用于检测和治疗SARS-COV-2感染的组合物和方法技术

本文提供了包含SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测和治疗SARS
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COV
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2感染的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年5月14日提交的美国临时专利申请号63/024，615的权益，该临时专利申请全文明确地以引用方式并入本文。
[0003]关于美国联邦政府资助的研究或开发的声明
[0004]本专利技术是在美国国立卫生研究院授予的CA202763和CA262123的政府支持下完成的。美国政府拥有本专利技术的某些权利。

技术介绍

[0005]一种新型冠状病毒株于2019年底首次出现，随后开始在全球迅速传播[1]。这种名为COVID
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19的疾病持续在许多感染者中引起严重的肺炎样症状。此外，它在老年人中表现出更严重的病程和病死率。冠状病毒因其“冠状”外观而得名，是从动物传播到人类的一个大的病毒家族，除了COVID
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19外，还包括中东呼吸综合征(MERS)和SARS等疾病。虽然对该新型冠状病毒仍有许多未知，但已知该病毒可在出现任何症状之前通过人传人传播。病毒刺突(S)蛋白与人ACE2蛋白结合以进入[1,2]。这种S蛋白，特别是保守的ACE
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2受体结合结构域(RBD)，是疫苗设计的潜在靶点。针对S蛋白和RBD的抗体已被证明可使用冠状病毒的体外测定进行中和[3]，这表明可生产出有效的疫苗来预防SARS
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CoV
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2感染。
[0006]尽管目前的疫苗对年轻人有效，但老年人对许多疫苗应答不佳。由于免疫衰老会影响先天免疫和适应性免疫，老年人对疫苗的免疫应答减弱[13,14]。例如，每年有25万至50万65岁以上的老年患者死于流感相关并发症[15]。由于SARS
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CoV
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2病毒在老年人中造成的死亡率不成比例，开发在老年人群中具有更好功效的疫苗是一项紧迫的公共卫生需求。开发新的佐剂或现有佐剂的组合来增强免疫原性，同时保持可接受的安全性，是当前提高老年人群疫苗功效的策略之一。
[0007]有越来越多的物质作为佐剂被研究。然而，只有少数佐剂，诸如铝盐(明矾)、单磷酰脂质A(MPL)、MF59(水包油乳剂)和病毒体被FDA批准用于人类[16]。在获批准的佐剂中，MF59(可生物降解角鲨烯水乳剂)是专门为解决老年人流感疫苗功效低下的问题而开发的[17]。在老年患者中，含有MF59作为佐剂的Fluad流感疫苗(Novartis)比未含佐剂的三价灭活流感疫苗(TIV)的有效性提高了25％[18,19]。尽管有几项涉及老年患者的使用MPL或ASO3(水包油乳剂)的III期临床试验很有希望，但改善只是渐进的[15,20,21]。此外，许多TLR激动剂已显示出对老年人不如对年轻人有效，这主要是由于老年人的抗原呈递细胞的信号传导能力降低和TLR受体表达减少[22]。这与作为流感病毒疫苗佐剂的TLR9和CpG特别相关[23]。此外，老化的树突状细胞的吞噬和抗原交叉引发能力受损[24]。此外，通过GM
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CSF受体将抗原靶向APC可能增强交叉引发。具有可接受的安全性并产生Th1免疫应答的佐剂非常重要。明矾是第一种被批准用作佐剂的化合物，它引发Th2免疫应答而不是Th1免疫应答，并且在诱导强细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答方面无效[25,26]。已经研究了几种佐剂(明矾、MPL、CpG、Poly I:C和霍乱毒素)来增强流感VLP疫苗，但还没有一种被开发用于商业用途[27]。
[0008]许多研究记录了免疫应答的年龄依赖性下降定性和定量调节免疫细胞功能的机制。这些研究还提出了一些策略来规避和改善老年个体的免疫应答[28,29]。老年小鼠对流感感染应答产生较低水平的IgG，这可能是CD4 T辅助细胞应答受损的结果[29]。包括TNF
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α、IL
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1β和IL
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6在内的细胞因子组合已被证明可改善CD4 T细胞的应答，从而为老年小鼠的B细胞提供帮助。研究还表明，来自老年小鼠的树突状细胞的IL
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6依赖性活化减轻了免疫应答启动和老年T细胞存活的年龄相关的下降[29]。此外，树突状细胞/T细胞连接处的促炎细胞因子已被证明在诱导强免疫应答中起重要作用[29]。
[0009]有充分的证据表明，细胞因子通过吸引和激活关键的免疫细胞来提高疫苗的功效。正在评估其作为佐剂潜力的两种此类细胞因子是白细胞介素
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12(IL
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12)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM
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CSF)。IL
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12是一种异二聚体细胞因子(p35和p40亚基)，它激活树突状细胞(DC)、T淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞以释放IFN
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γ、TNF
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α等[30
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32]。IL
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12还向T辅助细胞前体发出强烈信号以分化为Th1谱系，这也促进了强CTL应答的发展[33]。为评估重组可溶性IL
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12作为佐剂在治疗几种癌症和病毒性肝炎中的潜力而进行的临床前和临床试验导致了增强的免疫应答[34
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38]，但也导致了不利的副作用和全身毒性[39,40]。然而，在一项由Metaclipse在小鼠中进行的综合毒理学研究中，甚至在5倍高的生物活性剂量下，IL
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12的膜锚定已被证明能防止这些不良副作用。
[0010]GM
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CSF主要通过树突状细胞的成熟和分化来增强强免疫应答[41
