一种长链羧基微球及其制备方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种长链羧基微球及其制备方法和试剂盒。对常规的聚苯乙烯（PS）羧基微球方法进行了改进，制备中使用了长链羧基功能单体如3

【技术实现步骤摘要】
一种长链羧基微球及其制备方法和试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种长链羧基微球及其制备方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]常见的胶乳增强比浊法的原理是抗原或抗体采用吸附或共价偶联的方式与微球结合，当检测物的抗原或抗体与微球偶联的抗原或抗体结合后，微球起到了信号放大的作用，并在反应液中产生浊度。在一定的范围内，这种浊度信号的强弱与待测物的浓度成线性关系，从而实现对样本中待检物含量的测定。多年来，免疫比浊法检测已经从分光光度计上的手动方法发展到完全自动化的模式，并且在医学诊断等领域大规模应用。
[0003]胶乳增强比浊法一般有两种反应模式，一种是直接法，即微球的上的抗体/抗原直接与待检物反应，一般用于生物大分子的检测。另一种是间接法，也称免疫抑制法，即抗体与抗原预先产生浊度，加入样本后，待测物与抗原/抗体产生竞争，浊度受到抑制，抑制的程度与待测物的浓度成正比。一般来说，当待测样本只有一个表位，如半抗原、肽和小分子时，适合进行间接分析。
[0004]采用化学偶联方法的微球目前多为羧基聚苯乙烯（PS)微球，一般是在PS微球制备的过程中，引入含有羧基的单体进行共聚，实现PS微球表面的羧基化修饰。PS微球表面的结构如图1中A部分。采用普通羧基微球进行化学偶联时，一般是通过偶联剂将微球表面的羧基与抗原抗体的氨基进行交联，形成如图1中B部分的结构。由于PS微球的羧基通常位于聚苯乙烯链的侧链上，仅有少量羧基位于PS微球的表面，大部分羧基处于苯乙烯基团的“包埋”中。当羧基与含有氨基的抗原或抗体进行交联形成致敏微球时，如果交联的抗原抗体的为大分子蛋白（抗体均为大分子），此时抗原表位往往距离球表面位置较远，空间位阻效应对捕获能力的影响不大，测试样本中的抗体或抗原可以捕获致敏微球并形成浊度信号。
[0005]但当微球的羧基偶联小分子的半抗原时，由于抗原表位距离微球表面的空间位置较短，会产生显著空间位阻效应，抗体对半抗原的捕获能力急剧下降，无法形成有效浊度。目前解决的办法是将小分子抗原预先偶联至蛋白上，如牛血清白蛋白（BSA）、血蓝蛋白（KLH）等，再将此偶联物与微球进行偶联。可以看出，上述方法存在着过程繁琐，得率低，不易放大等缺陷。

