核苷酸、包含其的疫苗以及复合免疫佐剂制造技术

本发明专利技术涉及一种核苷酸、包含其的疫苗以及复合疫苗佐剂。所述核苷酸的序列如SEQ ID No:1所示。相对于传统技术，本申请的有益效果包括：本申请采用了全新优化序列，提供一种核苷酸，该核苷酸能够作为CpG寡聚核苷酸佐剂，诱导疫苗抗原产生更强的体液免疫、细胞免疫水平和抗肿瘤免疫效果等，具有明显的临床应用价值和疫苗开发价值。并且，使用本申请的免疫佐剂有助于降低临床使用疫苗剂量，提高安全性。提高安全性。提高安全性。

【技术实现步骤摘要】
核苷酸、包含其的疫苗以及复合免疫佐剂


[0001]本专利技术涉及医学生物制品领域，特别是涉及一种核苷酸、包含其的疫苗以及复合疫苗佐剂。

技术介绍

[0002]佐剂是一种添加到疫苗中以刺激和增强免疫反应强度和持久性的物质，能够增强机体对抗原的免疫应答或者改变免疫反应的类型，属于非特异性的免疫增强剂，其本身无抗原性。理想的佐剂不仅能够增强免疫反应，而且能使机体获得最佳的保护性免疫。
[0003]1939年，美国食品药品监督管理局批准了人类历史首个疫苗佐剂——铝佐剂(明矾)用于白喉毒素疫苗，其后数十年铝佐剂一直是疫苗界唯一的免疫佐剂选择。直到20世纪90年代才出现人类历史上第一个非铝的新型佐剂——MF59油乳佐剂，在欧洲被批准用于疫苗。受限于副作用、稳定性、有效性等因素，当前，被批准应用于人类疫苗的佐剂仅有少数几个，包括铝佐剂、MF59、AS系列佐剂、CpG寡聚核苷酸佐剂等。
[0004]其中，CpG寡聚核苷酸作为模式识别受体TLR9的激动剂，可以同时激活和加强细胞免疫以及体液免疫效果，被认为是一种拥有巨大潜力的疫苗佐剂。TLR9有三类CpG寡核苷酸配体，它们可以通过不同的核苷酸序列基序和它们在浆细胞样DC中刺激IFNα的能力来区分。TLR9激动剂CpG 1018是一种22聚体未甲基化的CpG
‑
B类寡核苷酸，是一种有效的TH1细胞佐剂，可刺激强B细胞和NK细胞活化。CpG 1018目前正在临床试验中作为COVID
‑
19疫苗的潜在疫苗佐剂进行评估。此外，该分子是Heplisav
‑
B的一个组成部分，Heplisav
‑
B是一种改良的HBV疫苗，已获准用于成人(年龄>18岁)。虽然还有其他HBV疫苗已经获得许可并被广泛使用，但它们通常以三剂方案给药，而Heplisav
‑
B的主要优势是它提供了一种简化的两剂方案。在小鼠的临床前研究中，与无佐剂或明矾佐剂的制剂相比，CpG核苷酸对各种抗原(包括HBV的表面抗原、HBsAg)诱导了显着更高的抗体反应。然而，TLR9在小鼠中的表达模式与人类和猕猴不同。在小鼠中，许多细胞类型，包括单核细胞/巨噬细胞谱系的细胞，表达TLR9，而在人类和猕猴中，TLR9的表达严格限于浆细胞样DC和B细胞，这突出了了解新佐剂作用的分子机制的重要性。最后，上述不同类别的CpG分子的不同免疫刺激能力似乎取决于它们是否以单体或多聚体形式出现。因此，单体CpG
‑
B寡核苷酸定位于溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)阳性内体并促进浆细胞样DC成熟，但很少或不产生IFNα；然而，当复合到微粒中时，CpG
‑
B定位于转铁蛋白受体1(TFR1)阳性内体并通过TLR9依赖性机制导致IFNα的产生。此外，单体CpG
‑
B可以很容易地被B细胞吸收并刺激它们的活化。相比之下，由于其回文结构而自发形成纳米颗粒状复合物的CpG
‑
A也定位于TFR1+内体在浆细胞样DC中并刺激IFNα产生，但不能被B细胞吸收，B细胞不会内化较大的DNA复合物，如CpG
‑
A。刺激适应性免疫以响应CpG加抗原免疫的先天机制和细胞类型似乎也取决于CpG的形式。因此，用可溶性CpG
‑
B加抗原免疫小鼠，通过依赖于DC中TLR9介导的MyD88激活的机制诱导TH1 CD4+T细胞和抗体反应。相反，使用聚合形式的CpG
‑
B加抗原进行免疫似乎并不严重依赖于DC中的MyD88信号传导，认为其他先天细胞在感知聚合形式的CpG和引发适应性免疫中的作用。尽管CpG1018佐
剂在临床上取得了非常理想的效果，但还是存在一些缺陷，比较突出的是其临床使用剂量过大，存在一定的安全隐患。因此，优化CpG基序设计，开展新的CpG寡聚核苷酸佐剂研究，有着十分重要的应用价值和社会意义。

