经基因组修饰以表达正交受体的人免疫细胞制造技术

提供了包含编码工程改造的正交人CD122的多核苷酸的人淋巴细胞或髓样细胞，其中该淋巴细胞或髓样细胞确实表达天然人CD122。细胞或髓样细胞确实表达天然人CD122。细胞或髓样细胞确实表达天然人CD122。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经基因组修饰以表达正交受体的人免疫细胞
[0001]相关专利申请的交叉参考
[0002]本专利申请要求2020年4月6日提交的美国临时专利申请号63/005,975的优先权，该申请通过引用纳入本文用于所有目的。

技术介绍

[0003]受控操纵细胞的分化、发育和增殖，特别是工程改造的免疫细胞，具有重大的临床意义。特别地，T细胞已被工程改造用于治疗应用，例如识别和杀死癌细胞、细胞内病原体和参与自身免疫的细胞。通过选择性激活和扩增提供特定的功能且经导向以选择性攻击癌细胞的工程改造细胞(例如T细胞)，促进了工程改造细胞疗法在癌症治疗方面的应用。在一些过继免疫疗法的例子中，从对象的血液或肿瘤组织中分离出T细胞，对其进行离体处理，并回输进对象体内。因此，需要能够选择性地激活和/或增殖工程改造细胞免疫细胞的组合物和方法。
[0004]制造用于过继细胞转移(ACT)方案的细胞治疗产品的挑战是，这种“活的药物”需要密切控制其环境以保持活力和功能。在实践中，分离的细胞，无论是来自患者(自体)还是来自非该患者的单一供体来源(同种异体)，在离开对象或受控的培养条件后，开始迅速失去功能。在离开对象或受控培养条件时，成功地维持分离细胞的活力，使分离细胞维持或恢复功能，以重新插入细胞产品制造工作流程或患者体内。此外，在对象体内给予工程改造的细胞后，成功维持工程改造细胞的活性(即，活的工程改造细胞的持久性)有助于对此类细胞治疗的临床反应。
[0005]工程改造细胞疗法的临床应用的挑战是维持这些工程改造细胞的活性，以最大化其治疗效果。例如，工程改造T细胞(例如CAR
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T细胞)的临床应用的情况下，给药后维持工程改造细胞的活力的常见方法是全身给予多能性细胞因子，白细胞介素
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2通常以阿地白介素的形式给予，其为具有desAla1和C125S修饰的人IL2类似物。在用TIL或CAR
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T细胞进行过继细胞治疗的典型临床实践中，在输注TIL或CAR
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T细胞后不久，患者接受静脉内高剂量IL2(720,000IU/kg)，每8小时1次，直到最大耐受。这种随后的用IL2支持被认为能进一步增强细胞产品的存活和临床功效。
[0006]然而，IL2的全身给予与工程改造细胞群体之外的非特异性刺激作用有关，并且，特别是在高剂量下，与人对象的显著毒性有关。通常用于ACT的支持性方案的高剂量IL2的作用已被证明会导致显著毒性。从过继细胞转移(ACT)后使用IL2支持性疗法中观察到的最普遍的副作用包括寒战、高烧、低血压、少尿和由于全身炎症和毛细血管渗漏综合征引起的水肿以及自身免疫现象(例如白癜风或葡萄膜炎)的报告。此外，IL2在体内的寿命很短，需要经常给予IL2以维持工程改造T细胞处于激活状态。
[0007]尽管给予ACT方案产生的细胞在给予细胞产品后数月甚至数年内仍可检测到，但很大一部分(在某些情况下，大多数)给予的细胞进入静息状态或衰竭状态，并显示出治疗功效降低。过继转移细胞的这种活性丧失通常与临床功效的丧失相关，包括肿瘤性疾病的复发或复现。因此，基于细胞的疗法所面临的挑战是将所需的可调节的行为赋予转移的细
胞，其不受内源性信号转导通路的影响，与非靶向内源细胞的交叉反应性最小，并且在工程改造细胞群给予对象之后可以选择性地受控。
[0008]此外，在离体制备用于ACT治疗方案的细胞期间，经常用IL2刺激分离的免疫细胞的混合群体。由于IL2在激活免疫细胞中的多效性，在IL2的存在下培养混合的免疫细胞群，不仅导致细胞群中所需的治疗有用细胞(例如CAR
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T细胞或经历抗原的TIL)的扩增，而且也会从分离的组织(例如肿瘤或血液)样品的群中扩增多种其他类型的免疫细胞，其不提供细胞产品的临床益处，并可能有助于毒性。因此，目前用于ACT治疗方案的细胞制备的离体扩增方法经常导致细胞产品，其中所需的治疗有用细胞亚群被不期望的细胞污染，从而导致次优的细胞产品。由于毒性仍然是ACT的显著问题，因此本领域需要能够制备包含更均质群体的细胞产品的方法，其富含用于ACT治疗的所需有效细胞。
[0009]CD122是中等亲和力和高亲和力IL2受体复合物的组分。Sockolosky,等(Science(2018)359:1037
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1042)和Garcia,等(美国专利申请公开US2018/0228841A1公开于2018年8月16日)描述了正交IL2/CD122配体/受体系统以促进选择性刺激工程改造以表达正交CD122的细胞。本专利申请通过引用WO 2019/104092和US 2018
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0228842 A1)的公开将其全文纳入。表达正交(orthogonal)CD122的工程改造免疫细胞和与这种正交CD122的对应同源正交配体(“IL2直向同源物(IL2 ortholog)”)接触，促进这种表达正交CD122的工程改造免疫细胞的特异性激活和/或增殖。特别是正交IL2受体配体复合物提供了细胞的混合群体，特别是T细胞的混合群体中工程改造以表达正交受体的细胞的选择性激活和/或扩增。

