ZDHHC9干扰片段在制备PD-L1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种ZDHHC9干扰片段在制备PD

【技术实现步骤摘要】
ZDHHC9干扰片段在制备PD
‑
L1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用


[0001]本专利技术属于医药生物
，具体涉及一种PD
‑
L1单抗肿瘤免疫治疗药物中的应用。

技术介绍

[0002]近些年来，免疫检查点阻断(Immune checkpointblockades，ICB)的相关疗法被全球科学家们广泛研究，并为一些恶性肿瘤，如恶性黑素瘤(melanoma，MM)和非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer，NSCLC)的治疗带来了巨大的临床益处。其中，阻断程序性细胞死亡蛋白1(PD
‑
1)与其配体(PD
‑
L1)相互作用的中和抗体在多肿瘤的临床应用，给肿瘤免疫治疗带来了突破性进展。但随着研究的深入，研究者们发现其仍有明显不足，仅有不到40％的肿瘤患者对PD
‑
L1/PD
‑
1阻断疗法有应答，或在治疗过程中存在初次或二次耐药。然而，这些现象的潜在发生机制尚不明确。最近的研究表明，肿瘤PD
‑
L1表达水平可作为评估抗PD
‑
L1/PD
‑
1治疗临床应答的一个重要因素，也是常见的生物标志物。因此，了解肿瘤PD
‑
L1调控的分子机制是至关重要的，这对于提高PD
‑
L1/PD
‑
1抗肿瘤的治疗效果及临床预后具有重要意义。
[0003]ZDHHC9是棕榈酰基转移酶家族23种成员之一，在棕榈酰化修饰(蛋白翻译后修饰的一种)中发挥作用。该分子在脑中高表达，研究发现在X
‑
连锁疾病中发挥作用。在血液疾病中发现，ZDHHC9可棕榈酰化修饰neuroblastomarat sarcoma(NRAS)，NRAS活性的异常增高被认为是肿瘤发生的重要机制。胰腺癌是消化道常见恶性肿瘤之一，在肿瘤领域素有“癌症之王”的称号。胰腺癌确诊后的五年生存率约10％，是预后最差的恶性肿瘤之一。其中，约90％为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升。胰腺癌早期的确诊率不高，手术死亡率较高，而治愈率很低。PD
‑
1/PD
‑
L1单抗治疗胰腺癌的效果不佳，急需确定其耐药机制从而提高治疗效果，并且ZDHHC9在胰腺癌中的作用尚未见报道，有待进一步研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的现状提供一种PD
‑
L1单抗肿瘤免疫检测或者免疫治疗辅助药物的新研发方向，开发新的联合用药的模式。
[0005]本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：
[0006]ZDHHC9的敲低在制备PD
‑
L1单抗肿瘤免疫治疗用药的检测试剂盒中的应用。
[0007]进一步地，所述ZDHHC9的敲低所需的慢病毒shRNA序列为：5
’‑
CAACCAGATTGTGAAACTGAA
‑3’
。
[0008]ZDHHC9的抑制剂与PD
‑
L1单抗药物联用在制备肿瘤免疫治疗辅助药物中的应用。
[0009]ZDHHC9的干扰片段与PD
‑
L1单抗药物联用在制备肿瘤免疫治疗辅助药物中的应用。
[0010]其中，ZDHHC9的RNA干扰片段可以为：
[0011](sense):5
’‑
GGCAAUAUUGUGAAGAACUTT
‑3’
；
[0012](anti
‑
sense):5
’‑
AGUUCUUCACAAUAUUGCCTT
‑3’
。
[0013]ZDHHC9的RNA干扰片段还可以为：
[0014](sense):5
’‑
CUCUUCUUCGCCUUUGAGUTT
‑3’
；
[0015](anti
‑
sense):5