技术实现思路

[0006]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种长链羧基微球及其制备方法和试剂盒。
[0007]本专利技术实现目的的技术方案如下：一种长链羧基微球的制备方法，包括如下步骤：1）水相配制；2）单体配制；3）聚合反应；
4）加入功能单体；所述的功能单体具有或为下面三式中的一种结构，当n=1时，名称分别为：3
‑
甲基
‑4‑
戊烯酸、2
‑
甲基
‑4‑
戊烯酸乙酯、2,2
‑
二甲基
‑4‑
戊烯酸，式中，n为1到9的整数；5）结束过滤；6）胶乳除杂得到单分散聚胶乳液成品。
[0008]所述的一种长链羧基微球的制备方法，所述的1）水相配制时将反应中亲水的物质预溶于适量水中，得到混匀的溶液；所述的2）单体配制时将中成核的聚合物单体加入水相中，搅拌，确保均匀分散；所述的3）聚合反应时将升温，加入引发剂，单体启动聚合反应；所述的4）加入功能单体，促使球表面功能基团形成；所述的5）结束过滤，反应结束，过滤除去大颗粒；所述的6）胶乳透析除杂，得到单分散聚胶乳液成品。
[0009]所述的一种长链羧基微球的制备方法，包括如下步骤：1）水相配制：将0.3~0.5克十二烷基硫酸钠，0.5克氢氧化钠，0~2克聚乙二醇4000加入到820
‑
1200mL去离子水中，加入2L玻璃反应釜中，开启搅拌300
‑
400 RPM溶解；2）单体配制：取步骤１纯化后的苯乙烯23
‑
60mL及二乙烯基苯（DVB）0
‑
0.6ml缓慢加入水相中，搅拌，维持转速300
‑
400 RPM；3）聚合反应：升温至70 o
C，加入引发剂过硫酸钾0.5克，反应釜通入氮气保护，保持温度不变，计时反应；4）加入功能单体2mL，溶于20ml乙醇中；反应0.5
‑
2小时后，加入至反应釜中；5）结束过滤：反应12小时后反应结束，冷却至室温，10um滤纸过滤；6）胶乳除杂：用50 kD透析袋对50mM MES缓冲液透析，除去杂质成分，得单分散聚胶乳液成品。
[0010]所述的一种长链羧基微球的制备方法，1）水相配制：将0.3克十二烷基硫酸钠，0.5克氢氧化钠，2克聚乙二醇4000加入到820mL去离子水中，加入2L玻璃反应釜中，开启搅拌400 RPM溶解；2）单体配制：取纯化后的苯乙烯23mL及二乙烯基苯（DVB）0.6ml缓慢加入水相中，搅拌，维持转速400 RPM；3）聚合反应：升温至70 o
C，加入引发剂过硫酸钾0.5克，反应釜通入氮气保护，保持温度不变，计时反应；4）加入功能单体：3
‑
甲基
‑4‑
戊烯酸2mL，溶于20ml乙醇中；反应2小时后，加入至反应釜中；5）结束过滤：反应12小时候反应结束，冷却至室温，10um滤纸过滤；6）胶乳除杂：用50 kD透析袋对50mM MES缓冲液透析，除去杂质成分，得单分散聚胶乳液成品。
[0011]所述的一种长链羧基微球的制备方法，1）水相配制：将0.5克十二烷基硫酸钠，0.5克NaOH，加入到1200mL去离子水中，加入2L玻璃反应釜中，开启搅拌300RPM溶解；2）单体配制：取纯化后的苯乙烯60mL加入水相中，搅拌，维持转速300 RPM。
[0012]3）聚合反应：升温至70 o
C，加入引发剂过硫酸钾0.5克，反应釜通入氮气保护，保持温度不变，计时反应；4）加入功能单体：5
‑
甲基
‑5‑
己烯酸2mL，溶于20ml乙醇中。反应2小时后，加入至反应釜中；5）结束过滤：反应12小时候反应结束，冷却至室温，10um滤纸过滤；6）胶乳除杂：用50 kD透析袋对50mM MES缓冲液透析，除去杂质成分，得单分散聚胶乳液成品。
[0013]一种长链羧基微球，根据所述的一种长链羧基微球的制备方法制备得到。
[0014]一种采用长链羧基微球的试剂盒，其采用所述的长链羧基微球直接小分子抗原偶联，用于免疫比浊检测。
[0015]另一种采用长链羧基微球的试剂盒，其采用所述的长链羧基微球直接小分子抗原偶联，免疫比浊法用于尿肌酐及血清抗环瓜氨酸抗体的检测。
[0016]本专利技术的有益效果：本专利技术对PS微球的缺陷进行了改进，即在聚苯乙烯微球上接入了长链羧基。使用功能单体制备微球，可以促使微球形成的羧基链变长，以克服空间位阻效应。将制备的微球与带氨基的小分子半抗原交联，可以与对应的抗体形成浊度反应，免去了小分子抗原与蛋白预交联的步骤。用偶联小分子的微球构建试剂盒，定标曲线符合要求，可用于检测标本中相应物质的含量。
附图说明
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种长链羧基微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1）水相配制；2）单体配制；3）聚合反应；4）加入功能单体；所述的功能单体具有或为下面三式中的一种结构，，式中，n为1到9的整数；5）结束过滤；6）胶乳除杂得到单分散聚胶乳液成品。2.根据权利要求1所述的一种长链羧基微球的制备方法，其特征在于，所述的1）水相配制时将反应中亲水的物质预溶于适量水中，得到混匀的溶液；所述的2）单体配制时将中成核的聚合物单体加入水相中，搅拌，确保均匀分散；所述的3）聚合反应时将升温，加入引发剂，单体启动聚合反应；所述的4）加入功能单体，促使球表面功能基团形成；所述的5）结束过滤，反应结束，过滤除去大颗粒；所述的6）胶乳透析除杂，得到单分散聚胶乳液成品。3.根据权利要求1所述的一种长链羧基微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1）水相配制：将0.3~0.5克十二烷基硫酸钠，0.5克氢氧化钠，0~2克聚乙二醇4000加入到820
‑
1200mL去离子水中，加入2L玻璃反应釜中，开启搅拌300
‑
400 RPM溶解；2）单体配制：取步骤1纯化后的苯乙烯23
‑
60mL及二乙烯基苯（DVB）0
‑
0.6ml缓慢加入水相中，搅拌，维持转速300
‑
400 RPM；3）聚合反应：升温至70 o
C，加入引发剂过硫酸钾0.5克，反应釜通入氮气保护，保持温度不变，计时反应；4）加入功能单体2mL，溶于20ml乙醇中；反应0.5
‑
2小时后，加入至反应釜中；5）结束过滤：反应12小时后反应结束，冷却至室温，10um滤纸过滤；6）胶乳除杂：用50 kD透析袋对50mM MES缓冲液透析，除去杂质成分，得单分散聚胶乳液成品。4.根据权利要求1或者3所述的一种长链羧基微球的制备方法，其特征在于，1）水相配制：将0.3克十二烷基硫酸钠，0.5克氢氧化钠，2克聚乙二醇4000加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：张名镇，王轶雄，
申请(专利权)人：博序医学科技杭州有限责任公司，
类型：发明
国别省市：