本发明专利技术公开了一种应用于肿瘤标志物CA242的重组抗体的制备方法，所述抗体重链氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述抗体重链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。所述抗体重链的CDR1、CDR2、CDR3可变区序列如SEQ ID NO.5~7所示，所述抗体轻链的CDR1、CDR2、CDR3可变区序列如SEQ ID NO.8~10所示。一种核酸分子，其编码所述的抗CA242抗体。本发明专利技术提供的抗体活性高、抗体批间稳定。本发明专利技术对于进一步实现抗CA242抗体的稳定表达和规模化生产具有重要意义。稳定表达和规模化生产具有重要意义。稳定表达和规模化生产具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
一种应用于肿瘤标志物CA242的重组抗体的制备方法
[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种应用于肿瘤CA242的重组抗体的制备方法。
技术介绍
[0002]CA242(糖链抗原242)是一种唾液酸化的鞘糖脂类抗原，该抗原在健康人群中含量极低，在胰腺癌、结直肠癌、胃癌患者体内血清水平显著升高，是胰腺癌、结直肠癌的肿瘤标志物。相较于CA199、CA50等肿瘤标志物，CA242在临床诊断恶性肿瘤时具有更高的灵敏性，CA242与CA199、CEA等多种肿瘤标记物的联合检测，对于恶性肿瘤的预防及治疗具有重要的意义。
技术实现思路
[0003]本专利技术的目的是提供一种新的抗CA242抗体及其应用。本专利技术提供的抗体活性高、抗体批间稳定。本专利技术对于进一步实现抗CA242抗体的稳定表达和规模化生产具有重要意义。
[0004]本专利技术采用的技术方案如下：
[0005]一种抗C242抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有至少一个选自SEQ ID NO：5、6、7的重链CDR结构域和/或至少一个选自SEQ ID NO：8、9、10的轻链CDR结构域。
[0006]本专利技术的抗C724抗体或其抗原结合片段，所述抗体的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQ ID NO：5所示的CDR1，SEQ ID NO：6所示的CDR2和SEQ ID NO：7所示的CDR3；所述抗体的轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQ ID NO：8所示的CDR1，SEQ ID NO：9所示的CDR2和SEQ ID NO：10所示的CDR3。
[0007]所述的抗CA242抗体，其重链氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0008]所述的抗CA242抗体，其重链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0009]一种核酸分子，其编码所述的抗CA242抗体。
[0010]抗体重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；抗体轻链核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。
[0011]一种载体，其包含上述的核酸分子。
[0012]一种宿主细胞，其包含核酸分子或上述载体。
[0013]一种抗体偶联物，其为由所述的抗CA242抗体与载体或药物偶联得到，或者由所述的抗体与经化学或生物标记得到。
[0014]一种用于检测C724蛋白的试剂盒，包含所述的抗CA242抗体。
[0015]所述的抗体或核酸分子在制备用于诊断癌症的诊断剂或检测CA242的产品中的应
用。
[0016]有益效果
[0017]本专利技术提供了一种新的抗CA242抗体，活性较高，稳定性好，加速七天稳定性降幅在20％以内，所述抗体能够很好地识别CA242，并具有高亲和力和特异性，为C242检测提供了一种新的选择。
附图说明
[0018]图1CA242细胞株上清SDS
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PAGE电泳胶图，其中泳道1为还原条带，泳道2为非还原条带。
[0019]图2是抗CA242抗体纯度色谱图。
具体实施方式
[0020]实施例1抗体获取
[0021]1.1抗原免疫过程
[0022]抗原准备过程：用CA242蛋白作为免疫原，将抗原稀释至1mg/mL，首次免疫取50μL抗原溶液、与50μL细胞因子佐剂白介素
