一种无蛋白通用型保护液及其制备方法和在真菌毒素定量检测试剂盒中的应用技术

本发明专利技术公开了一种无蛋白通用型保护液及其制备方法和在真菌毒素定量检测试剂盒中的应用，其中，该无蛋白通用型保护液除不含蛋白成分以外，包括如下组分：4

【技术实现步骤摘要】
一种无蛋白通用型保护液及其制备方法和在真菌毒素定量检测试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及食品安全检测
更具体地，涉及一种无蛋白通用型保护液及其及其制备方法和在真菌毒素定量检测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]目前，许多基于色谱的分析技术已经发展成为测定真菌毒素的标准方法，例如，高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法等，这些检测方法具有灵敏高、准确性好的优点。然而，这些方法通常需要大型的实验设备、复杂的样品前处理、繁琐的操作过程和熟练的专业技术人员才能完成，这大大限制了大量实际样品中真菌毒素检测的效率。酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金层析法是现行快速检测中最常用的方法，但是这两种方法均为基于抗体、抗原特异性结合反应的免疫分析法，在检测试剂盒的生产中，需要使用保护液对抗体和抗原等进行相关保护，以使商品化试剂盒拥有更长的货架期。目前的保护液通常含有牛血清白蛋白、血清、卵白蛋白和酪蛋白等蛋白成分，且不可避免的代入IgG、IgY等免疫球蛋白，相关研究表明牛血清白蛋白，卵白蛋白等蛋白成分与部分真菌毒素抗原，尤其是赭曲霉毒素A(OTA)抗原之间存在交叉反应，产生高背景，使得本底水平增高，导致真菌毒素的检测灵敏度无法满足实际需求。
[0003]针对以上问题，开发一种新型无蛋白通用型保护液，避免真菌毒素抗原与蛋白成分之间的交互作用，对提高免疫分析检测的灵敏度和准确性具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一个目的在于提供一种用于真菌毒素检测试剂盒的无蛋白通用型保护液。该无蛋白通用型保护液可广泛用于各种基于抗体、抗原特异性结合反应的免疫分析中生物大分子的保护，能最大限度地延长真菌毒素检测试剂盒中生物分子的保存期，同时由于该保护液不含蛋白成分，可以消除非特异蛋白的相互作用，降低背景，凸显特异性信号，进而提高真菌毒素检测试剂盒的检测灵敏度和准确性。
[0005]本专利技术的第二个目的在于提供一种上述无蛋白通用型保护液的制备方法。
[0006]本专利技术的第三个目的在于提供一种包含上述无蛋白通用型保护液的真菌毒素检测试剂盒。
[0007]为达到上述目的，本专利技术采用下述技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种无蛋白通用型保护液，该保护液不含蛋白成分，包括如下组分：4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液、水溶性高分子化合物、氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、硫酸镁(MgSO4)、表面活性剂、防腐剂、还原剂、海藻糖、甘氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、甘油和超纯水。
[0009]优选地，在上述无蛋白通用型保护液中，各组分的浓度如下：4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸溶液0.5mol/L
‑
5mol/L、水溶性高分子化合物10mg/mL
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80mg/mL、氯化钠1mg/mL
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10mg/mL、氯
化钾0.5mg/mL
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5mg/mL、硫酸镁0.1mg/mL
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1mg/mL、表面活性剂2.5mg/mL
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10mg/mL、防腐剂0.1mg/mL
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2mg/mL、还原剂0.01mg/mL
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0.1mg/mL、海藻糖5mg/mL
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30mg/mL、甘氨酸1mg/mL
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20mg/mL、聚乙烯吡咯烷酮3mg/mL
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6mg/mL、甘油4mg/mL
‑
50mg/mL。
[0010]优选地，所述水溶性高分子化合物为末端连接寡氨短链的PEG分子。
[0011]优选地，所述无蛋白通用型保护液的pH值在6.5
‑
8.2范围内。
[0012]优选地，所述表面活性剂为吐温20(Tween 20)、吐温80(Tween 80)、聚氧乙烯月桂醚、脂肪酸聚氧乙烯醚、Tritonx
‑
100、泊洛沙姆188和甘油脂肪酸酯中的一种或多种的组合。
[0013]优选地，所述防腐剂为叠氮化钠、Procline 200、Proclin300和BND
‑
10中的一种或多种的组合。
[0014]优选地，所述还原剂为亚硫酸钠、维生素C、二硫苏糖醇(DTT)、硫代硫酸钠和β
‑
巯基乙醇中的一种或多种的组合。
