一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒及其制备方法。该检测试剂盒包括第一滤膜、第二滤膜、第一试剂和第二试剂。第一滤膜包括负载高铁氰化钾的离子交换纤维膜，第二滤膜包括负载核苷酸的离子交换纤维膜，第一试剂包括长链二元酸盐，第二试剂包括丙三醇。本发明专利技术通过添加特定的稳定剂组合物提高检测试剂的保存稳定性，通过特制的膜组合去除血红蛋白、样本中NADPH和NADH等物质，以消除测定干扰，通过加入长链二元酸、长链二元酸盐减轻谷胱甘肽还原酶多聚体的影响，提高检测试剂盒的测定结果的准确性。果的准确性。

【技术实现步骤摘要】
一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及临床医学参数检测
，具体涉及一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]谷胱甘肽还原酶(GR)是人体氧化还原体系中较为重要的酶之一，是维持细胞中还原型谷胱甘肽(GSH)浓度的主要生物酶，在谷胱甘肽还原酶催化下，氧化型谷胱甘肽与还原型辅酶II(NADPH)反应，生成还原型谷胱甘肽，在防止血红蛋白的氧化分解、维持巯基蛋白的活性、保证巯基蛋白的还原性及细胞的完整性等方面具有重要的作用。
[0003]因此，血清中谷胱甘肽还原酶的活性具有重要临床价值。如在以下几个方面具有明显的指示作用：(1)判断早期肝脏损伤的指标，其中早期损伤可分为生理性损伤如运动导致和病理性损伤，如急性肝炎、药物性肝损、中毒性肝炎、肝癌、肝硬化早期等；(2)血清谷胱甘肽还原酶活性明显升高时可用于指示原发性肝细胞癌和广泛转移性肝肿瘤；(3)在肝脏疾病治疗过程中，GR与丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶联合使用可以对肝脏受损状态进行动态监测；(4)恶性黄疸的鉴别诊断指标之一。
[0004]目前，测定谷胱甘肽还原酶活性的方法主要有Elisa法和紫外酶法。Elisa法需要手工操作，耗时较长，步骤繁琐，成本较高；紫外酶法步骤简单，成本较低，被广泛推广应用。紫外酶法的检测原理在于：谷胱甘肽还原酶(GR)催化氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，同时还原型辅酶(NADPH)被氧化成为辅酶(NADP+)。NADPH在波长340nm有特异吸收峰，其氧化的速率与血清中GR的活性成正比，在340nm处测定NADPH吸光度下降的速率，即可计算出谷胱甘肽还原酶的活性。
[0005]但现有的紫外酶法测定谷胱甘肽还原酶活性存在试剂稳定性差，抗血红蛋白等物质的干扰能力差，无法消除谷胱甘肽还原酶多聚体影响的问题，因此需要开发一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒及其制备方法，通过添加特定的稳定剂组合物提高检测试剂的保存稳定性，通过特制的膜组合去除血红蛋白、样本中NADPH和NADH等物质，以消除测定干扰，通过加入长链二元酸、长链二元酸盐减轻谷胱甘肽还原酶多聚体的影响。
[0007]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，所述检测试剂盒包括第一滤膜、第二滤膜、第一试剂和第二试剂；
[0009]所述第一滤膜包括负载高铁氰化钾的离子交换纤维膜；
[0010]所述第二滤膜包括负载核苷酸的离子交换纤维膜，所述核苷酸包括胸腺嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸中的一种或者两种；
[0011]所述第一试剂包括第一缓冲液、EDTA、氧化型谷胱甘肽、抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶、第一表面活性剂、第一抑菌剂、第一稳定剂、长链二元酸盐；
[0012]所述第二试剂包括第二缓冲液、NADPH、第二抑菌剂、第二表面活性剂、第二稳定剂、负载半胱氨酸的固体吸附剂、丙三醇。
[0013]优选地，所述第一滤膜由负载钾离子的阳离子交换纤维和负载铁氰根配离子的阴离子交换纤维组成。
[0014]优选地，所述第二滤膜由负载核苷酸的阴离子交换纤维组成。
[0015]优选地，所述第一稳定剂包括烷基糖苷、低聚海藻糖、乙酸镁中的一种或者两种。
[0016]优选地，所述长链二元酸盐包括八碳二元酸、九碳二元酸、十碳二元酸、十一碳二元酸的钠盐、钾盐中的至少一种。
[0017]优选地，所述负载半胱氨酸的固体吸附剂包括吸附半胱氨酸的中等极性吸附树脂。
[0018]第二方面，本专利技术提供一种如上所述谷胱甘肽还原酶检测试剂盒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
[0019]制备第一滤膜：将阳离子交换纤维和阴离子交换纤维按照一定的质量比混合、梳理，使阳离子交换纤维与阴离子交换纤维混合均匀，压成第一片状膜，然后使用超声焊接装置，将第一片状膜进一步压缩，并在超声振动的作用下使相邻纤维粘接，得到第一稳定滤膜，再使用高铁氰化钾溶液浸泡第一稳定滤膜一定时间，最后使用水洗涤，干燥，得到第一滤膜；
[0020]制备第二滤膜：将阴离子交换纤维梳理，压成第二片状膜，然后使用超声焊接装置，将第二片状膜进一步压缩，并在超声振动的作用下使相邻纤维粘接，得到第二稳定滤膜，再使用核苷酸的溶液浸泡第二稳定滤膜一定时间，最后使用水洗涤，干燥，得到第二滤膜；
