一种基于串级质谱的唾液酸链接的鉴定和验证方法技术

本发明专利技术公开了一种基于串级质谱的唾液酸链接的鉴定和验证方法，包括如下步骤：制备完整N

【技术实现步骤摘要】
score，使得假阳性不大于1％，对阈值P score以下的靶向GPS Ms去重，获得含唾液酸完整N
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糖肽IDs；
[0016]S10、基于同位素轮廓指纹比对识别二级质谱中的N
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乙酰葡萄糖胺的特征氧鎓离子m/z 204、唾液酸特征氧鎓离子m/z 274和292以及甘露糖
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N
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乙酰葡萄糖胺二糖序列特征氧鎓离子m/z 366，随后进行综合打分，打分小于0.8的为α2,3链接，大于0.8的为α2,6链接。
[0017]进一步的，所述待解析生物样本为含有唾液酸化糖蛋白的样本。
[0018]进一步的，步骤S2中，在进行电喷雾电离和质谱分析之前，先对完整N
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糖肽样本进行分离。
[0019]进一步的，前体离子的实验分子组成指纹在一级质谱中被测得，碎片离子的实验分子组成指纹在二级质谱中被测得。
[0020]进一步的，理论分子组成指纹通过以下步骤生成：
[0021]根据所研究体系的理论分子库计算每一个分子的分子式；
[0022]参照标准元素列表，根据分子式中元素的种类和数量计算相应的分子组成指纹。
[0023]进一步的，步骤S3和S5中的匹配是指实验分子组成指纹中的每一个同位素峰的m/z值和相对峰强度数值与对应的理论值的一一比较。
[0024]进一步的，步骤S3和S5中的匹配的标准由同位素峰强度截止值、同位素峰质荷比最大允许误差和同位素峰强度最大允许误差进行控制。
[0025]进一步的，步骤S9中的去重按照多肽骨架氨基酸序列和修饰、糖基化位点以及N
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连接糖序列结构的标准。
[0026]本专利技术的有益效果是：
[0027]本专利技术的鉴定和验证方法在完整N
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糖肽、单糖序列和单糖三个分子水平上基于质谱分子组成和结构指纹来对唾液酸链接进行鉴定和确认，包括1)在完整N
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糖肽水平上，基于同位素轮廓比对鉴定包含唾液酸完整N
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糖肽的单糖组成；2)在单糖序列分子水平上，基于同位素轮廓指纹比对鉴定二级质谱中的碎片离子，并基于含唾液酸序列结构诊断碎片离子和唾液酸特征氧鎓离子对含唾液酸序列结构和唾液酸的存在进行确认；3)基于靶向
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诱饵库搜索对包含唾液酸序列结构进行谱图水平上的假阳性控制和鉴定；4)在单糖分子水平上，基于特征氧鎓离子的综合打分对唾液酸链接进行鉴定。本专利技术经过上述4个层次上的鉴定和验证，提高了基于串级质谱的唾液酸链接鉴定和验证的准确度和效率。
附图说明
[0028]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0029]图1为本专利技术方法的流程示意图。
[0030]图2为人肝癌组织完整N
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糖肽反向高效液相色谱分离
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串级质谱检测基峰色谱图。
[0031]图3为包含前体离子m/z 1189.08789的一级质谱图。
[0032]图4为含α2,3链接唾液酸的完整N
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糖肽IADTNITSIPQGLPPSLTELHLD GNK_N3H4F0S1的前体离子同位素轮廓指纹比对图。
[0033]图5为含α2,3链接唾液酸的完整N
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糖肽IADTNITSIPQGLPPSLTELHLD GNK_N3H4F0S1的注释二级质谱图。
[0034]图6为含α2,3链接唾液酸的完整N
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糖肽IADTNITSIPQGLPPSLTELHLD GNK_N3H4F0S1的多肽骨架图形解离图。
[0035]图7为含α2,3链接唾液酸的完整N
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糖肽IADTNITSIPQGLPPSLTELHLD GNK_N3H4F0S1的N
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连接糖部分图形解离图。
[0036]图8为含α2,3链接唾液酸的完整N
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糖肽IADTNITSIPQGLPPSLTELHLD GNK_N3H4F0S1的包含氧鎓离子m/z 204、274、292和366的MS/MS谱图区域。
[0037]图9为基于同位素轮廓指纹比对的氧鎓离子m/z 204、274、292和366的鉴定图；IPMD，isotopic peak m/z deviation，同位素峰质荷比偏差；IPAD，isotopic peak relative abundance deviation，同位素峰相对强度偏差。
