一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法技术

本发明专利技术涉及中药材质量检测技术领域，尤其是涉及一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法，该方法采用UPLC

【技术实现步骤摘要】
一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法


[0001]本专利技术涉及中药材质量检测
，尤其是涉及一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法。

技术介绍

[0002]甘草是豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的根或茎，是中国传统地道的中药材，最早记载于《神农本草经》。甘草味甘平，具有补脾益气、清热解毒以及祛痰止咳等功能活性。近年来，甘草提取物作为添加剂被广泛用于烟草、医药、食品、化妆品等行业，目前对其研究最多的是三萜皂苷类化合物、甘草黄酮、香豆素类、甘草多糖等活性成分，表现出抗氧化、抗肿瘤以及调节糖脂代谢等多种生物活性。
[0003]吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids，PAs)是菊科、紫草科、豆科、夹竹桃科和兰科等植物为了抵御昆虫及草食性动物采食、病原微生物侵袭而产生并积累的一类次生代谢产物。目前已从6000多种植物中鉴定出660多种不同结构的PAs及其氮氧化物(PANOs)。PAs一般由次碱(如千里光次碱，necine)和次酸(如千里光次酸，necic acid)2个基本部分组成，按次碱类型可分为倒千里光裂碱(retronecine)型、奥索千里光裂碱型(otonecine)型和阔叶千里光裂碱(platynecine)型。倒千里光裂碱型和奥索千里光裂碱型PAs在1、2位碳原子上形成双键，为不饱和型，阔叶千里光裂碱型PAs为饱和型。不饱和PAs根据酯化方式又可分为单酯、开链二酯或环状二酯三种类型。PAs在生物学和毒理学上是无活性的前毒素，但当其进入体内，不饱和PAs会被代谢形成烯丙醇酯结构的吡咯代谢物，并与各种亲核性的酶、蛋白质和DNA结合，表现出肝毒性、肺毒性、遗传毒性、致癌性和发育毒性等健康问题。由于PAs在不同类型食品中的广泛存在及其对人类健康的潜在风险，其食品安全问题已引起重视，但中药材以及其他食品原料性质差异较大，目前缺乏针对常用中药材中PAs含量的高效检测方法。因此，提供一种测定甘草中PAs的方法，能够同时精确测定甘草中的PAs含量，对深入了解甘草的安全性具有重要的意义。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法，该方法采用UPLC
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MS/MS测定甘草中兰蓟定(Echimidine，Em)及其N
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氧化物(EmN)、千里光碱(Jacobine，Jb)及其N
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氧化物(JbN)、野百合碱(Crotaline，Mc)及其N
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氧化物(McN)、倒千里光碱(Retrorsine，Re)及其N
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氧化物(ReN)、春千里光碱(Senecivernine，Sv)及其N
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氧化物(SvN)、千里光宁碱(Senecionine，Sc)及其N
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氧化物(ScN)、千里光菲灵碱(Seneciphylline，Sp)及其N
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氧化物(SpN)、欧天芥菜碱(Europine，Eu)及其N
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氧化物(EuN)、天芥菜碱(Heliotrine，Hn)及其N
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氧化物(HnN)、促黑激素(Intermedine，Im)、克氏千里光碱(Senkirkine，Sk)、芝麻菜叶千里光碱(Erucifoline，Er)和石松胺N
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氧化物(Lycopsamine N
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oxide，LaN)。本专利技术提供的检测方法能够为甘草的质量评价及安全评价提供技术支持。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0006]本专利技术提供一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法，包括以下步骤：
[0007](1)混合标准品的制备：将不同标准品溶解后混匀得到不同浓度的混合标准品；
[0008](2)待测样品的前处理：将前处理后的甘草溶于提取助剂中进行超声提取，离心后水浴得到待净化液；将待净化液上样于预处理的MCX固相萃取柱中，后处理得到待复溶样品；将待复溶样品溶解后过滤，得到待测样品；
[0009](3)标准曲线的绘制：将步骤(1)制备得到的不同浓度的混合标准品依次送入高效液相色谱和质谱进行任一标准品标准曲线的绘制；
[0010](4)待测样品检测：将步骤(2)制备得到的待测样品送入高效液相色谱和质谱进行分析，根据步骤(3)的标准曲线计算出甘草中吡咯里西啶生物碱的含量；
[0011]所述吡咯里西啶生物碱分别为兰蓟定、兰蓟定N
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氧化物、千里光碱、千里光碱N
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氧化物、野百合碱、野百合碱N
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氧化物、倒千里光碱、倒千里光碱N
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氧化物、春千里光碱、春千里光碱N
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氧化物、千里光宁碱、千里光宁碱N
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氧化物、千里光菲灵碱、千里光菲灵碱N
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氧化物、欧天芥菜碱、欧天芥菜碱N
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氧化物、天芥菜碱、天芥菜碱N
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氧化物、促黑激素、克氏千里光碱、芝麻菜叶千里光碱、石松胺N
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氧化物。
