改变，成品的质量难以得到保证，同时，现有的制备系统大多采用单一的溶液作为细胞缓冲液和细胞裂解液进行使用，导致整体的生产效率和产量不佳。

技术实现思路

[0004](一)解决的技术问题
[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种蛋白质组学标准品及其制备系统，解决了现有的蛋白质组学标准品及其制备系统成品产量较低，品质不佳，系统对成品的评估和保存效果不好，整体的实用性不强的问题。
[0006](二)技术方案
[0007]为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种蛋白质组学标准品，所述蛋白质组学标准品为从AC16细胞株中提取获得的细胞全蛋白质或由AC16细胞全蛋白质水解得到的多肽。
[0008]一种蛋白质组学标准品制备系统，包括细胞存放模块，所述细胞存放模块连接有细胞培养模块，所述细胞培养模块连接有蛋白质分离模块，所述蛋白质分离模块连接有蛋白质水解模块；
[0009]所述蛋白质分离模块和蛋白质水解模块连接有成品评估模块，所述成品评估模块连接有成品保存模块。
[0010]优选的，所述细胞存放模块和成品保存模块连接有冷库模块，所述细胞培养模块连接有恒温箱模块和培养器模块。
[0011]优选的，所述蛋白质分离模块包括溶液配制模块和细胞处理模块，所述溶液配制模块连接有细胞缓冲液配制和细胞分解液配制，所述细胞处理模块连接有破碎处理模块和离心处理模块，所述破碎处理模块连接有细胞刮，所述离心处理模块连接有离心机。
[0012]优选的，所述蛋白质水解模块连接有试剂处理模块和成品富集模块，所述成品评估模块连接有质谱鉴定模块和稳定性评估模块。
[0013]一种蛋白质组学标准品，所述的蛋白质组学标准品由以下方法制备而成：
[0014]S1.AC16细胞预处理
[0015]取培养瓶装的AC16细胞，去除外包装，用75％酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，静置2
‑
4小时，镜下观察，未超过80％汇合度时，加入5mL培养基混合均匀；
[0016]S2.AC16细胞培养
[0017]将混合均匀的细胞在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4
‑
6mL完全培养基后吹匀，然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜，第二天换液并检查细胞密度，细胞密度达80％
‑
90％，进行传代培养，连续采集9
‑
11个代次细胞，每次分别采集9
×
106细胞数备用；
[0018]S3.总蛋白质获取
[0019]冰上操作，配制细胞裂解液和细胞缓冲液，将培养好的细胞进行收集，吸取培养基，预冷细胞缓冲液清洗细胞三次，通过细胞刮将细胞刮脱，收集至离心管，1000rpm离心5分钟，离心后，向细胞沉淀中加入细胞裂解液200μl，混匀后冰上放置40mi n，10000rpm，4℃，离心15mi n，上清即为细胞总蛋白质提取物；
[0020]S4.总蛋白质水解
[0021]向每管200μg的总蛋白质提取物中加入氨基甲脒，加入50mM的DTT，静置30mi n后加入100mM碘乙酰胺，再次静置30mi n，去除试剂和交换缓冲液，在适当的pH为7和温度为37℃的环境下，用胰蛋白酶将提取物在碳酸氢铵缓冲液中过夜变性18小时，加入50μL的50mM稀盐酸终止酶切，4℃下12000rpm离心20mi n收集肽段获得多肽形态的蛋白质组学标准品。
[0022]优选的，所述S3中，细胞裂解液组成成分为每1ml NaF溶液加入10μl磷酸酶抑制剂、1μl蛋白酶抑制剂和5μl的100mM的PMSF。
[0023]优选的，所述S3中，细胞缓冲液组成成分为每1ml的PBS加入0.2μl的Aprot i n i n和0.2μl的Leupet i n。
[0024](三)有益效果
[0025]本专利技术提供了一种蛋白质组学标准品及其制备系统。具备以下有益效果：
