SAC1作为乙型肝炎治疗靶点的应用制造技术

本发明专利技术公开了靶向SAC1的物质在制备治疗乙型肝炎的药物中的用途，所述药物使SAC1过表达；还公开了SAC1蛋白或表达SAC1蛋白的重组质粒在制备治疗乙型肝炎的药物中的应用。本发明专利技术研究表明SAC1通过促进HBV病毒粒子的自噬降解来显著抑制HBV的复制，SAC1作为抗HBV治疗的一个新的潜在靶点有很好的应用前景。本发明专利技术研究表明SAC1缺失导致高尔基

【技术实现步骤摘要】
SAC1作为乙型肝炎治疗靶点的应用


[0001]本专利技术涉及生物医学和医药
，具体涉及SAC1作为乙型肝炎治疗靶点的应用。

技术介绍

[0002]慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者发生肝硬化甚至肝细胞癌的风险很高，越来越多的证据表明HBV的产生与肝细胞内脂质代谢密切相关。磷脂酰肌醇脂类在脂质信号转导、膜识别、载体转运和病毒复制中发挥重要作用。然而，目前还没有关于磷脂酰肌醇是否可以调节HBV复制的相关文献。
[0003]SAC1磷脂酰肌醇磷酸酶(SACM1L/SAC1)是磷脂酰肌醇
‑4‑
磷酸(PtdIns4P/PI4P)的关键脂质磷酸酶，是一种完整的膜蛋白，存在于内质网(ER)和高尔基体中，在内质网和早期高尔基区室之间循环。研究表明，SAC1通过将大量PI4P招募到病毒复制位点，在体外促进某些病毒的复制，包括丙型肝炎病毒(HCV)和爱知病毒。Popescu等人报道，在SAC1敲除(KO)的Huh7细胞中，SAC1缺失导致PI4P积累，可以阻止HBV包膜蛋白运输到多泡体(MVBs)，从而抑制HBV病毒核衣壳的包装和分泌，这表明SAC1可能是调控病毒组装和分泌的关键宿主细胞因子。到目前为止，尚不清楚SAC1是否调节HBV生命周期中的其他步骤。