技术实现思路

[0010]本专利技术提供了在过继细胞治疗实践中有用的方法和组合物。
[0011]在一些实施方式中，本专利技术提供了工程改造的人免疫细胞，其包含基因组整合的编码正交人CD122(hoCD122)多肽的多核苷酸。在一些实施方式中，本专利技术提供了一种工程改造的人免疫细胞，其包含基因组整合的编码hoCD122的多核苷酸，hoCD122操作性地连接至至少一个在人免疫细胞中具有功能的表达控制序列，以在工程改造的人免疫细胞中实现hoCD122的表达。在一些实施方式中，表达hoCD122的工程改造的人免疫细胞也表达野生型人CD122。在其他实施方式中，经基因组修饰以表达hoCD122的工程改造的人免疫不表达野生型人CD122。
[0012]在一些实施方式中，本专利技术提供了一种工程改造的人免疫细胞，其包含基因组整合的编码正交嵌合受体(“OCR”)的多核苷酸，该多核苷酸操作性地连接至至少一个在人免疫细胞中具有功能的表达控制序列，以在工程改造的人免疫细胞中实现正交嵌合受体的表达，正交嵌合受体包括正交hCD122的胞外结构域，其操作性地连接至异源受体亚基的胞内结构域(ICD)，包括但不限于IL
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7受体α亚基(IL
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7Rα)、IL
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9受体α亚基(IL
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9Rα)、IL
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15R受体α亚基(IL
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15Rα)、IL
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21受体(IL
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21R)、促红细胞生成素受体(EpoR)或IL
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4受体α亚基(IL
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4Rα)的ICD，或其功能片段。在一些实施方式中，经基因组修饰以表达正交嵌合受体的工程改造的人免疫细胞还表达野生型hCD122。在其他实施方式中，包含基因组整合的编码正交嵌合受体的多核苷酸的工程改造人免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含编码工程改造的hoCD122的多核苷酸的人淋巴细胞或髓样细胞，其中所述淋巴细胞或髓样细胞确实表达天然人CD122。2.如权利要求1所述的人淋巴细胞或髓样细胞，其中所述编码工程改造的hoCD122的多核苷酸插入位于内源性人CD122基因座。3.如权利要求1或2所述的人淋巴细胞或髓样细胞，其中所述hoCD122是相对于天然人CD122在选自R41、R42、Q70、K71、T73、T74、V75、S132、H133、Y134、F135、E136和Q214的一个或多个残基处修饰的。4.如权利要求1或2所述的人淋巴细胞或髓样细胞，其中所述hoCD122是相对于天然人CD122在H133和Y134处修饰的。5.如权利要求3或4所述的人淋巴细胞或髓样细胞，其中所述工程改造的hoCD122包含与SEQ ID NO:1至少95％同一性的氨基酸序列。6.如权利要求5所述的人淋巴细胞或髓样细胞，其中所述工程改造的hoCD122包含修饰为具有H133D和Y134F取代的SEQ ID NO:1。7.如权利要求1或2所述的人淋巴细胞或髓样细胞，其中所述淋巴细胞还表达嵌合抗原受体(CAR)。8.如权利要求7所述的人淋巴细胞或髓样细胞，其中所述CAR选自下组：CD19嵌合抗原受体(CAR)、B