[0026]1、本专利技术提供了一种蛋白质组学标准品及其制备系统，相较于现有的蛋白质组学标准品，该蛋白质组学标准品通过采用AC16细胞作为该蛋白质组学标准品，AC16细胞为人体心肌细胞，人体的心肌细胞，含有丰富的肌原纤维，肌原纤维由粗肌丝和细肌丝组装而成，粗肌丝的成分是肌球蛋白，细肌丝的主要成分是肌动蛋白，辅以原肌球蛋白和肌钙蛋白，因此，心肌细胞中含有大量蛋白质，且人体心肌细胞可以完整记录人体的基因组，在确保成品产量的同时，确保成品的品质，提升该蛋白质组学标准品的使用效果。
[0027]2、本专利技术提供了一种蛋白质组学标准品及其制备系统，相较于现有的蛋白质组学标准品，该蛋白质组学标准品通过采用配制的细胞缓冲液和细胞分解液取代传统方式中的单一的PBS溶液和PMSF溶液，在确保可以对培养基中的细胞进行更彻底的清洗的同时，可以提升细胞在蛋白质制备过程中的裂解度，进一步提升该系统整体的实用性。
[0028]3、本专利技术提供了一种蛋白质组学标准品及其制备系统，相较于现有的蛋白质组学标准品，该蛋白质组学标准品通过在其制备系统中设置有成品评估模块和成品保存模块，成品评估模块可以对制得的蛋白质组学标准品进行测定评估，成品保存模块和细胞存放模块均直接和冷库模块进行连接，在确保成品品质的同时，可以提升成品的保存效果，进一步提升产品的质量。
附图说明
[0029]图1为本专利技术的系统工作流程示意图；
[0030]图2为本专利技术的细胞存放模块的流程示意图；
[0031]图3为本专利技术的细胞培养模块的流程示意图；
[0032]图4为本专利技术的蛋白质分离模块的流程示意图；
[0033]图5为本专利技术的蛋白质水解模块的流程示意图；
[0034]图6为本专利技术的成品评估模块的流程示意图。
[0035]其中，1、细胞存放模块；2、细胞培养模块；3、蛋白质分离模块；4、蛋白质水解模块；5、成品评估模块；6、成品保存模块；7、冷库模块；8、恒温箱模块；9、培养器模块；10、试剂处理模块；11、成品富集模块；12、质谱鉴定模块；13、稳定性评估模块；301、溶液配置模块；302、细胞缓冲液配置；303、细胞分解液配置；304、细胞处理模块；305、破碎处本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白质组学标准品，其特征在于：所述蛋白质组学标准品为从AC16细胞株中提取获得的细胞全蛋白质或由AC16细胞全蛋白质水解得到的多肽。2.一种蛋白质组学标准品制备系统，包括细胞存放模块(1)，其特征在于：所述细胞存放模块(1)连接有细胞培养模块(2)，所述细胞培养模块(2)连接有蛋白质分离模块(3)，所述蛋白质分离模块(3)连接有蛋白质水解模块(4)；所述蛋白质分离模块(3)和蛋白质水解模块(4)连接有成品评估模块(5)，所述成品评估模块(5)连接有成品保存模块(6)。3.根据权利要求2所述的一种蛋白质组学标准品制备系统，其特征在于：所述细胞存放模块(1)和成品保存模块(6)连接有冷库模块(7)，所述细胞培养模块(2)连接有恒温箱模块(8)和培养器模块(9)。4.根据权利要求2所述的一种蛋白质组学标准品制备系统，其特征在于：所述蛋白质分离模块(3)包括溶液配制模块(301)和细胞处理模块(304)，所述溶液配制模块(301)连接有细胞缓冲液配制(302)和细胞分解液配制(303)，所述细胞处理模块(304)连接有破碎处理模块(305)和离心处理模块(307)，所述破碎处理模块(305)连接有细胞刮(306)，所述离心处理模块(307)连接有离心机(308)。5.根据权利要求2所述的一种蛋白质组学标准品制备系统，其特征在于：所述蛋白质水解模块(4)连接有试剂处理模块(10)和成品富集模块(11)，所述成品评估模块(5)连接有质谱鉴定模块(12)和稳定性评估模块(13)。6.一种蛋白质组学标准品，其特征在于，所述的蛋白质组学标准品由以下方法制备而成：S1.AC16细胞预处理取培养瓶装的AC16细胞，去除外包装，用75％酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，静置2
‑
4小时，镜下观察，未...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨善，莫俊杰，周鸿凯，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：