无丙二酸柠檬酸杆菌及其在引诱橘小实蝇中的应用制造技术

本发明专利技术公开了无丙二酸柠檬酸杆菌及其在引诱橘小实蝇中的应用。本发明专利技术新发现的橘小实蝇共生菌

【技术实现步骤摘要】
无丙二酸柠檬酸杆菌及其在引诱橘小实蝇中的应用


[0001]本专利技术属于害虫的绿色防治
，具体涉及无丙二酸柠檬酸杆菌及其在引诱橘小实蝇中的应用。

技术介绍

[0002]双翅目(Diptera)实蝇科(Tephritidae)寡鬃实蝇亚科(Dacinae)的橘小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)，俗称“针蜂”，起源于亚洲地区，是世界检疫性害虫。自1911年中国台湾首次报道以来，该虫已从我国东南沿海地区逐渐扩展到多个省市，且有进一步北移扩张的趋势。橘小实蝇的寄主范围广，能够为害多达46科的果蔬作物。该虫具有极强的繁殖力，单头雌虫一生可产卵400～1800粒。雌虫产卵于水果内部，卵孵化后，幼虫取食使果实腐烂或变黄脱落，造成果蔬产业严重的经济损失。
[0003]目前市面上使用最广泛的橘小实蝇引诱剂
‑
甲基丁香酚只能诱杀雄虫，而用于诱杀雌虫的诱剂则很少，且效果很差。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于开发出一种对环境友好、使用简便、成本低廉且尤其是对橘小实蝇雌虫具有很好引诱效果的无丙二酸柠檬酸杆菌及利用该菌制备的引诱剂，可用于诱杀橘小实蝇。
[0005]本专利技术从橘小实蝇卵巢中分离出的无丙二酸柠檬酸杆菌BD对橘小实蝇雌虫有引诱作用。在橘小实蝇的寄主果实果肉或市面上购买的果汁中添加该菌菌体后可显著提高对橘小实蝇雌虫的诱集效果。因此利用该菌菌体加橘小实蝇的寄主果实进行发酵可实现制作雌虫引诱剂的目的。本专利技术使用到的原料对环境无污染，成本低，具有非常大的开发潜力；可诱杀橘小实蝇雌虫是其一大特点，对保护果蔬生产具有非常大的作用。
[0006]因此，本专利技术的第一个目的是提供一株无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacter amalonaticus BD)，其保藏编号为GDMCC NO.62161。
[0007]本专利技术的无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacter amalonaticus BD)的形态特征为：在LB培养基上的菌落光滑、湿润，菌落中心不透明、边缘半透明，浅灰黄色，有点发白，表面有光泽，边缘整齐。
[0008]该菌的分子鉴定依据：
[0009]16S rRNA序列分析：取该菌扩繁菌液进行PCR扩增，引物为细菌16S rRNA通用引物1492R及27F，PCR产物经测序后使用MEGA6.0对测序序列进行拼接，拼接后的序列如SEQ ID NO.1所示，拼接结果在NCBI上进行比对分析，比对结果表明该菌株为无丙二酸柠檬酸杆菌。
[0010]该菌的生化鉴定依据：
[0011]利用肠杆菌科细菌生化编码鉴定管GYZ
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15e(17种)及肠杆菌科细菌编码册第二代GYZ
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15eDO16，根据其附带的单盒生化鉴定管使用说明进行生化鉴定；该菌株鉴定值为07325，根据肠杆菌科细菌编码册第二代GYZ
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15eDO16检索，得到结果为无丙二酸柠檬酸杆
菌，其鉴定值为96.607％。
[0012]本专利技术的第二个目的是提供所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacter amalonaticus BD)在引诱橘小实蝇中的应用。
[0013]优选，所述的橘小实蝇为橘小实蝇雌虫。
[0014]本专利技术的第三个目的是提供一种橘小实蝇引诱剂，包含所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD与适宜于该菌的发酵底物。
[0015]优选，所述的橘小实蝇引诱剂，包含所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacter amalonaticus BD)与橘小实蝇寄主果实，或包含所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacter amalonaticus BD)与橘小实蝇寄主果实的加工制品。
[0016]优选，所述的橘小实蝇寄主果实为水果果实，包括但不限于番石榴、柑桔、香蕉、芒果、番木瓜、番荔枝、杨桃、火龙果、枇杷、枣、桃、苹果、梨、李、葡萄、柿、石榴果实等。