’‑
ACUCAAAGGCGAAGAAGAGTT
‑3’
。
[0016]所述的肿瘤优选为胰腺癌(Pan02)，进一步优选为肺癌(LLC)、结直肠癌(MC38)或是乳腺癌(4T1)。
[0017]在现有的研究中，PD
‑
1阻断治疗显示出较为良好的抗癌作用，但其整体应答率仍不尽如人意。这种现象产生的部分原因认为可能与PD
‑
L1表达呈正相关，而目前我们对肿瘤PD
‑
L1的调控机制仍不明确。从我们展现的研究数据来看，主要分为四个部分。
[0018]第一部分：
[0019](1)我们通过检索人肿瘤公共数据库，发现ZDHHC9的mRNA表达水平在多种人类肿瘤样本中升高情况，并且ZDHHC9的表达与多种肿瘤患者的预后不良相关；
[0020](2)我们利用了人类蛋白图谱(Human ProteinAtlas，HPA)数据库和人胰腺癌标本的微阵列芯片验证了ZDHHC9在肿瘤组织蛋白表达水平显著升高；
[0021](3)蛋白质印迹技术(Western Blot，WB)和免疫荧光染色实验验证了在胰腺癌细胞中ZDHHC9的表达水平升高；
[0022](4)通过siRNA敲低肿瘤细胞上的ZDHHC9后，CCK8实验检测细胞增殖能力的变化，利用肿瘤细胞成球实验和流式细胞术研究ZDHHC9影响肿瘤细胞增殖的潜在机制；
[0023](5)我们利用短发卡RNA干扰技术构建了稳定敲低ZDHHC9(ZDHHC9 KD)的不同肿瘤细胞株(小鼠胰腺癌Pan02细胞、小鼠肺癌LLC细胞、小鼠结肠癌MC38细胞、小鼠的乳腺癌4T1细胞以及KRAS和TP53双突变小鼠自发肿瘤的胰腺癌细胞(LSL
‑
Kras
G12D/+
；LSL
‑
Trp53
R172H/+
；Pdx1
‑
Cre，KPC)，建立稳定敲低的细胞系，通过将这些ZDHHC9敲低的细胞或对照细胞接种在免疫功能正常小鼠皮下，记录瘤体的生长情况，探究干扰肿瘤细胞上的ZDHHC9对于小鼠皮下肿瘤生长过程的影响。
[0024]第二部分：
[0025]我们希望找到ZDHHC9影响肿瘤生长进展的潜在分子机制。
[0026](1)利用临床肿瘤样本数据库(TIMER及TISIDB)，分析人肿瘤标本中ZDHHC9的表达与肿瘤微环境的免疫细胞浸润与免疫效应分子的相关性；
[0027](2)通过体内对比免疫缺失的NOD/Shi
‑
scid IL2rgamma(null)(NOG)小鼠及野生型的C57BL/6小鼠皮下肿瘤生长情况，探究宿主免疫系统是否参与了敲低ZDHHC9介导的肿瘤抑制；
[0028](3)我们运用小鼠的Pan02和LLC皮下肿瘤模本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ZDHHC9的敲低在制备PD
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L1单抗肿瘤免疫治疗用药的检测试剂盒中的应用，所述肿瘤为胰腺癌、肺癌、结直肠癌或是乳腺癌。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述ZDHHC9的敲低所需的慢病毒shRNA序列为：5
’‑
CAACCAGATTGTGAAACTGAA
‑3’
。3.ZDHHC9的抑制剂与PD
‑
L1单抗药物联用在制备肿瘤免疫治疗辅助药物中的应用，所述肿瘤为胰腺癌、肺癌、结直肠癌或是乳腺癌。4.ZDHHC9的干扰片段与PD
‑
L1单抗药物联用在制备肿瘤免疫治疗辅助药物中的应用，所述肿瘤为胰腺癌、肺癌、结直肠癌或是乳腺癌。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：ZDHHC9的RNA干扰片段为：(sense):5...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈江帆，郭卫，林志卿，黄珂珂，郭辉，姚清清，
申请(专利权)人：温州医科大学附属眼视光医院，
类型：发明
国别省市：