[0021]配制第一试剂：根据需要配制第一试剂的体积，按照如下配比计算并称取配料，第一缓冲液100mmol/L－220mmol/L、EDTA5mmol/L－10mmol/L、氧化型谷胱甘肽10mmol/L－20mmol/L、抗坏血酸氧化酶2kU/L－8kU/L、胆红素氧化酶1kU/L－5kU/L、第一表面活性剂20mmol/L－36mmol/L，第一抑菌剂40mg/L－60mg/L，第一稳定剂20mmol/L－40mmol/L，长链二元酸盐15mg/L－60mg/L，溶解于相应体积的去离子水中，并用2mol/L～5mol/L的盐酸将pH值调节到7.0～7.3，得到第一试剂；
[0022]配制第二试剂：根据需要配制第二试剂的体积，按照如下配比计算并称取配料，第二缓冲液80mmol/L－130mmol/L，NADPH1mmol/L－3mmol/L，第二抑菌剂50－80mg/L，第二表面活性剂27mmol/L－30mmol/L，第二稳定剂30mmol/L－38mmol/L，负载半胱氨酸的固体吸附剂0.6g/L－1.5g/L，丙三醇2g/L－5g/L，溶解于相应体积的去离子水中，并用氢氧化钠将pH调节到9.3－9.8，得到第二试剂。
[0023]优选地，所述超声焊接装置的工作频率为40kHz－100kHz。
[0024]优选地，所述第一试剂和第二试剂配制时的搅拌速度为200转/分钟～340转/分钟。
[0025]相对于现有技术，本专利技术具有以下有益技术效果：
①
通过添加丙三醇，酶稳定剂(多糖类、烷基糖苷类等)，吸附还原物质的固体吸附剂等物质，提高检测试剂的储存稳定
性；
②
在检测试剂盒中增加离子交换纤维膜，消除血红蛋白、NADPH、NADH等的影响，提高检测准确性；
③
针对谷胱甘肽还原酶多聚体的影响：增加长链二元酸，和/或，长链二元酸盐(八碳、九碳、十碳、十一碳)，促进二聚体解聚。
具体实施方式
[0026]下面结合实施例对本专利技术的技术方案进行详细描述。
[0027]需说明的是，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合；并且，基于本公开中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本公开保护的范围。
[0028]需要说明的是，下文描述在所附权利要求书的范围内的实施例的各种方面。应显而易见，本文中所描述的方面本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括第一滤膜、第二滤膜、第一试剂和第二试剂；所述第一滤膜包括负载高铁氰化钾的离子交换纤维膜；所述第二滤膜包括负载核苷酸的离子交换纤维膜，所述核苷酸包括胸腺嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸中的一种或者两种；所述第一试剂包括第一缓冲液、EDTA、氧化型谷胱甘肽、抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶、第一表面活性剂、第一抑菌剂、第一稳定剂、长链二元酸盐；所述第二试剂包括第二缓冲液、NADPH、第二抑菌剂、第二表面活性剂、第二稳定剂、负载半胱氨酸的固体吸附剂、丙三醇。2.根据权利要求1所述的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，其特征在于，所述第一滤膜由负载钾离子的阳离子交换纤维和负载铁氰根配离子的阴离子交换纤维组成。3.根据权利要求1所述的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，其特征在于，所述第二滤膜由负载核苷酸的阴离子交换纤维组成。4.根据权利要求1所述的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，其特征在于，所述第一稳定剂包括烷基糖苷、低聚海藻糖、乙酸镁中的一种或者两种。5.根据权利要求1所述的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，其特征在于，所述长链二元酸盐包括八碳二元酸、九碳二元酸、十碳二元酸、十一碳二元酸的钠盐、钾盐中的至少一种。6.根据权利要求1所述的谷胱甘肽还原酶检测试剂盒，其特征在于，所述负载半胱氨酸的固体吸附剂包括吸附半胱氨酸的中等极性吸附树脂。7.一种如权利要求1
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6任一项所述谷胱甘肽还原酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：制备第一滤膜：将阳离子交换纤维和阴离子交换纤维按照一定的质量比混合、梳理，使阳离子交换纤维与阴离子交换纤维混合均匀，压成第一片状膜，然后使用超声焊接装置，将第一片状膜进一步压缩，并在超声振动的作用下使相邻纤维粘接，得到第一稳定滤膜，再使用高铁氰化钾溶液浸泡第一稳定滤膜一定时间，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王伊琳，王贤理，池万余，苗准，
申请(专利权)人：浙江伊利康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：