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44]。来自年轻人(<30岁)和老年人(>65岁)的血液单核细胞对GM
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CSF和IL
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4应答而分化为DC，并在用全灭活流感病毒刺激时产生类似量的炎性细胞因子诸如IL
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12和TNF
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α[45]，这表明老年人的DC在由细胞因子如GM
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CSF和IL
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4诱导时与年轻人的DC一样有效。FDA批准了Dendreon的前列腺癌疫苗该疫苗使用与GM
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CSF融合的单一抗原，并显示出能有效地将抗原递送到免疫系统[46,47]。在几项癌症疫苗开发研究中，GM
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CSF与单肽或多肽抗原的联合施用显示出相对于单独疫苗的细胞毒性T细胞免疫应答[48
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51]。尽管包括MF59在内的许多佐剂在提高流感疫苗功效方面是有效的，但由于反应原性和毒性，它们已知会诱导一些副作用[29]。
附图说明
[0011]图1.示出了病毒样颗粒(VLP)的产生的示意图，该病毒样颗粒包含：包含锚定到该VLP的SARS
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CoV
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2S1蛋白受体结合结构域(RBD)多肽和GM
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CSF多肽的GPI重组多肽，以及包含锚定到该VLP的IL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的重组多肽，所述重组多肽包含SARS
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CoV
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2S1蛋白结合结构域多肽和GM
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CSF多肽。2.根据权利要求1所述的重组多肽，其中所述SARS
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CoV
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2S1蛋白结合结构域多肽包含全长S1多肽。3.根据权利要求1或权利要求2所述的重组多肽，其中所述SARS
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CoV
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2S1蛋白结合结构域多肽包含SEQ ID NO:1。4.根据权利要求1或权利要求2所述的重组多肽，其中所述SARS
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CoV
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2S1蛋白结合结构域多肽包含与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性的序列。5.根据权利要求1或权利要求2所述的重组多肽，其中所述SARS
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CoV
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2S1蛋白结合结构域多肽包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7。6.根据权利要求1或权利要求2所述的重组多肽，其中所述SARS
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CoV
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2S1蛋白结合结构域多肽包含与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7具有至少80％同一性的序列。7.根据权利要求1至6中任一项所述的重组多肽，其中所述GM
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CSF多肽包含SEQ ID NO:2。8.根据权利要求1至6中任一项所述的重组多肽，其中所述GM
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CSF多肽与SEQ ID NO:2具有至少80％同一性。9.一种分离的重组多核苷酸，所述重组多核苷酸包含SARS
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CoV
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2S1蛋白受体结合结构域多核苷酸、GM
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CSF多核苷酸和GPI锚定信号多核苷酸。10.根据权利要求9所述的重组多核苷酸，其中所述SARS
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CoV
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2S1蛋白受体结合结构域多核苷酸和所述GM
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CSF多核苷酸有效连接。11.根据权利要求9所述的重组多核苷酸，其中所述SARS
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CoV
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2S1蛋白受体结合结构域多核苷酸包含全长S1多核苷酸。12.根据权利要求9所述的重组多核苷酸，其中所述重组多核苷酸包含SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:14。13.一种检测对受试者中SARS
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CoV
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2S1蛋白受体结合结构域特异的抗体的方法，所述方法包括从所述受试者获得血液样本，将所述样本与包含SARS
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CoV
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2S1蛋白受体结合结构域多肽和GM
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【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：埃默里大学，
类型：发明
国别省市：