一种预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的试剂盒，试剂盒包括甲基化引物、焦磷酸测序引物、PCR扩增试剂、焦磷酸测序试剂、SNP位点引物和SNP位点测序反应试剂，本发明专利技术还公开了应用上述试剂盒预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的方法，与现有技术相比，本发明专利技术提供了一种早期、简便、精准的预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的试剂盒，根据测序位点的表型，分析CR出现的风险，为早期干预提供借鉴，减少冠心病合并昼夜节律紊乱患者PCI术后不良心血管事件的发生。术后不良心血管事件的发生。

【技术实现步骤摘要】
一种预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的试剂盒及方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体而言，涉及一种预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]作为一种已经入选WHO基本药物目录的抗血小板药物，氯吡格雷被用来预防急性冠脉综合征(ACS)心肌缺血的再次发生或预防经皮冠脉介入术(PCI)后冠脉支架内血栓的形成，与阿司匹林合用所组成的“双联抗血小板治疗”方案是ACS或PCI植入支架后临床抗血小板治疗的基石，为世界各国广泛采用。
[0003]氯吡格雷抵抗(CR)是冠心病PCI术后一种常见的药物疗效反应，是指病人在服用推荐(或标准)剂量的氯吡格雷后因各种原因不能达到预期的抗血小板作用而导致的药物临床疗效较差或产生不良心血管事件的现象。据估计，约10％
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45％的服药病人可能存在氯吡格雷抵抗。判断服药病人有无氯吡格雷抵抗的常用方法是检测服药1月后ADP诱导的血小板聚集抑制率或用药1月后的血小板高反应单位。尤其对于昼夜节律紊乱患者，其SNP及DNA甲基化修饰在氯吡格雷不同抗血小板效应中起关键作用。然而，目前各种检测血小板聚集率方法的重现性较差，难以精准指导昼夜节律紊乱患者临床合理使用氯吡格雷。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的试剂盒，根据测序位点的表型，分析CR出现的风险，为早期干预提供借鉴，减少冠心病合并昼夜节律紊乱患者PCI术后不良心血管事件的发生。
[0005]为达到上述目的，本专利技术提供一种预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的试剂盒，所述试剂盒包括甲基化引物、焦磷酸测序引物、PCR扩增试剂、焦磷酸测序试剂、SNP位点引物和SNP位点测序反应试剂。
[0006]作为优选，所述SNP位点引物包括，
[0007]SNP位点引物1(Seq No1)：
[0008]rs1801260上游引物AAGCAAACCCCTGACATGGC；
[0009]SNP位点引物2(Seq No2)：
[0010]rs1801260下游引物GGCCCATTAAGAGTTACTCAGATGACC；
[0011]SNP位点引物3(Seq No3)：
[0012]rs10861688上游引物TGCCACCCAAGCCTGAAAACA；
[0013]SNP位点引物4(Seq No4)：
[0014]rs10861688下游引物GGCTGAGGCAAGAGAATCCT；
[0015]SNP位点引物5(Seq No5)：
[0016]rs8192439上游引物TGCTTCAGTTTCTCCACCTG；
[0017]SNP位点引物6(Seq No6)：
[0018]rs8192439下游引物GAACCCTTTAAGAAGTGATATGTTTGTTC；
[0019]SNP位点引物7(Seq No7)：
[0020]rs2007044上游引物CGTAGACCATCTCTGGGTGATG；
[0021]SNP位点引物8(Seq No8)：
[0022]rs2007044下游引物CAGGGACAATGGTAATGCCTATCTGTG；
[0023]SNP位点引物9(Seq No9)：
[0024]rs3745406上游引物CCTTGTGATCCGCCCGCCTT；
[0025]SNP位点引物10(Seq No10)：
[0026]rs3745406下游引物GGCCACTAGGACCCTCAGATCA；
[0027]作为优选，所述甲基化引物包括，
[0028]甲基化引物1(Seq No11)：
[0029]cg02447122上游引物ATAGGTAAAAGTAGGGGTAGGGT；
[0030]甲基化引物2(Seq No12)：
[0031]cg02447122下游引物5
’‑
AAAATTCCTAAACCTTCCTTCTATTTACT；
[0032]甲基化引物3(Seq No13)：
[0033]cg13254556上游引物5
’‑
GGTGGTTTATTTTTTTTAGGTAGTGA；
[0034]甲基化引物4(Seq No14)：
[0035]cg13254556下游引物ATACAAATTCTTTCCCAAAAACTTACTTA；
[0036]甲基化引物5(Seq No15)：
[0037]cg22507406上游引物TAGGTTATTTGGAAAAGGTATTTAATTAGG；
[0038]甲基化引物6(Seq No16)：
[0039]cg22507406下游引物5
’‑
AACCAAACTAATCTTAAACTCCTAAC。
