抑制细菌生长和生物膜形成的鼠李糖乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株抑制细菌生长和生物膜形成的鼠李糖乳杆菌及其应用。所述的鼠李糖乳杆菌为grx603，保藏编号为CGMCC No.22693。本发明专利技术的鼠李糖乳杆菌grx603的菌体及其发酵上清均具有很好的抑菌、抑菌膜活性，在食品、药品、饲料和化妆品等微生物制剂领域中具有很好的应用前景。的应用前景。的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
抑制细菌生长和生物膜形成的鼠李糖乳杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于微生物领域，涉及一株抑制细菌生长和生物膜形成的鼠李糖乳杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]导致食品安全最主要的原因是致病菌的生长繁殖，食源性致病菌可引起人类疾病。控制食源性致病菌除了抑制致病菌快速增殖，抑制其产生生物膜是控制致病菌污染的关键因素。生物膜是自然界中80％以上细菌生长最为普遍的一种模式，是细菌吸附于生物及非生物表面，进而繁殖并分泌大量胞外多糖、胞外蛋白和DNA等使细菌彼此聚集、粘附并将自身包裹其中而形成的一种具有特殊微环境的结构性群体菌落。生物膜状态下的细菌无论其形态结构、生理生化特性、致病性、对药物的敏感性等均与浮游态菌有显著差异，对各种理化刺激的抗性增强，难以清除。细菌在食品原料、加工设备、医疗器械、自然环境、人和动物体内外形成生物膜是引起细菌污染的重要原因。因此，抑制致病菌增殖生长同时抑制其菌膜形成的抑菌剂具有广阔的应用前景。
[0003]乳酸菌在牛奶、肉类、蔬菜和酸面团的多种食品发酵中发挥着关键作用，其原因不仅是发酵可以产生特殊的风味，更重要的是乳酸菌及其代谢产物，如有机酸、过氧化氢、细菌素、多糖、表面活性剂、二氧化碳、双乙酰、凝集素及外囊泡等，会抑制有害微生物的生长繁殖，具有天然的抗菌、防腐、保鲜效果。乳酸链球菌素(Nisin)是乳酸链球菌产生的一种细菌素，能够抑制引起食品腐败的多种革兰氏阳性细菌，如肉毒梭菌、金黄色葡萄球菌，并对产生孢子的革兰氏阳性细菌有强烈的抑制作用，具有安全、高效、无毒、无副作用的性质，因此被作为食品防腐剂广泛应用于食品行业。
[0004]大部分种属的乳酸菌在国际被认为是最安全的菌种，是筛选天然抑菌物质的来源，除此之外，乳酸菌还具有调节肠道菌群、保持微生态平衡、增强机体免疫力等重要的生理功能。目前，乳酸菌来源的抑菌物质主要是发酵上清液中的代谢物，能够抑制部分致病菌的生长。但是，同时具有抑菌及抑菌膜活性的乳酸菌来源的抑菌物质未见报道。因此，筛选具有抑菌及抑菌膜活性的乳酸菌，可为开发控制食源性致病菌的生物安全抑菌剂提供物质和理论基础。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一株抑制细菌生长和生物膜形成的鼠李糖乳杆菌，该鼠李糖乳杆的发酵上清液中的代谢物以及菌体表面物质均具有抑菌能力。
[0006]专利技术人经过分离纯化，从广西巴马长寿人源样本中得到102株乳酸菌，通过琼脂孔扩散法初筛选出65株具有抑菌能力的乳酸菌，再对筛选出的65株乳酸菌发酵上清液及菌体的抑菌能力进行复筛，发现只有菌株YT的发酵上清液与菌体同时具有良好的抑菌能力，经形态学、16S rDNA鉴定菌株YT为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)，命名为grx603。该菌株已于2021年6月11日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
(CGMCC)保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.22693。
[0007]本专利技术还提供上述鼠李糖乳杆菌grx603的培养方法，具体为：将鼠李糖乳杆菌grx603接种于培养基中，37℃培养。
[0008]鼠李糖乳杆菌可以作为天然抗菌剂应用在食品、药品、饲料或化妆品等领域中。例如，益生型食品中加入鼠李糖乳杆菌不仅能够减少灭菌工序，并且不添加抑菌剂，提高了食品的安全性，生产周期短，延长了保质期。护肤品中添加鼠李糖乳杆菌菌体或鼠李糖乳杆菌衍生物可以在抑制痤疮丙酸杆菌的同时保护原有的皮肤屏障。
[0009]本专利技术还提供一种微生物制剂，所述的微生物制剂中包含鼠李糖乳杆菌grx603。
[0010]作为优选，所述的微生物制剂具有抑菌作用。
[0011]进一步地，本专利技术还提供上述微生物制剂在食品、药品、饲料或化妆品中的应用。