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2；后续免疫取50μL抗原溶液、50μL细胞因子佐剂。用两只2mL注射器分别吸取抗原溶液与佐剂，尽可能排掉注射器中的空气并用三通链接，先将抗原推入佐剂中，在反复推动连接好的注射器约20min
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40min，直至乳化后的抗原在水中不扩散为止。
[0023]免疫小鼠过程：选择健康的实验鼠，体表无明显外伤，积极进食，活泼，6至8周龄的老鼠为宜。采用腹腔注射方法，每21天免疫一次，当免疫两次之后，每次免疫后7天断尾取血检测效价，当效价达到要求时即可停止免疫，进行融合。
[0024]1.2细胞融合过程
[0025]材料准备：
[0026]配制HAT培养基，分装DMEM及PEG；手术器械、50mL塑料离心管、50mL玻璃离心管灭菌。提前一周复苏SP2/0细胞，培养并使之处于良好的生长状态。提前一天用HAT培养基采饲养细胞并铺板，融合一只老鼠需要铺5块饲养细胞版。
[0027]融合：
[0028]处理SP2/0：吹散，转移至50mL塑料离心管，1000r离心5min，弃上清，加DMEM，吹散，1000r离心5min，加DMEM至10mL左右，吹散，计数，备用。
[0029]提取脾细胞：
[0030]小鼠眼窝取血，脱颈处死，血样留作阳性对照。分离出小鼠脾脏，先用DMEM冲洗脾脏外部，再DMEM冲洗脾脏内部，收集冲洗液并转移至10mL玻璃离心管，计数。
[0031]1000r离心5min，弃上清，加DMEM吹散并转移至50mL玻璃离心管，将之前处理的SP2/0同时转移至50mL玻璃离心管，1000r离心5min，弃上清，在手背上磨匀。37℃温水浴，1min内加入1mL PEG，边加边摇，静置90s。1min内加1mL DMEM，30s内加1mL DMEM，逐渐加速，加DMEM至40～50mL，37℃静置10min，800r离心6min，弃上清，加HAT铺板。3天之后半换液，一周之后全换液，换HAT培养基培养。
[0032]1.3亚克隆挑选过程
[0033]观察细胞状态，当96孔内有肉眼可观察到的细胞团后，进行整板检测，挑选阳性较高的孔进行亚克隆，一个阳性孔一块板。
[0034]当6孔内有肉眼可观察到的细胞团后，进行亚克隆挑拣，每块板选择12个单个细胞团的孔进行亚克隆挑拣，选择阳性高，细胞状态好的细胞进行下一步亚克隆，至少进行三次亚克隆，最后挑选出阳性高、细胞状态好单克隆细胞团定株。
[0035]将挑出来的细胞团转移至24孔培养，待24孔细胞长好后转移至小方瓶培养。待小方瓶内细胞长好之后，进行冻存及制备腹水。
[0036]1.4腹水制备过程
[0037]提前一周给老鼠注射石蜡，每只老鼠0.5mL。待小方瓶内细胞长好之后，吹散，转移至10mL玻璃离心管，1000r离心5min，弃上清，加1mLDMEM，计数，按每只老鼠注射0.8
×
106个细胞，每只老鼠注射0.5mL的量进行稀释，然后给老鼠腹腔注射细胞。观察老鼠状态，待小鼠腹部明显涨大即可开始抽取腹水并收集。
[0038]1.5抗体纯化过程
[0039]试剂准备：平衡/透析缓冲液：10mM PB(pH7.5)+100mM NaCl
[0040]100％饱和硫酸铵
[0041]柱清洗液：20mM Tris(pH8.0)+1.5M NaCl
[0042]设备准备：Q柱、低温高速离本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种抗CA242抗体，其特征在于，所述抗体重链氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.根据权利要求1所述的抗CA242抗体，其特征在于，所述抗体重链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。3.根据权利要求1所述的抗CA242抗体，其特征在于，所述抗体重链的CDR1、CDR2、CDR3可变区序列如SEQ ID NO.5～7所示，所述抗体轻链的CDR1、CDR2、CDR3可变区序列如SEQ ID NO.8～10所示。4.一种核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1所述的抗CA242抗体。5.根据权利要求5所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：李永刚，李娜，
申请(专利权)人：南京京达生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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