[0040]作为优选，所述焦磷酸测序引物包括，
[0041]焦磷酸测序引物1(Seq No17)：
[0042]cg02447122测序引物GGGTAGGGTTAGGTT；
[0043]焦磷酸测序引物2(Seq No18)：
[0044]cg13254556测序引物CTTAAAAATCTATTTCCCCATC；
[0045]焦磷酸测序引物3(Seq No19)：
[0046]cg22507406测序引物ATTTAATTAGGTGAAGGAGAAAATA。
[0047]作为优选，所述PCR扩增试剂为PyroMark PCR Master Mix试剂，所述SNP位点测序反应试剂为GenomeLab SNPstream基因分型系统中的SNP测序反应试剂。
[0048]作为优选，所述焦磷酸测序试剂包括DNA聚合酶、Apyrase、Luciferase、ATP sulfurylase、脱氧核糖核苷三磷酸复合物dNTP和底物。
[0049]作为优选，所述底物包括5
’‑
磷醯硫酸和萤光素。
[0050]本专利技术的另一个目的在于提供一种预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的方法，所述方法应用上述试剂盒，包括如下步骤：
[0051]S1、利用QIAamp DNA Blood Mini试剂盒，从外周血中提取基因组DNA；
[0052]S2、利用步骤S1中得到的基因组DNA依次进行PCR扩增和焦磷酸测序得到基因组DNA上ADCY3 cg02447122、GRIA2 cg13254556和PER3 cg22507406的甲基化位点的序列；
[0053]S3、采用GenomeLab SNPstream基因分型系统对步骤S1中得到的基因组DNA进行基因分型，从而得到基因组DNA上CLOCK rs1801260、CRY1 rs10861688、CRY1 rs8192439、CACNA1C rs2007044、PRKCG rs37454本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括甲基化引物、焦磷酸测序引物、PCR扩增试剂、焦磷酸测序试剂、SNP位点引物和SNP位点测序反应试剂。2.根据权利要求1所述的预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的试剂盒，其特征在于，所述SNP位点引物包括，SNP位点引物1(SeqNo1)：rs1801260上游引物AAGCAAACCCCTGACATGGC；SNP位点引物2(SeqNo2)：rs1801260下游引物GGCCCATTAAGAGTTACTCAGATGACC；SNP位点引物3(SeqNo3)：rs10861688上游引物TGCCACCCAAGCCTGAAAACA；SNP位点引物4(SeqNo4)：rs10861688下游引物GGCTGAGGCAAGAGAATCCT；SNP位点引物5(SeqNo5)：rs8192439上游引物TGCTTCAGTTTCTCCACCTG；SNP位点引物6(SeqNo6)：rs8192439下游引物GAACCCTTTAAGAAGTGATATGTTTGTTC；SNP位点引物7(SeqNo7)：rs2007044上游引物CGTAGACCATCTCTGGGTGATG；SNP位点引物8(SeqNo8)：rs2007044下游引物CAGGGACAATGGTAATGCCTATCTGTG；SNP位点引物9(SeqNo9)：rs3745406上游引物CCTTGTGATCCGCCCGCCTT；SNP位点引物10(SeqNo10)：rs3745406下游引物GGCCACTAGGACCCTCAGATCA。3.如权利要求1所述的预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的试剂盒，其特征在于，所述甲基化引物包括，甲基化引物1(SeqNo11)：cg02447122上游引物ATAGGTAAAAGTAGGGGTAGGGT；甲基化引物2(SeqNo12)：cg02447122下游引物5
’‑
AAAATTCCTAAACCTTCCTTCTATTTACT；甲基化引物3(SeqNo13)：cg13254556上游引物5
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GGTGGTTTATTTTTTTTAGGTAGTGA；甲基化引物4(SeqNo14)：cg13254556下游引物ATACAAATTCTTTCCCAAAAACTTACTTA；甲基化引物5(SeqNo15)：cg22507406上游引物TAGGTTATTTGGAAAAGGTATTTAATTAGG；甲基化引物6(SeqNo16)：cg22507406下游引物5
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AACCAAACTAATCTTAAACTCCTAAC。
4.如权利要求1所述的预测昼夜节律紊乱患者氯吡格雷抵抗的试剂盒，其特征在于，所述焦磷酸测序引物包括，焦磷酸测序引物1(SeqNo17)：cg02447122测序引物GGGTAGGGTTAGGTT；焦磷酸测序引物2(SeqNo18)：cg13254556测序引物CTTAAAAATCTATTTCCCCATC；焦磷酸测序引物3(SeqNo19)：cg22507406测序引物ATTTAATTAGGTGAAGGAGAAAATA。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：郁清琳，苏嘉，陈晓敏，李晓静，杨瑾，杜为平，王勇，
申请(专利权)人：宁波市第一医院，
类型：发明
国别省市：