[0038]图10为包含前体离子m/z 1298.880371的一级质谱图。
[0039]图11为含α2,6链接唾液酸的完整N
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糖肽NNGTITWENLAAVLPFGGTF DLVQLK_N4H5F0S1的前体离子同位素轮廓指纹比对图。
[0040]图12为含α2,6链接唾液酸的完整N
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糖肽NNGTITWENLAAVLPFGGTF DLVQLK_N4H5F0S1的注释二级质谱图。
[0041]图13为含α2,6链接唾液酸的完整N
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糖肽NNGTITWENLAAVLPFGGTF DLVQLK_N4H5F0S1的多肽骨架图形解离图。
[0042]图14为含α2,6链接唾液酸的完整N
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糖肽NNGTITWENLAAVLPFGGTF DLVQLK_N4H5F0S1的N
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连接糖部分图形解离图。
[0043]图15为含α2,6链接唾液酸的完整N
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糖肽NNGTITWENLAAVLPFGGTF DLVQLK_N4H5F0S1的包含氧鎓离子m/z 204、274、292和366的MS/MS谱图区域。
[0044]图16为基于同位素轮廓指纹比对的氧鎓离子m/z 204、274、292和366的鉴定图；IPMD，isotopic peak m/z deviation，同位素峰质荷比偏差；IPAD，isotopic peak relative abundance deviation，同位素峰相对强度偏差。
具体实施方式
[0045]下面将结合具体实施例对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0046]如图1所示，具体的，一种基于串级质谱的唾液酸链接的鉴定和验证方法，包括如下步骤：
[0047]S1、从待解析生物样本中按照现有方法制备完整N
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糖肽样本；其中，所述待解析生物样本为含有唾液酸化糖蛋白的样本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于串级质谱的唾液酸链接的鉴定和验证方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、从待解析生物样本中制备完整N
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糖肽样本；S2、完整N
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糖肽样本经电喷雾电离后得到前体离子，将前体离子送入质谱仪，得到包含前体离子同位素轮廓指纹的实验一级质谱；S3、将前体离子的同位素轮廓指纹与对应的靶向正向理论数据库进行匹配，筛选出符合匹配条件的具有相同分子组成的初级候选完整N
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糖肽IDs；S4、将前体离子送入离子阱中进行气相解离得到碎片离子，将碎片离子送入质谱仪，得到包含碎片离子同位素轮廓指纹的二级质谱；S5、对初级候选完整N
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糖肽IDs的实验和理论碎片离子的分子组成指纹进行逐一同位素轮廓指纹比对和匹配；S6、自分子组成指纹相同的初级候选完整N
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糖肽IDs中靶向地筛选含结构诊断碎片离子的含唾液酸单糖序列，并将筛选出的初级候选完整N
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糖肽IDs归类为候选完整N
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糖肽IDs；S7、对候选完整N
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糖肽IDs进行随机匹配概率打分，最后将符合预先设定的完整N
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糖肽谱图匹配条件的归结为靶向GPSMs；S8、在诱饵库中按照S3
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S7的步骤，获得诱饵GPSMs；S9、将靶向GPSMs和诱饵GPSMs组合，并按P score从小到大排序，选取一个阈值P score，使得假阳性不大于1％，对阈值P score以下的靶向GPSMs去重，获得含唾液酸完整N
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糖肽IDs；S10、基于同位素轮廓指纹比对识别二级质谱中的N
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乙酰葡萄糖胺的特征氧鎓离子m/z 204...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄才岭，
申请(专利权)人：汉诺生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：