一种个体化mRNA组合物、载体、mRNA疫苗及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种个体化mRNA组合物、载体、mRNA疫苗及其应用，属于生物疫苗技术领域。其中，个体化mRNA组合物包括至少一种编码肿瘤新生抗原的新生抗原mRNA和至少一种编码肿瘤相关抗原的相关抗原mRNA。本发明专利技术通过将新生抗原mRNA和相关抗原mRNA进行组合，得到个体化的具有高杀伤肿瘤生物活性特点的疫苗用材料，不仅在增加肿瘤特异性T细胞靶向杀伤能力的同时，加快激活免疫系统的进度，还能提高人体的免疫反应，预防后续可能出现的复发。预防后续可能出现的复发。预防后续可能出现的复发。

【技术实现步骤摘要】
一种个体化mRNA组合物、载体、mRNA疫苗及其应用


[0001]本专利技术属于生物疫苗
，特别是涉及一种个体化mRNA组合物、载体、mRNA疫苗及其应用。

技术介绍

[0002]免疫疗法作为第三次革命，主要通过加强和恢复患者自身的免疫系统识别杀伤癌细胞的能力，或给予患者外来的免疫力量帮助其杀伤癌细胞，以达到“带癌生存”的目的。相较于放化疗法和靶向治疗，免疫疗法具有治疗手段简单、只攻击癌细胞、不损害正常细胞等优势。而在免疫疗法中，基于免疫检查点抑制剂，细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4抗体等的免疫疗法发展迅猛，在进展期实体瘤免疫治疗中取得一定的成果，但仍有超过50％的患者由于缺乏肿瘤特异性的淋巴细胞浸润等原因对ICIs治疗不响应，且有超过20％的患者发生≥3级的免疫治疗相关的不良反应。因此，探索新型的免疫策略以增强肿瘤特异性淋巴细胞浸润，进一步提升实体瘤患者免疫治疗的ORR，可能是实体瘤精准免疫治疗未来的方向。
[0003]肿瘤中超过95％的突变是独特的且患者特异的(Weide等2008:J.Immunother.31,180
‑
188)。基于这些突变，可转录成mRNA，翻译成突变肽段，其与主要组织相容性复合体(Majorhistocompatibility complex,MHC)形成的MHC
‑
多肽复合物经高尔基体呈递至肿瘤细胞表面，可被TCR特异性识别，从而诱导机体对肿瘤细胞的特异性杀伤。相比于传统的肿瘤相关抗原(Tumor associated antigen,TAA)，以突变对应的新生抗原为靶点的免疫治疗具有特异性强、无中枢耐受和自身免疫问题、副作用小、可实现个体化精准免疫治疗等优点。例如，专利EP2012000006W中公开的用于癌症的个体化RNA疫苗，利用新生抗原对患者进行有针对性的个体化肿瘤癌症的免疫。然而，这种仅以新生抗原为靶点的个体化RNA疫苗，其实际的肿瘤杀伤效果有限。因此，本领域还需开发更多具有良好肿瘤杀伤效果的疫苗。

