一种海洋源黄色钱培元菌及其在制备抑菌药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种海洋源黄色钱培元菌及其在制备抑菌药物中的应用，所提供的海洋源黄色钱培元菌ZPJ261株的保藏编号为CCTCC NO：M20221545。本发明专利技术通过培养条件优化、体外抑菌活性检测、密度感应淬灭活性检测，获得了可以有效抑制多种病原菌的海洋源菌株ZPJ261。通过对其活性产物进行分离鉴定，该活性产物为蛋白，根据质谱结果以及序列分析和比对，显示这个活性蛋白为酰基转移酶。本发明专利技术的菌株能够高效的表达抑制多种病原菌生长和毒力因子表达、并显著降低病原菌致病性的活性代谢产物。并显著降低病原菌致病性的活性代谢产物。并显著降低病原菌致病性的活性代谢产物。

【技术实现步骤摘要】
一种海洋源黄色钱培元菌及其在制备抑菌药物中的应用


[0001]本专利技术属于海洋源益生菌筛选应用
，具体涉及一种海洋源黄色钱培元菌及其在制备抑菌药物中的应用。

技术介绍

[0002]致病菌或条件致病菌导致的细菌感染可造成动物多病原混合感染或继发感染，严重者可导致脓毒症、败血症等。目前主要的致病菌包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、链球菌等。由上述的致病细菌引起的疾病发病率和死亡率较高，在水产或畜牧养殖中导致严重的经济损失。
[0003]目前抗生素是临床预防和治疗动物细菌性疾病的主要方法，但随着我国畜牧业产值每年以10％以上的速度递增，抗生素的过度使用和误用增加了耐药菌的蔓延，导致了严重的多重耐药菌株甚至极端耐药细菌的出现和扩散；同时也带来了动物性产品的药物残留超标、环境污染等严重问题，严重威胁和危害食品安全、人类健康和社会公共卫生。因此，开展抗生素替代品的相关研究、并开发新型环境友好型抗菌产品日益重要。
[0004]密度感应(quorum sensing,QS)是一种微生物之间，依赖于群体密度的基因调控系统。细菌在生长过程中会合成一类小分子自诱导物(AIs)并释放至周围环境中，当细菌密度达到阈值浓度后，AIs就会与受体蛋白结合，触发信号传导通路来调控细胞群体行为，从而适应外界环境的变化。目前主要的自诱导物主要有革兰氏阴性细菌的N
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酰基高丝氨酸内酯(AHL)，革兰氏阳性细菌的寡肽分子以及在革兰氏阴性和阳性细菌普遍存在的AI
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2分子。
[0005]研究表明密度感应系统和致病菌的致病性密切相关，如铜绿假单胞菌的密度感应系统能调控该菌生物膜的形成，同时也参与调节绿脓菌素、蛋白酶等的合成，已经成为研究QS系统的首选模式菌；大肠杆菌O157:H7的密度感应系统可以调控毒力因子EspD、黏附素的表达，对鞭毛基因、生物被膜形成也有调控作用；哈维氏弧菌具有三套平行的QS系统，三套系统共同协同调控Ⅲ型分泌系统、生物发光、金属蛋白酶和胞外多糖等基因的转录和表达。动物模型侵染实验表明铜绿假单胞菌、哈维氏弧菌等致病菌的密度感应系统缺失突变株的致病性大大降低。因此，通过干扰或者破坏致病菌的密度感应系统，可以作为探求新的细菌防控策略的切入点。
[0006]目前，为了有效应对细菌耐药性严重这一现状，多采用开发新型抗生素的方法，但新型抗生素的研发周期长，且由于抗生素给细菌带来的选择压力，新型抗生素的使用也会使细菌逐渐产生耐药性、导致治疗失败，因此新型的绿色、可持续、生态友好型的抗菌方案极具优势和开发价值。密度感应淬灭(quorum quenching,QQ)是通过降解信号分子而干扰致病菌的QS，从而特异性地阻断致病菌毒力基因的表达，使其致病性降低甚至丧失。由于QS并不是细菌生存所必需的，因此，以QS为靶点的QQ酶解方法既可以在不杀死致病菌的情况下大大降低其毒力，又能够降低对细菌产生的选择性压力，理论上不会导致细菌产生耐药，有助于维护自然环境中的微生物生态平衡，是新型的抗菌方法。
[0007]海洋在漫长的演化过程中，海洋微生物形成了独特和多样的机制来适应高压、黑