[0012]作为优选，所述的微生物制剂作为抑菌剂在食品、药品、饲料或化妆品中应用。
[0013]本专利技术所述的食品可以为本领域中鼠李糖乳杆菌作为益生菌常规使用的食品，例如发酵饮料、奶酪、香肠及菌粉等。
[0014]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0015]本专利技术的鼠李糖乳杆菌grx603的发酵上清与菌体同时具有良好的抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌作用。此外，鼠李糖乳杆菌grx603菌体还可以抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌生物膜的形成。
附图说明
[0016]图1为复筛后6株乳酸菌发酵上清液(A)及6株乳酸菌菌体(B、C)对沙门氏菌的抑菌结果。
[0017]图2为鼠李糖乳杆菌grx603菌落形态(A)和菌体形态(B)。
[0018]图3为鼠李糖乳杆菌grx603的16S rDNA电泳鉴定图。
[0019]图4为鼠李糖乳杆菌grx603生长曲线以及发酵上清液抑菌曲线。
[0020]图5为温度对鼠李糖乳杆菌grx603发酵上清液抑菌能力的影响。
[0021]图6为鼠李糖乳杆菌grx603的生长曲线以及菌体抑菌曲线。
[0022]图7为鼠李糖乳杆菌grx603菌体与枯草芽孢杆菌、沙门氏菌共孵育结果。
[0023]图8为不同浓度的鼠李糖乳杆菌grx603菌液对枯草芽孢杆菌生物膜及沙门氏菌生物膜形成的影响。
具体实施方式
[0024]下面结合具体实施例、附图和表对本专利技术作进一步详述。
[0025]本专利技术先从广西巴马长寿人源样本中经过分离纯化得到102株乳酸菌，以6种食品污染中常见细菌(枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、假单胞菌)为指示菌，通过琼脂孔扩散法初筛选出65株具有抑菌能力的乳酸菌，进一步以枯草芽孢杆菌和沙门氏菌为指示菌进行复筛，只有菌株YT的发酵上清液与菌体同时具有良好的抑菌能力，进而通过形态学、16S rDNA鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)，命名为grx603，并对其发酵上清抑菌特性及菌体细胞抑菌和抑生物膜能力进行测定。
[0026]下述实施例中的相关培养基及试剂配方以及测试方法如下。
[0027]1.试验菌株
[0028]乳酸菌：均由江苏省乳品生物技术与安全控制重点实验室分离保藏。
[0029]指示菌：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis CICC10012)，金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus CICC10201)，蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus ATCC11778)、大肠杆菌(Escherichia coli CICC10899)，沙门氏菌(Salmonella WX29)，假单胞菌(Pseudomonas brenneri CICC10271)购于中国工业微生物菌种保藏中心。
[0030]2.试验用培养基及试剂配方
[0031]MRS培养基(1L)：葡萄糖20.0g、胰蛋白胨10.0g、牛肉浸膏10.0g、酵母提取物5.0g、磷酸氢二钾2.0g、柠檬酸三铵2.0g、乙酸钠5.0g、吐温80 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抑制细菌生长和生物膜形成的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)grx603，保藏编号为CGMCC No.22693，保藏时间为2021年6月11日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.根据权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌grx603的培养方法，其特征在于，具体为：将鼠李糖乳杆菌grx603接种于培养基中，37℃培养。3.一种微生物制剂，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：关成冉，张雯娟，顾瑞霞，张臣臣，陈大卫，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：