[0017]优选，所述的橘小实蝇寄主果实为蔬菜果实，包括但不限于丝瓜、豇豆、苦瓜、黄瓜、茄子、南瓜、青椒、番茄果实等。
[0018]优选，所述的橘小实蝇寄主果实的加工制品包括但不限于果汁、果泥、果酱、果脯、果干等。
[0019]本专利技术的第四个目的是提供一种诱杀橘小实蝇的方法，包括以下步骤：
[0020]将无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacter amalonaticus BD)加入到适宜于无丙二酸柠檬酸杆菌BD的发酵底物中，混匀制成引诱剂；然后将引诱剂装入诱集装置，将诱集装置放置于待诱杀橘小实蝇的目标场地；所述的诱集装置下部用于盛放引诱剂，上部设有用于散发气味的孔，诱集装置外壁上附着有粘虫胶。
[0021]优选，所述的适宜于无丙二酸柠檬酸杆菌BD的发酵底物为橘小实蝇寄主果实或橘小实蝇寄主果实的加工制品，并保证含有适宜于发酵的水分。
[0022]优选，作为本专利技术的其中一种诱集装置，如图4所示，为一个诱集瓶，液态的引诱剂装于诱集瓶内下部，诱集瓶上部设有若干用于散发气味的孔，诱集瓶外壁上均匀附着有粘虫胶；所述的诱集瓶和粘虫胶为黄色。
[0023]本专利技术开发的基于橘小实蝇共生菌
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无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacter amalonaticus BD)的引诱剂，具有引诱橘小实蝇雌虫的效果；该引诱剂制作成本低，诱杀效果好，对环境及非靶标生物无害，具有非常大的应用前景。
[0024]保藏说明：
[0025]本专利技术的Citrobacter amalonaticus BD(无丙二酸柠檬酸杆菌BD)于2021年12月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号：GDMCC NO.62161，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省科学院微生物研究所。
附图说明
[0026]图1是果泥中加无丙二酸柠檬酸杆菌BD对橘小实蝇的诱集作用；(a)和(b)为番石榴果泥加无丙二酸柠檬酸杆菌BD对橘小实蝇雌、雄虫的诱集作用；(c)和(d)为砂糖橘果泥加无丙二酸柠檬酸杆菌BD对橘小实蝇雌、雄虫的诱集作用；**表示成对样本T检验P值小于0.01，NS表示无显著差异。
[0027]图2是果粒橙中加无丙二酸柠檬酸杆菌BD对橘小实蝇雌(a)、雄(b)虫的诱集作
用；**表示成对样本T检验P值小于0.01，NS表示无显著差异。
[0028]图3是无丙二酸柠檬酸杆菌BD发酵不同时长的果汁对橘小实蝇的诱集作用；(a)和(b)为无丙二酸柠檬酸杆菌BD发酵不同时长橙汁对橘小实蝇雌、雄虫的诱集作用；采用单因素方差分析(多重比较采用Duncan)检验，柱形图上具相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。
[0029]图4是野外诱集实验所用诱集瓶示意图；其中，诱集瓶中加入无丙二酸柠檬酸杆菌BD菌液和果汁，菌发酵气味可从诱集瓶上部孔洞中散发出来；诱集瓶颜色制作成黄色可提高对橘小实蝇的诱集效果；使用时将粘虫胶均本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacter amalonaticus BD)，其特征在于，其保藏编号为GDMCC NO.62161。2.权利要求1所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD在引诱橘小实蝇中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的橘小实蝇为橘小实蝇雌虫。4.一种橘小实蝇引诱剂，其特征在于，包含权利要求1所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD与适宜于该菌的发酵底物。5.根据权利要求4所述的橘小实蝇引诱剂，其特征在于，包含权利要求1所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD与橘小实蝇寄主果实，或包含权利要求1所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD与橘小实蝇寄主果实的加工制品。6.根据权利要求5所述的橘小实蝇引诱剂，其特征在于，所述的橘小实蝇寄主果实为番石榴、柑桔、香蕉、芒果、番木瓜、番荔枝、杨桃、火龙果、枇杷、枣、桃、苹果、梨、李、葡萄、柿、石榴、丝瓜、豇豆、苦瓜、黄瓜、茄子、南瓜、青椒或番茄果实。7.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：程代凤，陈惠敏，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：