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细胞成熟抗原(BCMA)CAR、CD123 CAR、CD20CAR、CD22 CAR、CD30 CAR、CD70 CAR、Lewis Y CAR、GD3 CAR、GD3CAR、间皮素CAR、ROR CAR、CD44 CAR、CD171 CAR、EGP2 CAR、EphA2CAR、ErbB2 CAR、ErbB3/4CAR、FAP CAR、FAR CAR、IL11Ra CAR、PSCACAR、PSMACAR和NCAM CAR。9.如权利要求1
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8中任一项所述的人淋巴细胞或髓样细胞，其中所述淋巴细胞或髓样细胞缺失下组的一个或多个：T细胞受体α(TCRA)、T细胞受体β(TCRB)、PD
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1、细胞毒性T
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淋巴细胞
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相关蛋白4(CTLA4)或β2微球蛋白(B2M)。10.如权利要求1
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9中任一项所述的人淋巴细胞或髓样细胞，其中所述细胞是T细胞。11.一种扩增如权利要求1
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10中任一项所述的人淋巴细胞或髓样细胞的方法，所述方法包括，使所述人淋巴细胞或髓样细胞与正交人IL
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2接触，其中所述正交人IL
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2与所述工程改造的hoCD122的接触导致所述人淋巴细胞或髓样细胞扩增。12.一种制造人淋巴细胞或髓样细胞的方法，所述细胞包含编码工程改造的hoCD122位于内源性人CD122基因座的多核苷酸，所述方法包括，提供人淋巴细胞或髓样细胞；和在所述淋巴细胞或髓样细胞的内源性人CD122基因座处引入所述多核苷酸，从而制造包含编码工程改造的hoCD122位于内源性人CD122基因座处的多核苷酸的人淋巴细胞。13.如权利要求12所述的方法，其中所述引入还包括将编码嵌合抗原受体(CAR)
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多核苷酸引入所述淋巴细胞或髓样细胞。14.如权利要求13所述的方法，其中所述编码工程改造的hoCD122的多核苷酸和编码CAR的多核苷酸是引入淋巴细胞或髓样细胞的核酸的各个部分。15.如权利要求14所述的方法，其中所述工程改造的hoCD122和所述CAR编码为由自裂解肽序列分隔的单个融合蛋白。
16.如权利要求13所述的方法，其中所述编码工程改造的hoCD122的多核苷酸和编码CAR的多核苷酸是在一天内各自引入淋巴细胞的分开的核酸部分。17.如权利要求12所述的方法，其中所述hoCD122是相对于天然人CD122在选自R41、R42、Q...

【专利技术属性】
技术研发人员：PJ，
申请(专利权)人：辛德凯因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：