一种用于预防蜱虫病的mRNA疫苗及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种用于预防蜱虫病的mRNA疫苗及其制备方法与应用，涉及核酸疫苗技术领域。本发明专利技术的mRNA分子至少含有编码SFTSV病毒的抗原性多肽、免疫原性片段或变体的序列，所述抗原性多肽、免疫原性片段或变体包括SFTSV包膜表面糖蛋白Gn或蛋白的片段。本发明专利技术提供的mRNA分子递送至体内后能够在机体内表达Gn蛋白或Gn蛋白的一个片段，有效触发机体的免疫反应，可用于制备预防蜱虫病的mRNA疫苗。可用于制备预防蜱虫病的mRNA疫苗。可用于制备预防蜱虫病的mRNA疫苗。

【技术实现步骤摘要】
No.1所示氨基酸序列具有至少90％以上的同一性且功能相同的序列。
[0010]本专利技术的mRNA编码发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV)主要抗原Gn蛋白或Gn蛋白的一个片段(例如蛋白的受体结合结构域)。
[0011]具体地，SEQ ID No.1所示的为Gn蛋白全长氨基酸序列。所述抗原性多肽或免疫原性片段的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示氨基酸序列具有例如但不限于90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％同一性。Gn蛋白的片段可以为但不限于为蛋白的亚基、功能区域或提供稳定抗原功能的片段。本专利技术mRNA递送至体内后能够在机体内表达Gn蛋白或Gn蛋白的一个片段，有效触发机体对SFTSV病毒的免疫反应。
[0012]在一个实施方案中，所述mRNA分子编码区对应的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，或与SEQ ID No.3所示核苷酸序列具有至少90％以上的同一性且功能相同的序列。本专利技术不仅涉及所述mRNA分子，还保护编码所述mRNA的DNA分子。
[0013]具体地，所述mRNA分子编码区对应的核苷酸序列与SEQ ID No.3所示核苷酸序列具有90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％同一性。
[0014]在本专利技术中，对于所述SFTSV病毒的抗原性多肽编码序列进行了密码子优化，优化后的的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。本专利技术将编码Gn蛋白抗原性多肽或其免疫原性片段序列的开放阅读框(ORF)进行了密码子优化，所得到的特异性DNA分子可用于转录制备mRNA疫苗，引起人体或其他动物(优选地，所述动物为哺乳动物，例如小鼠或大鼠)对SFTSV病毒的免疫应答。通过优化编码蛋白的mRNA序列，能够实现取得更换的免疫原性和稳定性，提升了转染效率。
[0015]在一个实施方案中，本专利技术还涵盖与SEQ ID No.3所示核酸分子或其编码蛋白相关的生物材料，例如所述生物材料包括但不限于以下任一种：
[0016](a)SEQ ID No.3所示核酸分子或其变体；
[0017](b)含有SEQ ID No.3所述核酸分子的表达盒；
[0018](c)含有SEQ ID No.3所述核酸分子的重组载体，或含有所述表达盒的重组载体；
[0019](d)含有SEQ ID No.3所述核酸分子的重组质粒，或含有所述表达盒的重组质粒；
[0020](e)含有SEQ ID No.3所述核酸分子的重组微生物，或含有所述表达盒的重组微生物，或含有所述重组载体的重组微生物。
[0021]在一个实施方案中，所述mRNA分子还包括5
’‑
帽结构、3
’‑
端聚腺苷酸序列(PolyA)、5
’‑
UTR和3
’‑
UTR中的至少一种。所述mRNA按照从5
’
到3
’
的方向可以依次包括：5
’‑
帽结构、5
’
UTR序列、编码的所述Gn蛋白的序列、3
’
UTR序列和多聚腺苷酸序列。
[0022]在一个实施方案中，所述5
’‑
帽结构包括
m
7G(5)
ppp
(5)(2
’
OMeA)
p
G、
m
7G(5)
ppp
(5)(2
’
OMeG)
p
G、
m
7(3
’
OMeG)(5
’
)
ppp
(5
’
)(2
’
OMeG)
p
G或
m
7(3
’
OMeG)(5
’
)
ppp
(5
’
)(2
’
OMeA)
p
G中的一种；更优选的，所述5
’‑
帽结构为
m
7G(5
’
)
ppp
(5
’
)(2
’
OMeA)
p