技术实现思路

[0004]为解决上述现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种个体化mRNA组合物、载体、mRNA疫苗及其应用。本专利技术，一方面以新生抗原mRNA为靶点，实现对肿瘤的高精准性杀伤，增强肿瘤特异性T细胞靶向杀伤能力，另一方面增加相关抗原mRNA，使其与新生抗原mRNA同步进入免疫系统，在进一步增加肿瘤特异性T细胞靶向杀伤能力的同时还可以快速激活免疫系统，实现综合提高治疗进度和效果的目的。具体内容如下：
[0005]第一方面，本专利技术提供了一种个体化mRNA组合物。所述mRNA组合物包括：至少一种编码肿瘤新生抗原的新生抗原mRNA和至少一种编码肿瘤相关抗原的相关抗原mRNA。
[0006]在一些实施例中，所述新生抗原mRNA对应的新生抗原转录模板是依次进行肽筛选和突变位点筛选出的高免疫原性突变序列。
[0007]在一些实施例中，所述mRNA组合物还包括：至少一种编码共刺激因子的共刺激因子mRNA，用于促进所述肿瘤新生抗原和所述肿瘤相关抗原所引起的免疫反应。
[0008]在一些实施例中，该mRNA组合物的载体为抗原呈递细胞。
[0009]在一些实施例中，所述共刺激因子为CD40L、CD40、CD27L、CD27、CD28、CD275、CD278、CD134、CD137、CD154、GITR、HVEM、TIM
‑
1、TIM
‑
3、TIM
‑
4、LFA
‑
1、CD2、CD58、ICAM
‑
1、TNFSF4、TNFSF5、TNFSF7、TNFSF9、TNFSF14、TNFSF18中的任意一种。
[0010]在一些实施例中，所述肿瘤新生抗原与所述肿瘤相关抗原源于或不源于同一个体。
[0011]在一些实施例中，所述肿瘤相关抗原为高表达的肿瘤相关抗原。
[0012]在一些实施例中，所述肿瘤相关抗原为WT1、MSLN、FSHR中任意一种。
[0013]在一些实施例中，新生抗原mRNA的RNA长度为600～800nt；和/或
[0014]相关抗原mRNA的RNA长度为1500～2000nt；和/或
[0015]共刺激因子mRNA的RNA长度为1100～1900nt。
[0016]例如，新生抗原mRNA的RNA长度可以为600nt、650nt、700nt、750nt、800nt中的任意值或组合。
[0017]例如，相关抗原mRNA的RNA长度可以为1500nt、1600nt、1700nt、1750nt、1800nt、1850nt、1900nt、2000nt中的任意值或组合。
[0018]例如，共刺激因子mRNA的RNA长度可以为1100nt、1300nt、1500nt、1650nt、1800nt、1900nt中的任意值或组合。
[0019]第二方面，本专利技术提供了一种载体，所述载体包含上述第一方面所述的mRNA组合物。
[0020]在一些实施例中，所述载体为包含所述mRNA组合物的脂质、脂质体、脂质复合体、脂质纳米颗粒、聚合纳米颗粒、细胞、模拟纳米颗粒、纳米管或偶联物中的一种或多种。
[0021]第三方面，本专利技术提供了一种mRNA疫苗。所述mRNA疫苗包含第一方面所述的mRNA组合物，或包含第二方面所述的载体。
[0022]第四方面，本专利技术提供了一种上述第一方面所述mRNA组合物或上述第二方面所述载体或上述第三方面所述mRNA疫苗的应用。
[0023]在一些实施例中，所述应用包括：在制备针对癌症的特异性T细胞中的应用；或
[0024]在制备针对癌症的TCR
‑
T细胞中的应用；或
[0025]在制备针对癌症的诊断试剂中的应用；或
[0026]在癌症治疗和/或预防中的应用。
[0027]在一些实施例中，所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、胃癌、肝癌、前列腺癌、肺癌以及结肠癌中的任一种。
[0028]本专利技术的有益效果在于：通过将新生抗原mRNA和相关抗原mRNA进行组合，得到了个体化的具有高杀伤肿瘤生物活性特点的疫苗用材料，将其应用于相应的肿瘤治疗中，不仅可以增加肿瘤特异性T细胞靶向杀伤能力，加快激活免疫系统的进度，还能提高人体的免疫反应，预防后续可能出现的复发。
附图说明
[0029]图1示出了本专利技术实施例4制备的DC肿瘤疫苗
‑
1中CD40L mRNA表达的蛋白检测结果；
[0030]图2示出了本专利技术实施例4制备的DC肿瘤疫苗
‑
1中WT1 mRNA表达的蛋白检测结果；
[0031]图3示出了本专利技术实施例4和实施例6各自制备的DC肿瘤疫苗中肿瘤新生抗原mRNA
‑
1和肿瘤新生抗原mRNA
‑
2表达蛋白的蛋白印迹分析；
[0032]图4示出了本专利技术实施例8中肿瘤特异性CD8+T细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种个体化mRNA组合物，其特征在于，所述mRNA组合物包括：至少一种编码肿瘤新生抗原的新生抗原mRNA和至少一种编码肿瘤相关抗原的相关抗原mRNA。2.根据权利要求1所述的mRNA组合物，其特征在于，所述新生抗原mRNA对应的新生抗原转录模板是依次进行肽筛选和突变位点筛选出的高免疫原性突变序列。3.根据权利要求1或2所述的mRNA组合物，其特征在于，所述mRNA组合物还包括：至少一种编码共刺激因子的共刺激因子mRNA。4.根据权利要求3所述的mRNA组合物，其特征在于，所述共刺激因子为CD40L、CD40、CD27L、CD27、CD28、CD275、CD278、CD134、CD137、CD154、GITR、HVEM、TIM
‑
1、TIM
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3、TIM
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4、LFA
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1、CD2、CD58、ICAM
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1、TNFSF4、TNFSF5、TNFSF7、TNFSF9、TNFSF14、TNFSF18中的任意一种。5.根据权利要求1所述的mRNA组合物，其特征在于，所述肿瘤相关抗原为WT1、MSLN、FSHR中任意一种。6.根据权利要求3所述的mRNA组合物，其特征在于，所述新生抗原mR...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁平，雷霆钧，高莉，向卫，许妍，
申请(专利权)人：四川康德赛医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：