本发明专利技术属于产绿链霉菌孢子培养技术领域，具体公开了一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法，通过在阿维拉霉素的固体斜面培养基中增加骨料物，可改善斜面的软硬度，优化了孢子的生长环境，提高了孢子质量，从而稳定了孢子的保藏效果，进而稳定了种瓶的质量，稳定了发酵瓶效价；还可以延长产绿链霉菌孢子的保藏期限。还可以延长产绿链霉菌孢子的保藏期限。还可以延长产绿链霉菌孢子的保藏期限。
【技术实现步骤摘要】
一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法
[0001]本专利技术涉及产绿链霉菌孢子培养
，特别是一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法。
技术介绍
[0002]阿维拉霉素(Avilamycin)又名卑霉素、阿维霉素，属寡糖类抗生素，是一种使用效果卓越的动物专用抗生素。阿维拉霉素具有较高的安全性，在肠道中不吸收，在畜产品中无残留，排泄后(包括分解物)对环境安全；在畜禽饲料中添加使用时无需停药期。因使用效果卓越，阿维拉霉素已在世界上40多个国家和地区广泛使用。
[0003]目前阿维拉霉素正处于国外技术垄断阶段，国内企业对于阿维拉菌种的研究处于开发阶段，尚未实现工业化生产。
[0004]目前在提高阿维拉霉素菌种能力方面主要是通过常规的菌种选育，而菌种质量的表达被忽视，优良的孢子质量是提高菌种能力的基础保证。目前阿维拉霉素孢子斜面生长状态不丰满，孢子量低，主要原因是斜面培养基软，从而湿度大，产孢困难。斜面软的原因是孢子固体培养基使用氯化钙，它和磷酸盐之间发生反应，导致斜面培养基的硬度低。单纯的提高琼脂加量，可以缓解一点，但是不能彻底解决孢子斜面的生长状态问题，导致后续的种子生长慢，发酵瓶效价不稳定，菌种砂土保藏也非常容易退化死亡，半年的时间砂土菌量就会明显降低。所以孢子质量是直接导致阿维拉霉素的菌种不稳定，不能投入大生产的主要原因之一。因此优化孢子生长的固体培养基，改善孢子的生长环境，提升孢子质量和砂土保藏的稳定性，是投入生产的根本保证。
技术实现思路
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法，在斜面培养基中加入骨料物，使孢子斜面培养基的软硬度得到很好的控制，改善孢子的生长环镜，从而提高了产绿链霉菌孢子质量和保藏期限。
[0006]为达到上述目的，本专利技术是按照以下技术方案实施的：
[0007]一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法，包括以下步骤：
[0008]S1、称量斜面培养基原材料：所述斜面培养基由以下组分组成：玉米淀粉15.0g/L，骨料物7
‑
12g/L，KNO
3 1.0g/L，K2HPO
4 0.5g/L，MgSO
4 0.5g/L，NaCl20.5g/L，CaCl
2 2.0g/L，琼脂20g/L；
[0009]S2、将玉米淀粉和骨料物混合后用80℃以上热水糊化得到糊化料液，斜面培养基原材料中的其他组分混合后直接加水溶解成盐溶液；
[0010]S3、糊化料液冷却至室温后和盐溶液混合，定容，边搅动边分装至30x200mm的大试管中每管装量20mL，或分装至250mL茄瓶中每瓶装量50mL；
[0011]S4、进行高压蒸汽灭菌，灭菌完成后直接摇匀铺成30
°
的斜面，凝固后空培2天，形成斜面培养基，所述斜面培养基的标准总糖含量控制在1.0
‑
2.0g/100mL，氮含量控制在10
‑
20mg/100mL，磷含量控制在40
‑
60ppm；
[0012]S5、在斜面培养基上接种阿维拉霉素菌种产绿链霉菌砂土，置于28
±
1℃的环境培养7
‑
10天至阿维拉霉素孢子成熟。
[0013]进一步地，所述步骤S4中，斜面凝固后，骨料物沉淀到斜面0.5mm以下的区域。
[0014]进一步地，所述骨料物为小麦粒碎块、大麦粒碎块、玉米粒碎块、细小玻璃珠和磁珠中的一种。
[0015]进一步地，所述小麦粒碎块、大麦粒碎块、玉米粒碎块的细度大小为20目
‑
40目，细小玻璃珠和磁珠的细度小于20目。
[0016]进一步地，所述步骤S5中，使用接种针挖取产绿链霉菌86#砂土孢子5mg接种到茄瓶内的斜面培养基上，或挖取产绿链霉菌86#砂土孢子2mg接种到大试管的斜面培养基上。