技术实现思路

[0004]磷脂酰肌醇脂类在脂质信号转导、膜识别、载体转运和病毒复制等方面发挥着重要作用。先前的研究表明，以磷脂酰肌醇
‑4‑
磷酸(PI4P)为底物的SAC1磷脂酰肌醇磷酸酶(SACM1L/SAC1)在体外极大地影响了几种病毒的复制。然而，SAC1是否以及如何调节乙型肝炎病毒(HBV)的复制仍不清楚。在本专利技术的研究中，我们发现SAC1沉默显著增加HBV复制和乙型肝炎病毒表面抗原的产生，而SAC1过表达则产生相反的效果。
[0005]基于此，本申请提供了靶向SAC1的物质在制备治疗乙型肝炎的药物中的用途，所述药物使SAC1过表达。
[0006]在上述技术方案中，所述药物为SAC1促进剂。
[0007]过表达的SAC1抑制HBV的复制。
[0008]SAC1通过增强自噬体
‑
溶酶体融合介导的自噬降解来阻止乙型肝炎病毒的复制。
[0009]SAC1通过促进突触体相关蛋白29(SNAP29)和囊泡相关膜蛋白8(VAMP8)之间的相互作用来增强自噬体
‑
溶酶体融合。
[0010]本专利技术还提供了SAC1蛋白或表达SAC1蛋白的重组质粒在制备治疗乙型肝炎的药物中的应用。
[0011]所述表达SAC1蛋白的重组质粒是将编码SAC1蛋白的基因接入表达载体获得。
[0012]在上述技术方案中，所述重组质粒为SAC1
‑
myc质粒。
[0013]在上述技术方案中，所述药物包括药学上可接受的载体。
[0014]在上述技术方案中，所述药物为片剂、胶囊剂、注射剂、颗粒剂、散剂、丸剂或口服
液。
[0015]本专利技术的有益效果是：
[0016]本专利技术研究发现SAC1沉默显著增加HBV复制和乙型肝炎病毒表面抗原的产生，而SAC1过表达则产生相反的效果。在慢性HBV感染小鼠流体动力学注射模型中，SAC1过表达抑制了的HBV复制。经过进一步的机制探究发现，SAC1沉默增加了包含HBV的自噬体的数量以及自噬体膜上的PI4P水平，SAC1沉默通过抑制突触体相关蛋白29(SNAP29)和囊泡相关膜蛋白8(VAMP8)之间的相互作用来阻止自噬体
‑
溶酶体融合。本专利技术研究表明SAC1通过促进HBV病毒粒子的自噬降解来显著抑制HBV的复制，SAC1作为抗HBV治疗的一个新的潜在靶点有很好的应用前景。
[0017]本专利技术研究表明SAC1缺失导致高尔基
‑
ATG9囊泡
‑
自噬体大量PI4P积累，并通过抑制SNAP29和VAMP8之间的相互作用来阻断自噬
‑
溶酶体融合，从而减少HBV病毒粒子的自噬降解，增强HBV复制。本专利技术研究结果从磷脂代谢的角度提供了一种新的抗HBV策略。
附图说明
[0018]图1是SAC1沉默实验结果，其中，图A
‑
B是HepG2.2.15细胞中，转染40nM两种SAC1特异性的siRNA(siSAC1)或对照siRNA(siNC)，将pHBV1.3质粒和40nMsiSAC1或siNC共转染Huh7细胞，转染72h后，用ELISA法测定培养上清液中(A)HBsAg分泌量和细胞裂解液中(B)HBsAg含量；(C)转染48小时后，对细胞内HBsAg进行染色，最后用共聚焦显微镜成像(比例尺，25μm)，采用ImageJ软件分析HBsAg的荧光强度；(D)用蛋白印迹法分析SAC1和HBcAg的表达，以β
‑
actin作为对照；(E
‑
F)分别通过real
‑
time qPCR(E)和Southernblotting(F)检测HBVDNA水平；比例尺:25μm。*p<0.05；**p<0.01；Ns，不显著。
[0019]图2是AC1过表达对HBV复制和病毒基因表达的影响实验，其中，图A
‑
B是Huh7细胞中，将pHBV1.3质粒和SAC1
‑
myc或空载体pcDNA3.1共转染，转染72h后，ELISA法检测培养上清液(A)和细胞裂解液(B)中HBsAg的水平；(C)Huh7细胞中，将pHBV1.3质粒和GFP
‑
SAC1或控制载体pEGFP
‑
C1共转染，转染48小时后，对细胞进行HBsAg染色，最后用共聚焦显微镜成像(比例尺，25μm)；用ImageJ软件分析HBsAgf的荧光强度；(D)通过westernblotting检测SAC1和HBcAg的表达水平；(E
‑
F)分别用real
‑
time qPCR和Southernblotting检测HBVDNA水平；*p<0.05；**p<0.01；Ns，不显著。
[0020]图3是在慢性HBV感染小鼠模型中SAC1过表达实验结果，其中，(A)雄性C57BL/6小鼠通过高压尾静脉注射质粒pAAV
‑
HBV1.2和Sac1
‑
myc或空载体pcDNA3；(B)在注射后4、7、14、21、28、35、42天采集小鼠血清样本。ELISA法检测各时间点的血清学HBsAg；(C)在注射后第14天和第42天收集肝组织，从每组中各取两个样本进行免疫组化检测，肝组织切片用兔抗HBc抗体和山羊抗兔IgG二抗孵育，计数HBcAg阳性肝细胞(放大200倍)；(D
‑
E)分别通过real
‑
timeqPCR(D)和Southernblotting(E)分离和检测小鼠肝脏中HBVDNA水本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.靶向SAC1的物质在制备治疗乙型肝炎的药物中的用途，所述药物使SAC1过表达。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物为SAC1促进剂。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：过表达的SAC1抑制HBV的复制。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：SAC1通过增强自噬体
‑
溶酶体融合介导的自噬降解来阻止乙型肝炎病毒的复制。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：SAC1通过促进突触体相关蛋白29(SNAP29)和囊泡相关膜蛋白8(VAMP8)之间的相互作用来增强自噬体
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【专利技术属性】
技术研发人员：林永，郑佳欣，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：