G。
[0023]在一个实施方案中，所述5
’
UTR元件选取人α珠蛋白(humanα
‑
globin)mRNA的5
’
UTR，并且将起始密码子ATG的原始背景序列(ACCATG)替换为Kozak保守序列(GCCACCATG)，序列如SEQ ID No.4所示序列所对应的RNA序列，或其同源物、片段或变体；
[0024]在一个实施方案中，所述3
’
UTR元件选自人血红蛋白亚基α1(HBA1)的mRNA 3
’
UTR，如SEQ ID No.5所示的核酸序列所对应的RNA序列，或其同源物、片段或变体。
[0025]在一个实施方案中，所述3
’‑
端聚腺苷酸序列包含约25至约200个腺苷酸的序列，优选75至150个腺苷酸的序列；例如约80个核苷酸，约90个核苷酸，约100个核苷酸，约110个核苷酸，约120个核苷酸，约130个核苷酸，约140个核苷酸或约150个核苷酸。在一些实施方案中，所述poly A尾的长度可以为约120个核苷酸。
[0026]在一个优选的实施方案中，所述3
’‑
端聚腺苷酸序列中间含有2段间隔序列GCAUAU将整个聚腺苷酸序列分成3段；更优选的，所述3
’‑
端聚腺苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
[0027]在一个实施方案中，所述mRNA分子包含至少一种化学修饰核苷酸，所述化学修饰核苷酸选自假尿嘧啶、N1
‑
甲基尿嘧啶。
[0028]在一个优选的实施方案中，所述mRNA分子中的尿嘧啶全部为N1
‑
甲基尿嘧啶。
[0029]在本专利技术的优选方案中，所述mRNA的编码区核苷酸序列中的尿嘧啶经过化学修饰，优选为N1
‑
甲基假尿嘧啶修饰。修饰的核苷酸位于编码区、5
’‑
UTR区、3
’‑
UTR区和帽子区中至少一种。5
’
端非翻译区(5
’‑
UTR)、3
’
端非编码区(3
’‑
UTR)和多聚腺苷酸(polyA)使得最终合成的mRNA保持完整结构，有利于其稳定性，延长其半衰期并提高mRNA的表达能力。
[0030]在另一个方面，本专利技术提供了一种预防蜱虫病的mRNA疫苗，所述疫苗包括前述的mRNA分子以及药学上可接受的递送载体；优选地，所述递送载体包括脂质纳米颗粒，优选为阳离子脂质纳米颗粒。
[0031]在一个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种mRNA分子，其特征在于，所述mRNA分子至少含有编码SFTSV病毒的抗原性多肽、免疫原性片段或变体的序列，所述抗原性多肽、免疫原性片段或变体包括SFTSV包膜表面糖蛋白Gn或Gn蛋白的部分片段；所述抗原性多肽或免疫原性片段的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或与SEQ ID No.1所示氨基酸序列具有至少90％以上的同源性且功能相同的序列。2.根据权利要求1所述的mRNA分子，其特征在于，所述mRNA分子编码区对应的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，或与SEQ ID No.3所示核苷酸序列具有至少90％以上的同源性且功能相同的序列。3.根据权利要求2所述的mRNA分子，其特征在于，所述mRNA分子还包括5'
‑
帽结构、3
’‑
端聚腺苷酸序列、5
’‑
UTR和3
’‑
UTR中的至少一种。4.根据权利要求3所述的mRNA分子，其特征在于，所述5
’‑
帽结构包括
m
7G(5)
ppp
(5)(2
’
OMeA)
p
G、
m
7G(5)
ppp
(5)(2
’
OMeG)
p
G、
m
7(3
’
OMeG)(5
’
)
ppp
(5
’
)(2
’
OMeG)
p
G或
m
7(3
’
OMeG)(5
’
)
ppp
(5
’
)(2
’
OMeA)
p
G中的一种；更优选的，所述5
’‑
帽结构为
m
7G(5
’
)
ppp
(5
’
)(2
’
OMeA)
p
G；进一步地，所述5
’
UTR元件选自SEQ ID No.4所示的核酸序列所对应的RNA序列，或其同源物、片段或变体；进一步地，所述3
’
UTR元件选自SEQ ID No.5所示的核酸序列所对应的RNA序列，或其同源物、片段或变体；进一步地，所述3
’‑
端聚腺苷酸序列包含约25至约200个腺苷酸的序列，优选75至150个腺苷酸的序...

【专利技术属性】
技术研发人员：严孝金，段清堂，王云学，
申请(专利权)人：云南沃森生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：