[0015]第二方面，本专利技术提供了一种上述无蛋白通用型保护液的制备方法，包括以下步骤：将各组分混合均匀，调节pH值，随后使用滤膜进行过滤，即得。
[0016]优选地，所述滤膜的孔径为0.22μm。
[0017]第三方面，本专利技术提供了一种真菌毒素检测试剂盒，包括有上述无蛋白通用型保护液。
[0018]优选地，所述真菌毒素检测试剂盒中包括有：碱性磷酸酶(ALP)标记的真菌毒素抗体溶液、生物素标记的真菌毒素抗原溶液、链霉亲和素标记的磁微粒溶液、清洗液和发光底物；其中，所述碱性磷酸酶标记的真菌毒素抗体溶液、生物素标记的真菌毒素抗原溶液和链霉亲和素标记的磁微粒溶液以上述无蛋白通用型保护液为保护液。
[0019]需要说明的是，本专利技术提供的真菌毒素检测试剂盒采用竞争法测定食品、农产品及饲料等样本中真菌毒素的含量。赭曲霉毒素A(OTA)为例，其检测过程具体为：样本中真菌毒素和生物素标记的真菌毒素抗原竞争数量有限的ALP标记的真菌毒素抗体，通过链霉亲和素和生物素的亲和反应以及抗原抗体反应，分别形成磁微粒
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链霉亲和素
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生物素标记的真菌毒素抗原
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ALP标记的真菌毒素抗体复合物和真菌毒素
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ALP标记的真菌毒素抗体复合物。经洗涤，在复合物中加入发光底物，发光底物被复合物中的酶催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发出光子，产生的光子数与样本中真菌毒素的浓度成负相关(机理图可参见图1)。
[0020]优选地，上述真菌毒素检测试剂盒，还包括测读孔位、反应孔位、清洗孔位、磁棒套和吸头。
[0021]优选地，所述发光底物为碱性磷酸酶催化的发光底物。
[0022]另需注意的是，如果没有特别说明，本专利技术所记载的任何范围包括端值以及端值之间的任何数值以及以端值或者端值之间的任意数值所构成的任意子范围。本专利技术中制备方法如无特殊说明则均为常规方法，所用的原料如无特别说明均可从公开的商业途径获得或根据现有技术制得，所述百分比如无特殊说明均为体积百分比，所述溶液若无特殊说明均为水溶液。
[0023]本专利技术的有益效果
[0024]1、本专利技术开发的新型无蛋白通用型保护液成分简单明确，成本低廉，无哺乳动物
蛋白，避免了缓冲液与待测样本之间的交互作用，解决了现有保护溶液因自身含有蛋白成分(如血清白蛋白)导致其无法适用于真菌毒素免疫分析的问题。
[0025]2、本专利技术提供的无蛋白通用型保护液，可最大限度地延长真菌毒素检测试剂盒中各种生物分子的保本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无蛋白通用型保护液，其特征在于，包括如下组分：4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸溶液、水溶性高分子化合物、氯化钠、氯化钾、硫酸镁、表面活性剂、防腐剂、还原剂、海藻糖、甘氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、甘油和超纯水。2.如权利要求1所述的无蛋白通用型保护液，其特征在于，各组分的浓度如下：4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸溶液0.5mol/L
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5mol/L、水溶性高分子化合物10mg/mL
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80mg/mL、氯化钠1mg/mL
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10mg/mL、氯化钾0.5mg/mL
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5mg/mL、硫酸镁0.1mg/mL
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1mg/mL、表面活性剂2.5mg/mL
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10mg/mL、防腐剂0.1mg/mL
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2mg/mL、还原剂0.01mg/mL
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0.1mg/mL、海藻糖5mg/mL
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30mg/mL、甘氨酸1mg/mL
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20mg/mL、聚乙烯吡咯烷酮3mg/mL
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6mg/mL、甘油4mg/mL
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50mg/mL。3.如权利要求1或2所述的无蛋白通用型保护液，其特征在于，所述水溶性高分子化合物为末端连接寡氨短链的PEG分子。4.如权利要求1或2所述的无蛋白通用型保护液，其特征在于，所述无蛋白通用型保护液的pH值在6.5
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘洪美，王松雪，叶金，倪保霞，轩志宏，
申请(专利权)人：国家粮食和物资储备局科学研究院，
类型：发明
国别省市：