用于免疫细胞中衔接子的诱导型表达的系统技术方案

本发明专利技术提供了一种用于免疫细胞中衔接子的诱导型表达的系统，其包含a)诱导型基因表达系统，其包含I)第一核酸，其包含可操作地连接至第二核酸的诱导型启动子，II)所述第二核酸，其编码包含以下的衔接子i)第一(多)肽，其中所述第一(多)肽包含特异性结合抗原的抗原结合结构域，ii)第二(多)肽，其中所述第二(多)肽结合至嵌合抗原受体(CAR)的抗原结合结构域，b)第三核酸，其编码对所述衔接子的所述第二多肽具有特异性的所述CAR，其中所述CAR包含i)对所述衔接子的所述第二(多)肽具有特异性的所述抗原结合结构域，ii)跨膜结构域，iii)胞内信号转导结构域。基因表达系统可以是抗原激活的或药物诱导的。该系统可以是单细胞或双细胞方法。法。法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于免疫细胞中衔接子的诱导型表达的系统


[0001]本专利技术一般地涉及在免疫细胞上表达的嵌合抗原受体(CAR)领域，特别地涉及衔接子CAR(抗标签CAR)技术和相应标记的衔接子分子的调控表达的组合。

技术介绍

[0002]CAR免疫细胞(如CAR T细胞)的过继转移已在治疗血液系统恶性肿瘤方面取得显著成功。然而，缺乏对CAR免疫细胞功能的控制以及由此造成的患者过度炎症会导致严重的副作用，尤其是当靶向肿瘤相关抗原而非肿瘤特异性抗原时。因此，CAR活动的时间、可调谐和空间控制至关重要。
[0003]衔接子CAR免疫细胞(如衔接子CAR T细胞)基于靶抗原识别和激活结构域解离成两个互补部分，从而提供了增强CAR免疫细胞系统安全性和灵活性的进一步的策略。抗标签CAR免疫细胞不直接识别肿瘤抗原，但免疫细胞特异性地被赋予与抗原结合分子融合的标签，将其称为衔接子或衔接子分子。例如，在WO2012082841A2、WO2013044225A1和WO2016030414A1中描述了通过衔接子间接结合到靶细胞的这种“通用”CAR系统(或衔接子CAR(adCAR)系统)。抗原的识别严格取决于给予控制的衔接子分子的存在，以及通过减弱衔接子分子施用来暂时开启/关闭CAR介导的功能的可能性。此外，可以通过调整衔接子浓度来微调应答的程度。然而，由于功能性取决于衔接子分子的存在，患者接受衔接子分子的常规注射，这可能与副作用和患者的压力升高有关。此外，衔接子分子的符合GMP的集中生产、配制、储存和运输是时间和成本密集型的。限制衔接子CAR免疫细胞效力的最相关挑战是系统施用后衔接子分子在肿瘤中的组织渗透受限和异质分布。
[0004]Ambrose等开发了一种CAR
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CD19 T细胞，其组成型地分泌CD19
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抗Her2桥接蛋白。这种细胞治疗策略利用靶向CD19的CAR T细胞与正常B细胞上的CD19相互作用的能力来驱动扩增、持久性和适应性。分泌的桥接蛋白与Her2阳性肿瘤细胞有效结合，在体外和体内介导CAR
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CD19 T细胞的细胞毒性(Doi:10.1101/2020.03.25.007658)。
[0005]WO2017075537A1公开了一种细胞，其包含编码融合蛋白的组成型表达构建体，所述融合蛋白包含(a)结合肿瘤抗原的抗原结合蛋白或片段；和(b)细胞治疗、抗体或抗体药物缀合物的多肽靶点。
[0006]WO2018156802A1公开了一种细胞，其包含编码融合蛋白的组成型表达构建体，所述融合蛋白包含(a)结合肿瘤抗原的抗原结合蛋白或片段；和(b)结合细胞治疗、抗体或抗体药物缀合物的抗原结合结构域的抗独特型抗体或片段或者抗独特型肽。
[0007]WO2019199689A1中，公开了包含单一病毒载体的工程化免疫细胞，所述单一病毒载体包含第一多核苷酸，所述第一多核苷酸包含与编码至少一种转基因(例如，CAR)的核酸可操作地连接的组成型启动子；和第二多核苷酸，所述第二多核苷酸包含可操作地连接至编码效应物的核酸的诱导型启动子。
[0008]本领域需要改进的或可替代的衔接子CAR免疫细胞系统，其包含衔接子CAR和由免疫细胞表达的衔接子。

