一种识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体及其应用制造技术

本申请涉及免疫学的技术领域，具体公开了一种识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体及其应用，所述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包括SEQ ID No.1所示的CDR1、SEQ ID No.2所示的CDR2和SEQ ID No.3所示的CDR3；所述轻链可变区包括SEQ ID No.4所示的CDR1、SEQ ID No.5所示的CDR2和SEQ ID No.6所示的CDR3。上述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体仅特异性识别并结合第181位苏氨酸发生了磷酸化的Tau蛋白，不与未磷酸化的蛋白结合，灵敏度高，结果准确。结果准确。

【技术实现步骤摘要】
一种识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体及其应用


[0001]本申请涉及免疫学的
，更具体地说，涉及一种识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默症(Alzheimer's disease，AD)是一种以进行性痴呆为主要特征的神经元退行性疾病，多出现在老年时期。其特有的病理改变为神经元内病理性Tau蛋白纤维形成神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFTs)以及细胞外β
‑
淀粉样多肽(β
‑
amyloid peptide，Aβ)沉积形成的神经炎性斑块，临床上表现为进行性认知功能障碍和记忆力衰退、性格和行为改变、判断力下降、社交障碍以及生活自理能力丧失等。目前的研究认为，临床上认知功能的下降主要与NFTs的数量密切。NFTs主要由成对螺旋纤丝(paired helical filament，PHF)构成，其主要成分是过度磷酸化的Tau蛋白(微管相关蛋白Tau)的各种异构体。
[0003]许多研究表明，在阿尔茨海默症及其他Tau蛋白引起的病理过程中，Tau蛋白的过度磷酸化可能发生在最早期。其中，Tau蛋白的181位苏氨酸(T181)磷酸化是最常见的磷酸化形式之一，也是阿尔茨海默症所特有的磷酸化位点。因此，如果能快速检测出发生了pT181磷酸化的Tau蛋白，就能在早期诊断出阿尔茨海默症，这对于预防和治疗阿尔茨海默症具有重要的意义。
[0004]目前，检测Tau蛋白pT181磷酸化的试剂盒多采用ELISA检测法，需要配合特异性识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体。但市面上此类单抗的数量少、灵敏度低、特异性差，给相关的检测带来了一定的障碍。

技术实现思路

[0005]为了对Tau蛋白第181位苏氨酸是否发生了磷酸化进行高特异性、高灵敏度检测，本申请提供一种识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体及其应用。
[0006]本申请提供的识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体仅特异性识别并结合第181位苏氨酸发生了磷酸化的Tau蛋白，不与未发生磷酸化的Tau蛋白结合，特异性好，灵敏度高，结果准确，可用于实际的临床检测中。
[0007]第一方面，本申请提供一种识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体，采用如下技术方案：
[0008]一种识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体，所述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区；
[0009]所述重链可变区包括SEQ ID No.1所示的CDR1、SEQ ID No.2所示的CDR2和SEQ ID No.3所示的CDR3；
[0010]所述轻链可变区包括SEQ ID No.4所示的CDR1、SEQ ID No.5所示的CDR2和SEQ ID No.6所示的CDR3。
[0011]本申请中，互补决定区(complementarity
‑
determining regions，CDR)位于抗体的可变区内，通过重链CDR与轻链CDR的相互配合，形成与抗原决定簇三维结构互补的表面，进而与抗原决定簇互补结合。抗体CDR的氨基酸序列决定了抗体对抗原的特异性和亲和性。具备本申请上述CDR序列的抗体可以特异性识别并结合第181位苏氨酸发生了磷酸化的Tau蛋白，而不与未磷酸化的Tau蛋白结合，从而实现对Tau蛋白pT181磷酸化的高效检测，灵敏度高，结果准确。
[0012]优选地，所述重链可变区包括SEQ ID No.7所示的氨基酸序列。
[0013]优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.8所示的氨基酸序列。
[0014]优选地，所述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区。
[0015]优选地，所述重链恒定区包括SEQ ID No.9所示的氨基酸序列。
[0016]优选地，所述轻链恒定区包括SEQ ID No.10所示的氨基酸序列。
[0017]优选地，所述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体的重链包括SEQ ID No.11所示的氨基酸序列。
[0018]优选地，所述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体的轻链包括SEQ ID No.12所示的氨基酸序列。
[0019]第二方面，本申请提供一种核酸分子，采用如下技术方案：
[0020]一种核酸分子，所述核酸分子编码第一方面所述的识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体。
[0021]第三方面，本申请提供一种重组载体，采用如下技术方案：
[0022]一种重组载体，所述重组载体表达第一方面所述的识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体。
[0023]优选地，所述重组载体中含有至少一个拷贝的第二方面所述的核酸分子。
[0024]第四方面，本申请提供一种重组细胞，采用如下技术方案：
[0025]一种重组细胞，所述重组细胞表达第一方面所述的识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体。
[0026]优选地，所述重组细胞中含有至少一个拷贝的第三方面所述的重组载体。
[0027]第五方面，本申请提供上述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体的制备方法，采用如下技术方案：
[0028]一种识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体的制备方法，所述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体的制备方法包括：
[0029]构建重组载体，将所述重组载体导入细胞中，蛋白表达后进行纯化，得到所述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体。
[0030]第六方面，本申请提供第一方面所述的识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体和/或第四方面所述的重组细胞在制备Tau蛋白pT181磷酸化检测产品中的应用。
[0031]第七方面，本申请提供一种Tau蛋白pT181磷酸化检测试剂盒，采用如下技术方案：
[0032]一种Tau蛋白pT181磷酸化检测试剂盒，所述Tau蛋白pT181磷酸化检测试剂盒包括第一方面所述的识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体。
[0033]本申请中，上述Tau蛋白pT181磷酸化检测试剂盒可以对临床样本中的Tau蛋白的
第181位苏氨酸是否发生了磷酸化进行高效检测，结果准确，灵敏度高，使用方便。
[0034]综上所述，本申请具有以下有益效果：
[0035]1.本申请中的识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体仅特异性识别并结合发生了pT181磷酸化的Tau蛋白，不与未发生pT181磷酸化的Tau蛋白结合，从而保证了检测结果的准确性，可以对Tau蛋白第181位苏氨酸是否发生了磷酸化进行高效率、高准确性检测。
[0036]2.本申请中的识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体具有更高的灵敏度，与抗原的亲和力也更强，检测限低至50pg/mL，对发生了pT181磷酸化的Tau多肽的EL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体，其特征在于，所述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包括SEQ ID No.1所示的CDR1、SEQ ID No.2所示的CDR2和SEQ ID No.3所示的CDR3；所述轻链可变区包括SEQ ID No.4所示的CDR1、SEQ ID No.5所示的CDR2和SEQ ID No.6所示的CDR3。2.根据权利要求1所述的识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区包括SEQ ID No.7所示的氨基酸序列；优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.8所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体，其特征在于，所述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区；优选地，所述重链恒定区包括SEQ ID No.9所示的氨基酸序列；优选地，所述轻链恒定区包括SEQ ID No.10所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1~3任一项所述的识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体，其特征在于，所述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体的重链包括SEQ ID No.11所示的氨基酸序列；优选地，所述识别Tau蛋白pT181磷酸化的单克隆抗体的轻链包括SEQ ID No.1...

【专利技术属性】
技术研发人员：伍波，周志伟，尹美移，沈晨光，蒋宇珊，董晓宁，吴智广，李超辉，
申请(专利权)人：天津鸿宇泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：