[0017]与现有技术相比，本专利技术通过在阿维拉霉素的固体斜面培养基中增加骨料物，可改善斜面的软硬度，优化了孢子的生长环境，提高了孢子质量，从而稳定了孢子的保藏效果，进而稳定了种瓶的质量，稳定了发酵瓶效价；还可以延长产绿链霉菌孢子的保藏期限。
附图说明
[0018]图1为本专利技术的流程图。
具体实施方式
[0019]为使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例和附图1，对本专利技术进行进一步的详细说明。此处所描述的具体实施例仅用于解释本专利技术，并不用于限定专利技术。
[0020]实施例1
[0021](a)挑选颗粒饱满的小麦粒，使用料理机进行破碎，先过20目筛，筛下物再过40目筛，要筛上物即得到合适粒度的小麦骨料物；
[0022](b)称量原材料，斜面培养基成分为(g/L)：玉米淀粉15.0g，小麦骨料物7g，KNO
3 1.0g，K2HPO
4 0.5g，MgSO
4 0.5g，NaCl
2 0.5g，CaCl
2 2.0g，琼脂20g，淀粉和骨料物称量到一起，盐类称到一起；
[0023](c)淀粉和骨料物进行80℃以上热水糊化，盐类直接加水溶解成溶液；
[0024](d)糊化料液冷却至室温和盐溶液混合，定容，边搅动边分装至30x200mm的大试管中每管装量20mL或分装至250mL茄瓶中每瓶装量50mL；
[0025](e)进行高压蒸汽灭菌，灭菌完成后直接摇匀铺成30
°
的斜面，凝固后空培2天；
[0026](f)接种阿维拉霉素菌种产绿链霉菌砂土，置于28
±
1℃的环境培养，8天至孢子成熟。
[0027](g)培养成熟后用稀释梯度法进行孢子计数，结果为112亿/茄瓶，23.8亿/大试管，而同时培养的对照茄瓶和大试管斜面分别为30亿和8亿。
[0028](h)培养成熟后使用接种铲刮取铲出整个斜面上的菌苔称重，结果为1.23g/茄瓶，0.226g/大试管，而同时培养的对照茄瓶和大试管斜面分别为0.23g和0.07g。
[0029]实施例2
[0030](a)挑选颗粒饱满的玉米粒，使用脱皮机脱去外皮，使用料理机进行破碎，先过20
目筛，筛下物再过40目筛，要筛上物即合适粒度的玉米骨料物；
[0031](b)称量原材料，斜面培养基成分为(g/L)：玉米淀粉15.0g，玉米骨料物7g，KNO
3 1.0g，K2HPO
4 0.5g，MgSO
4 0.5g，NaCl
2 0.5g，CaCl
2 2.0g，琼脂20g，淀粉和骨料物称量到一起，盐类称到一起；
[0032](c)淀粉和骨料物进行80℃以上热水糊化，盐类直接加水溶解成溶液；
[0033](d)糊化料液冷却至室温和盐溶液混合，定容，边搅动边分装至30x200mm的大试管中每管装量20mL或分装至250mL茄瓶中每瓶装量50mL；
[0034](e)进行高压蒸汽灭菌，灭菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种提高阿维拉霉素孢子质量的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、称量斜面培养基原材料：所述斜面培养基由以下组分组成：玉米淀粉15.0g/L，骨料物7
‑
12g/L，KNO
3 1.0g/L，K2HPO
4 0.5g/L，MgSO
4 0.5g/L，NaCl20.5g/L，CaCl
2 2.0g/L，琼脂20g/L；S2、将玉米淀粉和骨料物混合后用80℃以上热水糊化得到糊化料液，斜面培养基原材料中的其他组分混合后直接加水溶解成盐溶液；S3、糊化料液冷却至室温后和盐溶液混合，定容，边搅动边分装至30x200mm的大试管中每管装量20mL，或分装至250mL茄瓶中每瓶装量50mL；S4、进行高压蒸汽灭菌，灭菌完成后直接摇匀铺成30
°
的斜面，凝固后空培2天，形成斜面培养基，所述斜面培养基的标准总糖含量控制在1.0
‑
2.0g/100mL，氮含量控制在10
‑
20mg/1...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑万静，赵敏，王雪峰，徐珍，李猛，
申请(专利权)人：河北圣雪大成制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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