技术实现思路

[0009]为了克服与符合GMP的集中生产以及向患者局部递送和注射衔接子分子相关的限制，将向肿瘤传递的免疫细胞如CAR T细胞或肿瘤浸润性T细胞(TIL)，工程化为以诱导剂依赖的方式表达适合于衔接子CAR的衔接子，从而用作衔接子原位递送的载体。诱导型基因表达系统可以是“抗原激活的诱导型基因表达系统”，即，当抗原/配体通过细胞受体(如CAR或TCR)直接结合或在MHC呈递时，诱导型表达系统可以在具有所述诱导型基因表达系统的细胞中被激活。抗原/配体与受体的所述结合可在细胞内诱导信号级联，随后可导致诱导引入的基因(或转基因)(本文指衔接子)的表达。可替代地，诱导型基因表达系统可以是药物诱导型基因表达系统，即，当药物例如合成药物(如他莫昔芬)可被引入细胞时，可在具有所述诱导型基因表达系统的细胞中激活诱导型基因表达系统。细胞中的所述药物可与合成转录因子结合，并且随后可导致转基因(本文指衔接子)表达的诱导。两种类型的诱导型基因表达系统可用于单细胞和/或双细胞系统。虽然细胞载体对衔接子的组成型表达不允许调节衔接子表达，从而控制患者中的衔接子CAR细胞功能，但“载体细胞”对衔接子分子的药物依赖性表达控制允许衔接子分子分泌的时间和可调谐控制，使得例如：
[0010]I)通过将CAR细胞免疫活性限制于衔接子的时间控制分泌来控制CAR免疫细胞活性的开启和关闭
[0011]ii)精确调节肿瘤部位的衔接子浓度，从而微调CAR免疫细胞活性。
[0012]此外，在局部受限抗原的情况下，“抗原激活的诱导型基因表达系统”提供了优势：即衔接子分泌仅限于抗原表达的区域(例如，实体瘤)，因为激活诱导的信号转导依赖于同源抗原的T细胞接合(依赖于TCR/CD3通路的信号转导)，从而提供衔接子浓度的改进的空间调节。相反，衔接子的组成型表达可导致全身释放，从而增加不希望的全身毒性的风险。
附图说明
[0013]图1：衔接子分泌的激活诱导系统的示意图
[0014]用激活诱导型表达盒，即基因表达系统(称为激活诱导型细胞)修饰免疫细胞，由此响应TCR/CAR介导的信号传导的启动子驱动衔接子分子的表达。这些细胞可根据其对肿瘤抗原、癌病毒抗原或针对肿瘤新抗原的反应性进行选择。或者，可以用对任何上述抗原类别具有特异性的CAR或TCR转导T细胞。在TCR/CAR识别TAA、癌病毒或肿瘤新抗原后，TCR反应性启动子驱动抗肿瘤衔接子分子的表达。这些标记的衔接子分子对肿瘤抗原具有特异性。衔接子分子的标签部分(在这种情况下，例如：6xHis标签)被衔接子CAR(在这种情况下，抗His6特异性CAR)的胞外识别结构域识别，其由第二免疫细胞表达。标记的衔接子分子构成一个桥接分子，其将衔接子CAR细胞重定向到肿瘤。因此，肿瘤细胞被衔接子CAR细胞裂解。
[0015]图2：衔接子分泌的药物诱导系统的示意图
[0016]用药物诱导型基因表达盒(称为药物诱导型细胞)修饰免疫细胞。在“关”状态下，这些可诱导细胞无法与未修饰的免疫细胞区分开来。在药物作为诱导剂施用后，诱导型表达盒被激活，标记的衔接子分子由免疫细胞表达和分泌。分泌的标记的衔接子分子的浓度可以通过诱导剂药物浓度来调节。这些标记的衔接子分子对肿瘤抗原具有特异性。衔接子分子的标签部分(在这种情况下：6xHis标签)被衔接子CAR(在这种情况下：抗His6特异性CAR)的胞外识别结构域识别，其由第二免疫细胞表达。标记的衔接子分子构成一个桥接分
子，其将衔接子CAR细胞重定向到肿瘤。因此，肿瘤细胞被衔接子CAR细胞裂解。His
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衔接子CAR T细胞的抗肿瘤活性取决于His标记的肿瘤特异性衔接子分子的存在。在肿瘤部位诱导后诱导型抗CD19 Fab T细胞产生衔接子分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于免疫细胞中衔接子的诱导型表达的系统，其包含a)诱导型基因表达系统，其包含I)第一核酸，其包含可操作地连接至第二核酸的诱导型启动子II)所述第二核酸，其编码包含以下的衔接子i)第一(多)肽，其中所述第一(多)肽包含特异性结合抗原的抗原结合结构域，ii)第二(多)肽，其中所述第二(多)肽结合至嵌合抗原受体(CAR)的抗原结合结构域，b)第三核酸，其编码对所述衔接子的所述第二多肽具有特异性的所述CAR，其中所述CAR包含i)对所述衔接子的所述第二(多)肽具有特异性的所述抗原结合结构域ii)跨膜结构域iii)胞内信号转导结构域。2.根据权利要求1所述的系统，其中所述诱导型基因表达系统是抗原激活的诱导型基因表达系统，并且所述抗原激活的诱导型启动子是当具有所述诱导型基因表达系统的细胞被所述抗原激活时能够驱动所述衔接子的表达的抗原激活启动子。3.根据权利要求1所述的系统，其中所述诱导型基因表达系统是药物诱导型表达系统并且所述诱导型启动子是药物诱导型启动子，其中所述诱导型基因表达系统还包含编码用于所述药物诱导型启动子的合成转录因子的核酸，其中当向具有所述诱导型基因表达系统的细胞施用药物时，诱导所述基因表达系统并表达所述衔接子。4.根据权利要求3所述的系统，其中所述合成转录因子包含DNA结合结...

【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：美天施生物科技有限两合公司，
类型：发明
国别省市：