暗、高盐、低温和寡营养等严酷的生存环境，海洋源微生物也进化出基因型、代谢途径和生理生态功能的多样性。在已分离确定具有QQ活性的菌株中，许多来源于海洋环境，已有超过30种的海洋细菌检测到具有QQ活性，它们分别属于α变形菌纲、γ变形菌纲、放线菌门、黄杆菌科和厚壁菌门。因此，QQ活性可能是海洋细菌普遍具有的一种能力，这可能与其环境适应力密切相关，而海洋源菌株成为开发新型海洋来源药物的重要且理想对象。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是提供一种海洋源黄色钱培元菌及其在制备抑菌药物中的应用，该菌株及其代谢产物可用于制备防治细菌性疾病相关的药物制品。
[0009]本专利技术首先提供一种海洋源黄色钱培元菌ZPJ261株(Qipengyuania flava)，菌株保藏于武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M 20221545；保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏日期为2022年10月7日。
[0010]所提供的海洋源黄色钱培元菌ZPJ261株，其16S rRNA的序列为SEQ ID NO:1。
[0011]本专利技术提供海洋源黄色钱培元菌ZPJ261株的一种用途，是在抑制致病菌中的应用。
[0012]本专利技术还提供所述的黄色钱培元菌ZPJ261株的另一种用途，是在制备抗菌制品中的应用；
[0013]本专利技术再一个方面还提供一种抗菌制品，所述的制品中包含有所述的黄色钱培元菌ZPJ261株的活菌和/或其代谢产物。
[0014]所述的代谢产物，为细菌密度感应淬灭分子；
[0015]作为实施例的一种具体记载，所述的细菌密度感应淬灭分子为酰基转移酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2。
[0016]本专利技术另一个方面还提供一种抑制病原菌生长的方法，是使用所述的海洋源黄色钱培元菌ZPJ261株作为拮抗菌来抑制病原菌生长。
[0017]本专利技术通过培养条件优化、体外抑菌活性检测、密度感应淬灭活性检测，获得了可以有效抑制多种病原菌的海洋源菌株ZPJ261。通过对其活性产物进行分离鉴定，该活性产物为蛋白，根据质谱结果以及序列分析和比对，显示这个活性蛋白为酰基转移酶。本专利技术的菌株能够高效的表达抑制多种病原菌生长和毒力因子表达、并显著降低病原菌致病性的活性代谢产物。
附图说明
[0018]图1：菌株ZPJ261的革兰氏染色镜检图；
[0019]图2：菌株ZPJ261的系统发育树图；
[0020]图3：平板法检测菌株ZPJ261的QQ活性图；
[0021]图4：菌株ZPJ261不同培养时间的生物量与胞外蛋白量检测图；
[0022]图5：菌株ZPJ261不同培养时间的抑菌活性检测图；
[0023]图6：胞外产物经热处理后的QQ活性检测图；
[0024]图7：胞外产物经蛋白酶K消化后的QQ活性检测图；
[0025]图8：粗提蛋白的胶内活性检测图；
[0026]图9：菌株ZPJ261抑制绿脓杆菌生物被膜检测图；
[0027]图10：菌株ZPJ261体外抑制绿脓杆菌毒力因子检测图。
具体实施方式
[0028]本专利技术自黄海海域海底基质样品中分离、纯化得到一株海洋源细菌，经形态学和分子生物学对纯化后的菌株进行鉴定，确定该菌株属于黄色钱培元菌属菌株；并对在检测菌株的抑菌活性和QQ活性基础上，对该菌株发酵液中的活性代谢产物进行分离和鉴定。所筛选获得的菌株可以用来发酵生产可抑制病原菌生长和毒力因子表达的活性代谢产物。
[0029]下面对本专利技术中所涉及的术语解释如下：
[0030]1、QQ活性：即密度感应淬灭活性，是通过降解信号分子而干扰致病菌的QS，从而特异性地阻断致病菌毒力基因的表达，使其致病性降低甚至丧失。QQ活性物质主要有小分子阻抑物和QQ酶两类，而QQ酶可以通过酶解作用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黄色钱培元菌，其特征在于，所述的黄色钱培元菌的保藏编号为CCTCC NO：M 20221545。2.如权利要求1所述的黄色钱培元菌，其特征在于，所述的黄色钱培元菌的16S rRNA的序列为SEQ ID NO:1。3.权利要求1所述的黄色钱培元菌在抑制致病菌中的应用。4.权利要求1所述的黄色钱培元菌在制备抗菌制品中的应用。5.一种抗菌制品，其特征在于，所述的制品中包含有权利要求1所述的黄色钱培元菌的活菌和/或其代谢产物。6.如权利要求5所述的抗菌制品，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡秀磊，秦志华，张培军，张皓杰，单虎，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：