[0012]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(1)中，所述标准品选自兰蓟定、兰蓟定N
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氧化物、千里光碱、千里光碱N
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氧化物、野百合碱、野百合碱N
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氧化物、倒千里光碱、倒千里光碱N
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氧化物、春千里光碱、春千里光碱N
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氧化物、千里光宁碱、千里光宁碱N
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氧化物、千里光菲灵碱、千里光菲灵碱N
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氧化物、欧天芥菜碱、欧天芥菜碱N
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氧化物、天芥菜碱、天芥菜碱N
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氧化物、促黑激素、克氏千里光碱、芝麻菜叶千里光碱和石松胺N
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氧化物中的一种。
[0013]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(1)中，混合标准品的浓度为0.1、0.5、1.0、5.0、10.0和20.0ng/mL。
[0014]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，所述前处理为将甘草使用60目筛进行过筛处理；
[0015]步骤(2)中，所述提取助剂为95％甲醇水溶液、乙醇和50％甲醇水溶液。
[0016]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，超声提取过程中，超声时间为20min。
[0017]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，离心过程中，离心转速为6000r/min，离心时间为10min。
[0018]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，水浴过程中，水浴温度为40℃，水浴时间为10
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20min。
[0019]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，预处理的MCX固相萃取柱为依次经甲醇和超纯水活化的MCX固相萃取柱。
[0020]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，所述后处理为利用超纯水和甲醇淋洗，弃废液后，用5％氨水甲醇溶液洗脱，然后本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)混合标准品的制备：将不同标准品溶解后混匀得到不同浓度的混合标准品；(2)待测样品的前处理：将前处理后的甘草溶于提取助剂中进行超声提取，离心后水浴得到待净化液；将待净化液上样于预处理的MCX固相萃取柱中，后处理得到待复溶样品；将待复溶样品溶解后过滤，得到待测样品；(3)标准曲线的绘制：将步骤(1)制备得到的不同浓度的混合标准品依次送入高效液相色谱和质谱进行任一标准品标准曲线的绘制；(4)待测样品检测：将步骤(2)制备得到的待测样品送入高效液相色谱和质谱进行分析，根据步骤(3)的标准曲线计算出甘草中吡咯里西啶生物碱的含量；步骤(1)中，所述标准品选自兰蓟定、兰蓟定N
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氧化物、千里光碱、千里光碱N
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氧化物、野百合碱、野百合碱N
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氧化物、倒千里光碱、倒千里光碱N
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氧化物、春千里光碱、春千里光碱N
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氧化物、千里光宁碱、千里光宁碱N
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氧化物、千里光菲灵碱、千里光菲灵碱N
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氧化物、欧天芥菜碱、欧天芥菜碱N
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氧化物、天芥菜碱、天芥菜碱N
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氧化物、促黑激素、克氏千里光碱、芝麻菜叶千里光碱和石松胺N
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氧化物中的一种；所述吡咯里西啶生物碱分别为兰蓟定、兰蓟定N
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氧化物、千里光碱、千里光碱N
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氧化物、野百合碱、野百合碱N
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氧化物、倒千里光碱、倒千里光碱N
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氧化物、春千里光碱、春千里光碱N
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氧化物、千里光宁碱、千里光宁碱N
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氧化物、千里光菲灵碱、千里光菲灵碱N
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氧化物、欧天芥菜碱、欧天芥菜碱N
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氧化物、天芥菜碱、天芥菜碱N
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氧化物、促黑激素、克氏千里光碱、芝麻菜叶千里光碱、石松胺N
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氧化物。2.根据权利要求1所述的一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法，其特征在于，步骤(1)中，混合标准品的浓度为0.1、0.5、1.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾连中，陆智，李亚杰，夏永军，宋馨，杨昳津，王光强，熊智强，
申请(专利权)人：无限极中国有限公司，
类型：发明
国别省市：