技术实现思路

[0005]基于此，本申请的目的包括提供一种核苷酸，能够作为CpG寡聚核苷酸疫苗佐剂，协助抗原诱导机体产生更强的特异性免疫反应。
[0006]在本申请的第一方面，提供一种核苷酸，所述核苷酸的序列如SEQ ID No:1所示。
[0007]在本申请的第二方面，提供在本申请的第一方面所述的核苷酸作为免疫佐剂的用途。
[0008]在本申请的第三方面，提供一种疫苗，所述疫苗包含抗原以及免疫佐剂，所述免疫佐剂包含在本申请的第一方面所述的核苷酸或者还包含其他免疫佐剂。
[0009]在本申请的一些实施方式中，所述疫苗满足如下条件中的一个或者多个：
[0010](1)所述疫苗为重组蛋白疫苗；和，
[0011](2)所述其他免疫佐剂选自铝佐剂和CpG1018中的一种或者多种。
[0012]在本申请的一些实施方式中，所述抗原为新型冠状病毒重组蛋白。
[0013]在本申请的一些实施方式中，所述抗原为人乳头瘤病毒16型重组蛋白。
[0014]在本申请的一些实施方式中，所述抗原和所述核苷酸的质量比为(2.5
‑
5)：1。
[0015]在本申请的一些实施方式中，所述抗原、所述核苷酸和所述其他免疫佐剂的质量比为(2.5
‑
5)：1：(45
‑
55)。
[0016]在本申请的一些实施方式中，所述抗原、所述核苷酸和所述其他免疫佐剂的质量比为(2.5
‑
5)：1：(49
‑
51)。
[0017]在本申请的第四方面，提供一种复合免疫佐剂，所述复合免疫佐剂包含第一方面所述的核苷酸和铝佐剂；
[0018]在本申请的一些实施方式中，所述核苷酸和铝佐剂的质量比为1：(45
‑
55)。
[0019]在本申请的一些实施方式中，所述核苷酸和铝佐剂的质量比为1：(49
‑
51)。
[0020]相对于传统技术，本申请的有益效果包括：
[0021]本申请采用了全新优化序列，提供一种核苷酸，该核苷酸能够作为CpG寡聚核苷酸佐剂，诱导疫苗抗原产生更强的体液免疫、细胞免疫水平和抗肿瘤免疫效果等，具有明显的临床应用价值和疫苗开发价值。并且，由于相对于传统技术(例如CpG1018)本申请能诱导疫苗产生更强的免疫，因此采用本申请的免疫佐剂有助于降低临床疫苗使用剂量，提高安全性。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案、更完整地理解本申请及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对本领域技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为实施例1中的新型冠状病毒重组蛋白的特异性抗体水平结果；其中，A、新型
冠状病毒蛋白加佐剂的疫苗实验组；B、单独新型冠状病毒蛋白的疫苗组；C、单独CpG0620佐剂对照组；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.核苷酸，其特征在于，所述核苷酸的序列如SEQ ID No:1所示。2.权利要求1所述的核苷酸作为免疫佐剂的用途。3.疫苗，其特征在于，所述疫苗包含抗原以及免疫佐剂，所述免疫佐剂包含权利要求1所述的核苷酸或者还包含其他免疫佐剂。4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗满足如下条件中的一个或者多个：(1)所述疫苗为重组蛋白疫苗；和，(2)所述其他免疫佐剂选自铝佐剂和CpG1018中的一种或者多种。5.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于，所述抗原为新型冠状病毒重组蛋白。6.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于，所述抗原为人乳头瘤病毒16型重组蛋白。7.根据权利要求3至6中任一项所述的疫苗，其特征在于，所述抗原和所述核苷酸的质量比为(2.5
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：高孟，李思奇，朱赟，张柯欣，安彤，马培凯，陈刚，陆绍红，庄昉成，
申请(专利权)人：杭州医学院，
类型：发明
国别省市：